肝移植患者肠道菌群生态结构及与肝移植患者肠道菌群生态结构及与肝移植患者肠道菌群生态结构及与肝移植患者肠道菌群生态结构及与 免疫功能关系研究免疫功能关系研究免疫功能关系研究免疫功能关系研究 吴仲文吴仲文吴仲文吴仲文 鲁海峰鲁海峰鲁海峰鲁海峰 左键左键左键左键 盛吉芳盛吉芳盛吉芳盛吉芳 梁廷波梁廷波梁廷波梁廷波 郑树森郑树森郑树森郑树森 李兰娟李兰娟李兰娟李兰娟 浙江大学附属第一医院浙江大学附属第一医院浙江大学附属第一医院浙江大学附属第一医院 传染病诊治国家重点实验室传染病诊治国家重点实验室传染病诊治国家重点实验室传染病诊治国家重点实验室 研究项目资助研究项目资助研究项目资助研究项目资助 科技部科技部科技部科技部“973973973973”项目（项目（项目（项目（2003CB5155062003CB5155062003CB5155062003CB515506） 浙江省科技厅重点项目（浙江省科技厅重点项目（浙江省科技厅重点项目（浙江省科技厅重点项目（2006C230172006C230172006C230172006C23017） 肠道微生态肠道微生态肠道微生态肠道微生态国内外研究的新热点国内外研究的新热点国内外研究的新热点国内外研究的新热点 肠道正常微生物群参与宿主免疫功能的成熟、营养的消化吸收及感染的预肠道正常微生物群参与宿主免疫功能的成熟、营养的消化吸收及感染的预肠道正常微生物群参与宿主免疫功能的成熟、营养的消化吸收及感染的预肠道正常微生物群参与宿主免疫功能的成熟、营养的消化吸收及感染的预 防等多项生理过程，视为具有防等多项生理过程，视为具有防等多项生理过程，视为具有防等多项生理过程，视为具有生理功能的器官生理功能的器官生理功能的器官生理功能的器官人类第二基因组人类第二基因组人类第二基因组人类第二基因组 “破坏人体微生物的生态就是损害人类健康破坏人体微生物的生态就是损害人类健康破坏人体微生物的生态就是损害人类健康破坏人体微生物的生态就是损害人类健康” Gordon, Washington UniversityGordon, Washington UniversityGordon, Washington UniversityGordon, Washington University Science, June 2005, 308: 1635-1638 肠道微生肠道微生肠道微生肠道微生物物物物是人体提供是人体提供是人体提供是人体提供 营养，调控上皮发育和营养，调控上皮发育和营养，调控上皮发育和营养，调控上皮发育和 指导先天性免疫的不可指导先天性免疫的不可指导先天性免疫的不可指导先天性免疫的不可 缺少的缺少的缺少的缺少的“器官器官器官器官” ?厌氧菌培养厌氧菌培养厌氧菌培养厌氧菌培养?16S rDNA16S rDNA16S rDNA16S rDNA序列分析序列分析序列分析序列分析 双歧杆菌等双歧杆菌等双歧杆菌等双歧杆菌等、肠杆菌科等、肠杆菌科等、肠杆菌科等、肠杆菌科等 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1.0 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1.0 对照组假手术组模型组 内毒素 (EU/ml） 对照组假手术组模型组 内毒素 (EU/ml） * 肝肝肝肝I/RI/RI/RI/R大鼠血大鼠血大鼠血大鼠血 浆内毒素水平浆内毒素水平浆内毒素水平浆内毒素水平 26.55 40.87 75.74 0 10 20 30 40 50 60 70 80 0 10 20 30 40 50 60 70 80 对照组对照组 慢肝组慢肝组 慢重肝组慢重肝组 重肝病人血内重肝病人血内重肝病人血内重肝病人血内 毒素显著增高毒素显著增高毒素显著增高毒素显著增高 内毒素血症内毒素血症内毒素血症内毒素血症 肠道定植抗力肠道定植抗力肠道定植抗力肠道定植抗力 肝肝肝肝细胞坏死细胞坏死细胞坏死细胞坏死 肠道微生态失衡肠道微生态失衡肠道微生态失衡肠道微生态失衡 ?