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资源描述
荧光仪控制软件使用说明仪器准备检查实验用仪器配件是否齐全,至少应包括荧光仪、荧光仪内部引出的实验专用控制线、信号转接板、B型USB连接线、电源适配器。硬件驱动1. 将附带的“FT232 Driver.rar”解压到本地目录下。2. 将USB连接线到信号转接板上,并插入电脑。3. 电脑提示安装新硬件。在“设备管理器”中可查看到有一个未安装驱动的硬件。4. 右键点击该硬件,选择“更新驱动程序”,进入“硬件更新向导”。点击“从列表或指定位置安装”5. 勾选“在搜索中包括这个位置”,并通过“浏览”按钮,将路径选定到解压好的FT232驱动目录下,点击“确定”6. 点击下一步,直至完成即可。7. 完成后将再次弹出未安装硬件提示,重复以上步骤即可。8. 从设备管理器中查看该硬件的串口号,如图所示为com4设置流程1. 将适配器接入荧光仪并开机,开机后运动模块会将试剂卡槽送入仪器内部。控制线接入信号转换板。2. 打开配套软件:华科瑞公司荧光仪调试程序。3. 在“通信端口”中,选择对应端口号,点击“打开”。4. 点击“控制测试”中的“出卡”按钮,然后将荧光强度较强的荧光试剂卡插入仪器。5. 点击“测试”按钮,仪器对试剂卡进行一次扫描,并将荧光亮度曲线画在软件窗口中,例如下图,图中,X轴为位置信息,Y轴为对应位置上的荧光亮度。左侧小波峰为荧光浓度较低的T线,右侧波峰为荧光浓度较高的C线。6. 如出现下图的情况,说明“测量起始位”尚未调试,需按如下步骤调整参数设置。如图为同一张试剂卡,在扫描位置未做调试时有可能出现的偏移情况。Test_1(红线)为正常波峰,左边T峰、右边C锋对称分布,较合理。Test_2(绿线)为曲线偏左情况,曲线显示了C峰,左侧T峰未进入窗口。Test_3(加粗黄线)为曲线偏右,曲线显示了T峰,右侧C峰未进入窗口。调试方法: 进入“设置”选项卡,在“测量起始位置设置”中,点击“获取”以获取当前起始位置数据,根据该数值及波峰所在位置适当进行调整(设定值波峰所在位置),点击“设置”后生效,设定值将保存到仪器控制芯片中。 再次进入“曲线”选项卡进行测试,观察是否左移或右移到合适位置。 重复以上两步直到C、T线对称为止。注:“测量起始位置”中的参数只需设置一次即可,之后的正常实验过程中不需要重新设定,除非因试剂条划线位置修改或其它原因造成C、T线位置不准确时,才需要再次修改。软件打开时,“测量起始位置”中显示的数值并非保存在仪器控制芯片中的设定值,所以在修改设定值之前,必须先点击“获取”,然后再根据获取到的设定值进行修改。7. 设置找峰范围:先用试剂卡进行一次测试,假设曲线如图:1调试软件规定,两个波峰都显示在曲线窗口中时,T线必须是左侧波峰,C线必须为右侧波峰。如互换将容易导致计算或写入项目标准曲线时的人为错误。如果观察到C线在左侧,可在“设置”选项卡中勾选“首尾数据反向”,再次测试时,C、T峰将以X轴中点为中心轴做反转,将C峰转到右侧,T峰转到左侧。注:C、T峰可根据试剂条上已知的荧光强度区分,荧光强度越大,峰值越高。2观察T、C峰所在的大概X轴位置,如图T峰大约在80位置,C峰大约在210位置,则可大致确定为第1峰位置20140,第2峰位置150250。波峰宽度根据上图可大致设为50(具体设定值需通过后期实验确定)。根据以上设定值,在“设置”选项卡,把50填入波峰宽度,波峰数量填入2,第1峰位置填入20140,第2峰位置150250;找峰范围设置完毕,现在可点击“退出”按钮,退出程序的同时系统自动保存“设置”页面中的所有参数,下次打开自动恢复该参数。实验流程1. 