课题合同号课题申请号湖南省卫生厅科研基金课题申请书(合同书)上 册课题名称: VEGF反义寡核苷酸抗骨肉瘤血管生成治疗的实验研究申请单位: 课题负责人: 联系电话: 申请日期: 计划周期: 2004年 4月至2006 年 12月省卫生厅制一、 数据库信息课题名称（25字内）VEGF反义寡核苷酸抗骨肉瘤血管生成治疗的实验研究所属学科医学课题性质1-基础研究 2-应用研究 3-试验发展 4-软科学研究1课题类别1-重点 2-一般 3-指导 4-青年基金1申请单位邮政编码 421001课题负责人1-男性 2-女性1性别出生年月年月民族技术专长骨外学位21-博士 2-硕士3-学士 4-其它职称1-正高 2-副高3-中级 4-初级2政治面貌06-民建会员 07-民进会员 08-农工党党员09-致公党党员 10-九三学社社员 11-台盟盟员12-无党派民主人士 13-群众01-党员 02-中共预备党员 03-共青团员 04-民革会员 05-民盟盟员01文化程度30-中专 31-中专毕业 32-中技毕业40-技工学校 41技校毕业 49-技校肄业50-高中 51-高中毕业 59-职业高中毕业60-初中 61-初中毕业 69-职业初中毕业70-小学 71-小学毕业 79-小学肄业0000-研究生 02-研究生毕业 09-研究生肄业10-大学本科 11-大学毕业 12-大学肄业20-大专 21-专科毕业 29-专科肄业人员分类21-中医人员 2-西医人员 3-西学中人员4-中药人员 5-西药人员 6-医技人员7-护理人员 8-其他人员计划周期2004年 4 月 至 2006 年 12 月申请经费5万元拨款类型1-A 2-B 3-C本研究设计并合成VEGF反义、无义寡核苷酸，拟通过VEGF反义寡核苷酸对内皮细胞的生长抑制实验、骨肉瘤细胞VEGFmRNA及蛋白质表达的抑制实验及对骨肉瘤的治疗实验，明确不同浓度的反义VEGF对内皮细胞生长的抑制情况，对骨肉瘤VEGF的抑制作用及与其对骨肉瘤的治疗作用，明确反义VEGF抗骨肉瘤血管生成治疗的疗效，和其与传统化疗药物的关系（协同、拮抗），为临床骨肉瘤的治疗提供可靠的实验依据反义VEGF抗血管生成作用与细胞增殖、凋亡的关系，从而探讨反义VEGF抗血管生成的机制。预期具有较高的临床应用价值。课题申请号合同号评审结果1-批准列入计划2-批准列入计划，但科研方案需做修改3-不批准列入计划批准资助经费万元偿还经费万元二、课题申请单位、合作单位及分工三、课题主要研究人员情况（请从课题负责人开始依次填写）序号姓名性别年龄学位职称技术专长单位12345678910四、申请单位意见：对申请书的真实性及能否提供基本工作条件等签署意见该课题运用反义基因技术来探寻骨肉瘤治疗的新途径，具有科学创新性，项目负责人同志长期从事骨外科及肿瘤等领域的临床、科研工作，科研水平较高，工作作风严谨，具有良好的科研创新能力，课题组承担过多项研究课题，为本课题打下了良好的科研基础。该课题如能获得资助，将能按时保质完成。该项目已列入本部门重点发展项目。单位负责人（签字）： 申请单位（盖章）年 月 日五、主管部门审核意见：所在市、州卫生局或省直单位审核意见主管部门负责人（签名）： 主管部门（盖章）年 月 日（申请青年基金课题必填）六、专家推荐意见：（两名专家推荐意见）推荐专家（签名）： 年 月 日推荐专家（签名）： 年 月 日七、专家评审意见： 专家组负责人（签名）： 年 月 日八、省卫生厅审批意见： 主管领导（签章） （公章）年 月 日九、合同条款订立合同单位：湖南省卫生厅（甲方）课题承担单位（乙方）课题保证单位（丙方）为了保证医学科学研究工作的顺利实施，根据中华人民共和国技术合同法及湖南省医药卫生科学技术研究项目管理办法的有关规定，商定如下共同条款：第一条 本合同一经签定，即具有法律效力。