临床和基础研究发现肝病患者存在肠道微生态失衡，其程度与肝病严重性相关临床和基础研究发现肝病患者存在肠道微生态失衡，其程度与肝病严重性相关临床和基础研究发现肝病患者存在肠道微生态失衡，其程度与肝病严重性相关临床和基础研究发现肝病患者存在肠道微生态失衡，其程度与肝病严重性相关 ?通过有效调节肠道微生态，微生态调节剂能降低肝病内毒素血症，有效改善肝脏功能通过有效调节肠道微生态，微生态调节剂能降低肝病内毒素血症，有效改善肝脏功能通过有效调节肠道微生态，微生态调节剂能降低肝病内毒素血症，有效改善肝脏功能通过有效调节肠道微生态，微生态调节剂能降低肝病内毒素血症，有效改善肝脏功能 国内肝病微生态系列研究（国内肝病微生态系列研究（国内肝病微生态系列研究（国内肝病微生态系列研究（1994199419941994） 肝脏与肠道微生态关系密切肝脏与肠道微生态关系密切肝脏与肠道微生态关系密切肝脏与肠道微生态关系密切 相关内容获相关内容获相关内容获相关内容获 07070707 年国家年国家年国家年国家 科技进步二等奖科技进步二等奖科技进步二等奖科技进步二等奖 本实验室拥有感染微生态学研究本实验室拥有感染微生态学研究本实验室拥有感染微生态学研究本实验室拥有感染微生态学研究 所需的系列技术平台所需的系列技术平台所需的系列技术平台所需的系列技术平台 浙江大学为首席科学家单位申请的浙江大学为首席科学家单位申请的 “肠道微生态与感染肠道微生态与感染”获获2007年度年度973资助资助 肝移植肠道微生态研究现状肝移植肠道微生态研究现状肝移植肠道微生态研究现状肝移植肠道微生态研究现状 ?SDDSDD可降低肝移植大鼠内毒素血症的发生可降低肝移植大鼠内毒素血症的发生可降低肝移植大鼠内毒素血症的发生可降低肝移植大鼠内毒素血症的发生, , 减少移植肝组织的损伤减少移植肝组织的损伤减少移植肝组织的损伤减少移植肝组织的损伤 ?环孢素环孢素环孢素环孢素A A及及及及FK506FK506抑制抑制抑制抑制LewisLewis大鼠肠道上皮细胞的大鼠肠道上皮细胞的大鼠肠道上皮细胞的大鼠肠道上皮细胞的ATPATP能量代谢，并损伤能量代谢，并损伤能量代谢，并损伤能量代谢，并损伤 肠道屏障功能肠道屏障功能肠道屏障功能肠道屏障功能 ?FK506FK506抑制肝移植患者肠上皮细胞能量产生，增加肠道通透性，引起内抑制肝移植患者肠上皮细胞能量产生，增加肠道通透性，引起内抑制肝移植患者肠上皮细胞能量产生，增加肠道通透性，引起内抑制肝移植患者肠上皮细胞能量产生，增加肠道通透性，引起内 毒素血症毒素血症毒素血症毒素血症 ?肝移植术后早期患者服用微生态制剂（合生元）可显著降低术后早期感肝移植术后早期患者服用微生态制剂（合生元）可显著降低术后早期感肝移植术后早期患者服用微生态制剂（合生元）可显著降低术后早期感肝移植术后早期患者服用微生态制剂（合生元）可显著降低术后早期感 染的发生率，并缩短抗生素使用时间染的发生率，并缩短抗生素使用时间染的发生率，并缩短抗生素使用时间染的发生率，并缩短抗生素使用时间 Gastroenterology. 1995,1998 ; Hepatology.1998Gastroenterology. 1995,1998 ; Hepatology.1998 Transplantation. 2002; Am J TranspTransplantation. 2002; Am J Transplant. 