徐州医学院 硕士学位论文 高糖及TGF-1对大鼠肾小球系膜细胞的影响及罗格列酮的干预 研究 姓名：郝海荣 申请学位级别：硕士 专业：内科学（内分泌） 指导教师：李伟 20090401 徐州医学院硕士学位论文 3 缩缩 略略 词词 表表 Abbreviation 缩略词缩略词 英文全称英文全称 中文全称中文全称 Ang- Renin-angiotensin system, RAS 肾素-血管紧张素系统 Col- Collagen type 型胶原 DCCT Diabetes Control and Complications Trial 糖尿病控制和并发症实验 DM Diabetes mellitus 糖尿病 DMEM Dulbeco,s modified eagle medium Dulbeco 极限必需培养基 DN Diabetic nephropathy 糖尿病肾病 ECM Extracellular matrix 细胞外基质 ESRD End-stage renal disease 终末期肾病 FBS Fetal bovine serum 胎牛血清 FN Fibronectin 纤维连接蛋白 RSG Rosiglitazone 罗格列酮 GLUT-1 Glucose Transporter 1 葡萄糖转运蛋白 1 GMCs Glomerular mesangial cells 肾小球系膜细胞 IHC Immunohistochemistry 免疫组化 MAU Microalbuminuria 尿微量白蛋白 mRNA Messenger RNA 信使 RAN PBS Phosphate-buffered saline 磷酸盐缓冲液 PPAR Peroxisome proliferator-activated receptor gamma 过氧化酶体增殖物激活受 体 RT-PCR Reverse transcriptase polymerase 逆转录酶聚合酶链式反应 徐州医学院硕士学位论文 4 chain reaction STZ Streptozotocin 链脲佐菌素 TZDs Thiazolidinedions s 噻唑烷二酮类药物 TIMPs Tissue inhibitor of metalloproteinase 基质金属蛋白酶抑制剂 UAER Urinary Albuminexcretion Rate 尿白蛋白排泄率 徐州医学院硕士学位论文 51 最后，再一次对百忙之中抽出时间对我的论文进行评审并提出宝贵意见的各 位专家、教授表示衷心的感谢 论文独创性声明论文独创性声明 本论文 高糖及TGF-1对大鼠肾小球系膜细胞的影响及罗格列酮干预研究究 是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。论文中除了特别加以 标注和致谢的地方外，不包含其他人或机构已经发表或撰写过的研究成果。其他 同志对本研究的启发和所做的贡献均已在论文中作了明确的声明并表示了谢意。 作者签名： 日期： 200 年 月 论文使用授权声明论文使用授权声明 本人完全了解徐州医学院有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保 留送交论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅；学校可以公布论文的 全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存论文。保密的论文在 解密后遵守此规定。 作者签名： 导师签名： 日期： 200 年 月 徐州医学院硕士学位论文 52 论文审阅认定书论文审阅认定书 研究生 郝海荣 在规定的学习年限内，按照研究生培养方案的要求，完成了 研究生课程的学习，成绩合格；在我的指导下完成本学位论文，经审阅，论文中 的观点、数据、表述和结构为我所认同，论文撰写格式符合学校的相关规定，同 意将本论文作为学位申请论文送专家评审。 导师签名： 日期： 200 年 月 徐州医学院硕士学位论文 5 高糖及 TGF-1 对大鼠肾小球系膜细胞 的影响及罗格列酮的干预作用 中中 文文 摘摘 要要 目的目的 通过观察罗格列酮对高糖及 TGF-1 环境中培养的大鼠肾小球系膜细胞 增殖、肥大及 Col-基因和蛋白表达的影响，以阐明其肾脏保护作用机制，并探 讨 DN 的发病机制。 方法方法 用RSG干预高糖或TGF-1环境中培养的大鼠肾小球系膜细胞，将实验分 为正常组(NG)、高糖组(HG)、TGF-1刺激组(TGF) 、RSG+正常组(RN)、RSG+高糖 组(RH)、RSG+ TGF-1组(RT)。运用MTT比色法测量细胞增殖、RT-PCR检测TGF- 1和Col-mRNA的表达、免疫组化检测TGF-1和Col-蛋白的表达 、倒置显微镜 观察肾小球系膜细胞(Glomerular mesangial cells ,GMCs)的形态变化。 结果结果 高糖可以促进肾小球系膜细胞的增殖，增殖速度先加快后减慢，细胞 体积逐渐增大。高糖可刺激肾小球系膜细胞中TGF-1 、Col-表达增加，但 高糖刺激后肾小球系膜细胞中TGF-1的表达在时间上早于Col-。TGF-1有 促进肾小球系膜细胞肥大但抑制其增殖的功能，并刺激肾小球系膜细胞中Col- 的生成。罗格列酮能够纠正TGF-1诱导的肾小球系膜细胞的肥大，并抑制TGF- 1及Col-的生成。 结论结论 罗格列酮不仅抑制TGF-1的生成还可以抑制TGF-1的功能，进而实现 糖尿病肾病的肾脏保护功能。 