生化检验项目校准,泸州市人民医院,校准：在规定条件下，为确定测量仪器(或测量系统)所指示的量值，或实物量具(或参考物质)所代表的值，与对应的由标准所复现的量值之间关系的一组操作。,仪器的性能验证： 零点漂移 波长准确度及重复性 杂散光 吸光度正确度 吸光度重复性 吸光度线性误差 交叉污染率 温度正确度 比色杯间差距 检测项目校准,参考方法,决定性方法,厂家方法,常规分析,一级标准品,二级标准品,校 准 品,校准目的是准确度的传递,溯 源,校 准,项目校准主要涉及内容,校准方法的选择 校准品的选择及准备 校准频率的选择 校准后的验证 问题讨论,校准方法的选择,K因子法（+ -）： 理论k值：根据理论摩尔消光系数来计算。通常试剂生产厂家给出的k值都属于。 实测K值：是根据仪器实测的摩尔消光系数来设置K值 校准k值：是根据仪器当前的实际状态，试剂的稳定性等通过校准品校准后得到的K值。 K因数法适用的分析方法有一点终点法，两点终点法，两点速率法，多点速率法。,线性校准（Linear）：其反应为线性（直线），一般只需一个校准品进行校准。,非线性法：又称非直线性校准法 非线性法包括logit-log法、指数函数法、样条函数法等方法 Logit-log3p对数函数法中的一种，适用于浓度升高而吸光度表现为收束的工作曲线。P表示参数之意，由3个参数（S1Abs、k、a）参与计算。S1Abs表示试剂空白，K表示校准所得斜率，a表示近似常数。,logit-log4p对数函数法中的一种，适用于浓度升高而吸光度表现为收束的工作曲线。,样条函数法（spline）：是将每一标准液测定的吸光度连接起来（点对点），形成一个完整曲线，即为曲线拟合。该曲线拟合优于折线法校准。,logit-logXp与样条函数法,抛物线型(左下图)，则多考虑用logic方法拟合。 曲线类型不确定时，或校准曲线类型如图12-37所示的S型非线性校准类型，则多考虑Splain方法拟合。,校准品的选择及准备,校准品：含有已知量的欲测物，用以校准该测定方法的数值，它与该方法、试剂、仪器是相关联的。校准品的作用是为了减少或消除仪器、试剂等造成的系统性误差。 最好为人血清基质，减少基质效应 仪器、试剂、校准品的配套性 如有可能校准品应溯源到参考方法或参考物质 要有明确的不确定度,冰冻产品的处理步骤：从-70或-20冰箱中取出样本，置室温（18-25）下平衡，使之完全融化，温和混匀。 冻干产品的复溶步骤： 从冰箱中取出样本，置室温（18-25）下平衡，并放置在水平桌面上，轻拍小瓶，以确保所有物质已沉淀在该小瓶底部，小心拔开胶塞，采用已校准的移液管沿瓶壁缓慢精确加入规定体积的去离子水，压胶塞到原位后置室温下使之完全溶解，温和混匀。 应按厂家提供说明书操作。,校准品浓度水平及个数选择 校准至少包含你需要报告结果的内容/范围。 校准范围也定义为分析方法的工作范围。 个数要与仪器要求相匹配,案例分析,一、现象： 某品牌HCY试剂（仪器：雅培 C8000），校准无法通过，出现“校准失败”的报警。 试剂参数为：Primary wavelength：340nm； Secondary wavelength：700nm； Main read time：31-33； Blank read time：26-28； Sample volume：10ul； R1 reagent volume：185ul； R2 reagent volume：50ul； Calibration method：Spline； 校准品个数设置：3； 浓度分别设置为：0、10、33umol/L。,二、了解情况： 查看校准结果，发现其每个浓度的吸光度实际在该仪器上已做出测定，分别为：0：-0.0027 10：-0.0344 33：-0.0738，但参与最终结果计算的Cal Factor（校准因数）却显示为0，说明该仪器并未通过所测定的吸光度进行曲线拟合，故出现“校准失败”报警。,三、处理： 分别对10umol/L、33umol/L的校准品进行对倍稀释，得到5umol/L、16.5umol/L浓度的校准； 把参数中校准品个数修改为：5； 浓度设置修改为0、5、10、16.5、33umol/L。 仍采用Spline定标模式重新进行校准，后校准顺利通过，结果如下：,5、之后校准显示通过，质控在控，证明校准成功,四、分析： 全自动生化分析仪的校准模式设置中均有线性或非线性的选择。当我们对其进行设置时，会根据试剂盒的反应原理选择合适的校准模式。 通常情况下，常规的生化项目我们会选择线性模式校准，而免疫比浊项目我们会选择非线性模式校准。 若选择线性校准，往往我们只需带一个校准品进行两点校准即可。 若选择非线性校准时，我们会带多个浓度校准品进行多点校准。,5.不同的仪器，在做非线性校准时所要求的校准品个数是不同的。 例如： 日立、奥林巴斯等仪器，要求至少带三个浓度的校准品即可进行非线性拟合； 贝克曼、东芝等仪器，则要求至少带四个浓度的校准品才进行非线性拟合。 五、总结： 我们在进行新项目实验前，除了选择正确的校准模式外，还要根据该仪器的性能特点，选择符合要求的校准品个数，以保证实验的顺利进行。,校准频率的选择,1.1 实验室用房选址： BSL-2级实验室在选址和建筑物间距方面并没有特殊要求，也不要求有单独的建筑物，不过BSL-2级实验在布局上还是强调要与办公用房和其它公共用房隔离，尽量自成一区或设在建筑物的一端，远离公共活动场所，屏蔽电磁，震动。一般选择2-3楼层为宜，通风，宽敞明亮，靠近整栋建筑污物电梯，附近有厕所。,理想状况下进行每批次检测前都应进行 试剂改变了种类或更换了批号 仪器进行了大的维护维修或更换了重要的配件，如光源灯、滤光片等 室内质控出现了趋势性变化或飘移（系统性误差）；或者超出了实验室规定接受限，采取了一般性纠正措施后，不能识别和纠正问题时 厂家试剂有明确校准时限规定的,校准后的验证,校准后用校准品当样本进行测试，看其值与定值之间的差异 测定室内质控，看结果是否在控。 参加室间质评或返测已知浓度的室间质评样本。,记录每次校准结果，与之前的校正结果进行比较。,问题讨论,定值质控品是否可以替代校准品？ 空白校准的选择？ K值究竟该选择理论、实测、校准K值？ 零度水平是否均可以用水来代替？（LPa） 校准品的保存与使用？ 室内质控失控是否都应进行校准纠正？ 不同批号的校准品使用和对k值的影响？ 校准品是否可以通用于各仪器和方法，测量次 数？,谢谢！,