打开串口:插上信号转换板,仪器开机,在“设备管理器”中查看对应串口号,将该串口号输入“曲线”页面中的“端口”栏,点击打开,状态栏将显示串口打开成功。2. 点击“出卡”,让仪器开机时自动进入仪器内部的卡槽出仓。如点击无效,请检查串口是否打开,仪器控制线是否接上控制板。3. 预测试:插入试剂卡,点击“测试”,仪器将扫描一次,并将结果曲线显示到软件上。查看曲线T、C波峰位置,查看“设置”页面中的找峰范围是否正确,“首尾数据反向”是否正确。“波峰宽度”是否正确。4. 进入“计算”页面,查看“波峰1位置”是否正确,“波峰2位置”是否正确。如位置正确,软件即可正确计算面积比。5. 正常实验测试插入试剂卡,点击“测试”按钮,在软件右下方,将显示该试剂卡面积比。用不同浓度的试剂卡不断测试,通过曲线窗口可直观观察出浓度的变化过程。测试完成后,点击“保存”按钮,将提示保存两次文件,分别为原始数据及面积比数据,文件名自动以日期时间命名,用户可根据实际需要修改名称。保存后的txt文件为面积比数据,用户可将该数据代入到标准曲线计算器中进行拟合计算。保存后的bat文件为原始数据,每一竖列为一次测量数据,将原始数据复制到Excel中,可通过插入折线图还原曲线。也可通过Excel复制其中的一列数据,粘贴到软件的“读入波形数据”中,点击“计算波形数据”,在软件中还原曲线并可重新计算或选择其它计算方式。如不需要保存数据、曲线杂乱或错误,可点击“清除”按钮清除所有曲线。注意,清除后曲线数据、计算结果都将丢失。6. 拟合标准曲线将测到的面积比及已知的浓度代入到ELISACalc计算器中,可选择曲线模型,并计算出对应的拟合参数。详细过程请参考“ELISA Calc回归拟合计算程序使用教程”。7. 将ELISA Calc计算器算出的参数,复制到“计算”页面中的计算参数中,即可根据面积比,直接反算出浓度值。注:点击“退出”按钮,可将该计算参数保存到软件中,下次打开软件自动调入该参数。其它功能曲线页面 “图形显示窗口”:Y轴显示为所测到荧光强度,X轴为位置信息。Y轴会根据显示的曲线自动更改坐标轴的最大值、最小值及刻度,所以查看荧光强度时需注意Y轴变化。 在图形窗口上,按住鼠标左键,向右下角方向画出一个方框,松开左键,可放大选中方框中的图形。 按住鼠标左键,向左上角方向随意画方框,松开左键,可恢复原始缩放比例。 按住右键,即可拖动坐标轴,便于观察曲线。“显示选择”:可选取连续多次测试中的某一次测试曲线,进行波形处理,包括滤波,基线调整等。常用于高亮显示某一条测试曲线,选取曲线后勾选“显示数据点”即可。“通信端口”:串口号选择。根据设备管理器中显示的串口号填入,点击“打开”即可激活该串口。每次打开软件后,都需要先打开串口再进行其它操作。“控制测试”“测试”:最常用功能,点击即开始一次扫描测试过程。“开灯”:点击后激发光将点亮,用于检验激发光是否正常,该功能不常用。“关灯”:熄灭激发光。“测当前点”:读取当前传感器接收到的光强度AD值,显示到“当前点值”的方框中。该功能可用于观察某一固定点荧光变化的过程。点击“开灯”后,将卡槽推入一定的距离,点击“测当前点”。如当前点为试剂卡NC膜上划线位置,则可读取到该点值。如保持测量位置不变,每隔精确的1秒或若干秒点击一次,可观察到荧光强度随时间变化的规律(读取到的荧光值保存在“数据”页面)。“进卡”:将卡槽送入仪器内部。“出卡”:将卡槽送出。“数据处理”“清除”:用于清除显示在图形窗口中的曲线,包括原始数据和计算结果等,该操作不可逆。“滤波”:对“显示选择”中选定的某条曲线做滤波处理,让曲线更加平滑。“保存”:将曲线原始数据、面积计算结果保存到电脑上。保存时会提示保存两次,保存为两个文件,其中后缀为bat的文件为原始数据,txt文件为面积及面积比。用户可将txt文件中的面积比数据,代入到标准曲线计算器中进行拟合计算。