2005lant. 2005 肝移植免疫抑制剂的应用、肠道微生态、移植后感染及肝脏损伤肝移植免疫抑制剂的应用、肠道微生态、移植后感染及肝脏损伤肝移植免疫抑制剂的应用、肠道微生态、移植后感染及肝脏损伤肝移植免疫抑制剂的应用、肠道微生态、移植后感染及肝脏损伤 之间存在着有机的联系，但缺乏肝移植受者肠道菌群生态之间存在着有机的联系，但缺乏肝移植受者肠道菌群生态之间存在着有机的联系，但缺乏肝移植受者肠道菌群生态之间存在着有机的联系，但缺乏肝移植受者肠道菌群生态 及其与免疫功能的相关研究及其与免疫功能的相关研究及其与免疫功能的相关研究及其与免疫功能的相关研究 研究目的研究目的研究目的研究目的 ?肝移植患者肠道微生态结构变化特点肝移植患者肠道微生态结构变化特点肝移植患者肠道微生态结构变化特点肝移植患者肠道微生态结构变化特点 ?肝移植患者肝脏功能与肠道微生态的关系肝移植患者肝脏功能与肠道微生态的关系肝移植患者肝脏功能与肠道微生态的关系肝移植患者肝脏功能与肠道微生态的关系 ?肝移植患者全身、肠道局部免疫功能与肠道微生态的关系肝移植患者全身、肠道局部免疫功能与肠道微生态的关系肝移植患者全身、肠道局部免疫功能与肠道微生态的关系肝移植患者全身、肠道局部免疫功能与肠道微生态的关系 研究对象研究对象研究对象研究对象 ?肝移植患者：共肝移植患者：共肝移植患者：共肝移植患者：共111111例例例例，其中男性，其中男性99例，女性例，女性12例，年龄例，年龄 2264岁，平均岁，平均43.69.1。免疫抑制剂方案，有两联或 三联药物 。免疫抑制剂方案，有两联或 三联药物 (主要方案有：环孢素主要方案有：环孢素A+MMF、FK506MMF、 FK506等等) ?肝硬化患者：肝硬化患者：肝硬化患者：肝硬化患者： 共共共共5151例例例例，其中男性其中男性45例，女性例，女性6例，年龄例，年龄28- 63岁，平均岁，平均45.59.9岁岁 ?健康志愿者：共健康志愿者：共健康志愿者：共健康志愿者：共2828例例例例，男性，男性25例，女性例，女性3例，年龄例，年龄22-57 岁，平均岁，平均37.68.2岁岁 所有受试者在采样前所有受试者在采样前所有受试者在采样前所有受试者在采样前4 4 4 4周内均未使用抗生素、胃肠动力药物、酸奶及周内均未使用抗生素、胃肠动力药物、酸奶及周内均未使用抗生素、胃肠动力药物、酸奶及周内均未使用抗生素、胃肠动力药物、酸奶及 其它的微生态制剂。此外，健康志愿者无肝胆系及胃肠道疾病史其它的微生态制剂。此外，健康志愿者无肝胆系及胃肠道疾病史其它的微生态制剂。此外，健康志愿者无肝胆系及胃肠道疾病史其它的微生态制剂。此外，健康志愿者无肝胆系及胃肠道疾病史 研究材料研究材料研究材料研究材料 ? 粪便粪便粪便粪便 采集新鲜粪便，称取采集新鲜粪便，称取采集新鲜粪便，称取采集新鲜粪便，称取200mg200mg尾便于尾便于尾便于尾便于- -8080保存，待抽提粪便微保存，待抽提粪便微保存，待抽提粪便微保存，待抽提粪便微 生物总生物总生物总生物总DNA DNA ? 血液血液血液血液 1ml1ml血液置含肝素的玻璃管内，血液置含肝素的玻璃管内，血液置含肝素的玻璃管内，血液置含肝素的玻璃管内，3737孵育取血浆检测内毒素孵育取血浆检测内毒素孵育取血浆检测内毒素孵育取血浆检测内毒素 3ml3ml血液用于肝功能检测血液用于肝功能检测血液用于肝功能检测血液用于肝功能检测 2ml2ml血液血液血液血液4 4保存，保存，保存，保存，1 1小时内取血清小时内取血清小时内取血清小时内取血清200ul200ul分装，于分装，于分装，于分装，于8080保存保存保存保存 待测细胞因子待测细胞因子待测细胞因子待测细胞因子 ?粪便总粪便总粪便总粪便总DNADNADNADNA抽提抽提抽提抽提 ?采用针对需定性定量分析的肠道目的细菌群的采用针对需定性定量分析的肠道目的细菌群的采用针对需定性定量分析的肠道目的细菌群的采用针对需定性定量分析的肠道目的细菌群的16S 16S 16S 16S rDNArDNArDNArDNA特异性引特异性引特异性引特异性