关键词关键词 罗格列酮；肾小球系膜细胞；转化生长因子1；型胶原纤维；糖 尿病肾病 徐州医学院硕士学位论文 6 The effects of high glucose and TGF-1 on rat mesangial cells and interventional effects of rosiglitazone Abstract Objective To elucidate the mechanisms of renal protection of rosiglitazone and explore the mechanisms of diabetic nephropathy ( DN ) by investigating the effects of rosiglitazone on the proliferation and hypertrophy of and expression of Col- in rat mesengial cells cultured in the presence of TGF-1 and high glucose. methods Rat mesangial cells cultured in the presence of TGF-1 or high glucose were treated with rosiglitazone, and were divided into normal glucose group (NG), high glucose group (HG), TGF-1 stimulated group (TGF), rosiglitazone intervention normal glucose group (RN) rosiglitazone intervention high glucose group (RH) and rosiglitazone intervention TGF-1 stimulated group (RT). Mesangial cells were cultured. Cell proliferation were determined by MTT assay method. The mRNA expression of TGF-1 and Col- in mesangial cells was determined by RT-PCR. The protein expression of TGF-1 and Col- in mesangial cells was determined by immunohistochemistry. Inverted microscope was used to detected the effects of rosiglitazone on morphological changes of glomerular mesangial cells. Results High glucose stimulated the proliferation of mesangial cells, which was accelerated at first and then decelerated, with the presence of gradual enlargement of the mesangial cells. High glucose stimulatec the expression of TGF-1 and Col-IV in mesangial cells. And the expression of TGF-1 stimulated by high glucose preceded that of Col-IV. TGF-1 could stimulate hypertrophy but inhibite the proliferation of mesangial cells. It also could promote the expression of Col-IV in mesangial cells. Rosiglitazone could reverse TGF-1 induced hypertrophy of glomerular mesangial cells and inhibit the generation of TGF-1 and Col-. Conclusion Rosiglitazone can depress the adverse effects of TGF-1 whereby it 徐州医学院硕士学位论文 7 maintains the renal function in diabetic nephrophathy. Key words Rosiglitazone; Glomerular mesangial cell; Transforming growth factor1; Collagen ; Diabetic nephropathy 徐州医学院硕士学位论文 8 前 言 前 言 糖尿病的发病率以惊人的速度在增加，预测全球糖尿病的发病人数将从1995 年的1.18亿上升到2010年的2.20亿1-2。中国是个糖尿病大国，据估计我国目前糖尿 病患病人数超过4000万，居世界第二。随着糖尿病发病率的不断升高，相伴随的 各种并发症也不断地增加。糖尿病肾病是2型糖尿病主要的慢性微血管并发症之 一，也是终末期肾功能衰竭的主要病因。多项研究表明，糖尿病肾病的发生机制 十分复杂，涉及生化代谢、免疫、凝血机制、遗传因素等多个环节。国外一些大 规模多中心的研究也令人信服的肯定了高血糖在DN发生发展中的作用，如糖尿病 控制和并发症实验（Diabetes Control and Complications Trial,DCCT）经过10年时间 证实，1型糖尿病（Diabetes mellitus ,DM）经过胰岛素治疗维持血糖稳定，可以延 缓糖尿病肾病（Diabetic nephropathy ,DN）的进展3。但是有些糖尿病患者，接受 胰岛素强化治疗后，即使血糖完全达标，仍不能完全阻止微血管并发症的发生和 发展。另外，