bat原始数据,每一竖列为一次测量数据,将原始数据复制到Excel中,可通过插入折线图还原曲线。也可通过Excel复制其中的一列数据,粘贴到软件的“读入波形数据”中,点击“计算波形数据”,在软件中还原曲线并重新计算或选择其它计算方式。“复制”:将所有测试的原始数据复制到系统剪切板中,可粘贴到Excel中保存。“波形处理”“基线上移”:将“显示选择”中选取的某条曲线,整体上移下方文本框中填入的数值。“基线下移”:将“显示选择”中选取的某条曲线,整体下移下方文本框中填入的数值。“基线到0”:将“显示选择”中选取的某条曲线,整体下移至基线为0的程度。“显示数据点”:将“显示选择”中选取的某条曲线的每一个数据点显示出来,可将数据点进行小范围移动从而改变曲线。一般只作为高亮显示某条曲线功能。“退出”:将软件关闭,并将软件的设定值,如端口号、“设置”页中的设定值等进行保存,以便下次打开软件时不需要重新设定。右侧文本框:控制软件最大化后将显示,用于显示面积比,省去每次测试后需要在“计算”页才能看到面积比的麻烦。 数据页面 显示原始数据及“测当前点”中的测试数据。计算页面 “面积比” “T/C”:面积比计算方式,T线面积除以C线面积。 “C/T”:面积比计算方式,C线面积除以T线面积。 “计算公式”提供多种数学模型,选定后使用该模型进行拟合反算。拟合参数则需要根据“ELISA计算器”中的计算结果填写。“计算参数”拟合回归的具体参数,根据“ELISA计算器”计算结果填写。“计算器”提供计算功能,根据选定的数学模型及参数,填入T/C,算出结果值。“计算测量结果”“峰面积处理”:有三种计算峰面积方式,现假定波峰宽度设定为50,则每种算法图例如下。图一为原始曲线,图二为“基线上面积”,图三为“整个波面积”,图四为“峰左右分别计算面积”一般选取“基线上的面积”。“计算内容”“只计算T/C”:每次测试结束后的计算过程中,只计算面积比,不根据公式计算浓度值。“按公式计算结果”:计算完面积比后,再根据计算方程及参数,计算出浓度值。如计算参数不符合公式要求,如A,B,C,D都为1时,四参数方程没有意义,则会弹出计算错误窗口,计算结果无效。“计算结果”:除了每次测量结束后会自动计算一次结果外,还可以手动点击计算按钮,进行手动计算,在点击“计算”之前,可对找峰范围、波峰宽度、计算参数、峰面积处理、计算内容等参数进行修改。点击“计算”即可再次对最后一条曲线进行重计算。可直观看到修改的参数对计算结果产生的影响。设置页面“测量波形设置” “首尾数据反向”:勾选后,下次检测后,C、T峰将以X轴中点为对称轴做反转。如图,红色线为没有勾选时的曲线,绿色线为勾选后的曲线。 “波峰宽度”、“第1峰位置”、“第2峰位置”等参数定义,请参考本文“设置流程”中的第7点。“下位机设置”“卡槽总长度”:运动导轨的总长,一般设定为1400。点击“获取”可读取到仪器内部控制芯片中已经存储的设定值。修改完成后,点击“设置”可将修改好的设定值传输并保存到仪器内部控制芯片中。该值出厂后,一般不需要进行修改。如误修改,恢复1400设定值即可。“测量起始位”:该参数控制传感器在试剂卡上扫描的起点位置,设定不同值,可观察到图形窗口中的曲线在向左或向右移动,移动至T、C峰对称分布时,为最佳状态。“测量窗长度”:控制传感器在试剂卡上扫描的范围,该值越大,扫描的试剂卡长度越大,图形界面中的X轴越大。但太大的扫描范围,将有可能扫描到吸水纸或玻璃纤维等不需要扫描的范围,一般设定为300既能满足绝大多数试剂需求。该值最大可设为600,超出600个点,将导致仪器控制器内存溢出。“基线减扣”:对基线进行处理,假定该值设定为10
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