签约各方应履行本合同规定的义务，不得擅自变更或解除合同。任何一方提出变更合同原定内容、指标或解除合同，需与签定合同各方共同协商，就变更或解除达成书面协议后，方可执行。第二条 甲方按合同下拨资助经费，检查课题计划执行情况，监督资助经费的使用。丙方按合同督促乙方按计划实施，并保证乙方按规定使用资助经费，按合同规定偿还经费。第三条 乙方按合同实施课题计划，并于每年十一月底前填报执行情况报告表一式二份，向甲、丙方汇报课题执行情况和经费使用情况。第四条 确因客观原因需要调整研究计划或课题负责人者，乙方必须书面报请丙方审查并呈甲方批准后方可调整。第五条 乙方在撰写本课题研究报告、发表论文、申报奖励时，需注明“湖南省卫生厅科研基金资助”字样，重要文件抄报甲方、丙方，课题研究成果的转让须经签约各方协商进行。第六条 本课题属 偿资助课题，其偿还经费 万元，乙方必须按资助经费偿还计划按期偿还给甲方，逾期不还者，甲方有权追回全部资助经费，并拒绝受理乙方申报的其他课题和成果，扣除或停拨乙方承担课题的资助经费第七条 本合同一式四份，甲方、丙方各一份，乙方二份。本合同自甲、乙、丙三方签字、盖章之日起生效。合同签署各方：湖南省卫生厅（甲方）部门科技主管：（签章） （公章） 年 月 日课题承担单位（乙方）单位科技主管：课题负责人：财务负责人：开户银行及帐号： （公章） 年 月 日保证单位（丙方）：（系指各附属医院及地市所属单位的主管部门）主管部门负责人（签章） （公章） 年 月 日课题申报号课题合同号湖南省卫生厅科研基金课题申请书（合同书） 下册课题名称：VEGF反义寡核苷酸抗骨肉瘤血管生成治疗的实验研究申请日期：2004-3-2湖南省卫生厅制一课题研究的科学依据：包括国内研究现状、水平、发展趋势、存在问题、本课题特色、创新之处及立题依据等。国内外研究现状、水平、发展趋势：反义寡核苷酸能与特定基因杂交，在基因水平干扰致病蛋白的产生过程，即干扰遗传信息从核酸向蛋白质的传递，与传统的化疗药物相比更具有选择性和高效低毒性，是目前抗肿瘤治疗研究的方向。VEGF反义寡核苷酸（VEGF ASODN）的靶基因VEGF是目前发现的刺激肿瘤血管形成的最关键因子，并与肿瘤的形成和发展密切相关。研究以VEGF配体系统为靶向的血管生成抑制剂的抗癌新策略已成为热点。抗血管生成的基因治疗目前还处于实验阶段，主要有以下4条途径：反义VEGF VEGF单克隆抗体诱导可溶性VEGF受体的产生 阻断VEGF信号传导途径。骨肉瘤是最常见的骨恶性肿瘤，约占骨原发性肿瘤的20%，传统的截肢和关节离断术，5年生存率仅15%左右，虽然新辅助化疗的运用使骨肉瘤患者的生存率大大提高了，但仍有一定比例的患者对化疗有原发性或继发性耐药，骨肉瘤仍是一种死亡率和致残率高的疾病，因此，寻找更加积极有效的治疗方法十分必要。Chen等研究了将骨钙素自杀基因治疗与小剂量MTX(40mg/kg)合用的 “化疗-基因治疗”方法，为骨肉瘤的治疗提供了新的思路。近年实验证实，利用特异性抗VEGF单抗或转染VEGF的反义基因能抑制多种肿瘤如脑胶瘤、横纹肌肉瘤、平滑肌肉瘤、恶性黑色素瘤等的体内生长。亦有实验表明肿瘤血管生成与骨肉瘤的演进、转移关系密切，抗肿瘤血管生成治疗已成为肿瘤治疗的新模式，为骨肉瘤的治疗提供了新的方向。迄今为止，国内外关于用反义VEGF抗骨肉瘤血管生成治疗方面的报道甚少。本研究拟通过反义VEGF对内皮细胞的生长抑制实验、骨肉瘤细胞VEGF的抑制实验，明确不同浓度的反义VEGF对内皮细胞生长的抑制情况及对骨肉瘤VEGF的抑制作用，通过制备人骨肉瘤动物模型，观察VEGF ASODN对骨肉瘤的治疗作用，并与传统化疗药物顺铂（CDDP）进行对照研究，观察裸鼠的一般情况与生存期，肿瘤的转移情况、大小与瘤重、微血管记数、细胞增殖指数、细胞凋亡指数。明确反义VEGF抗骨肉瘤血管生成治疗的疗效，和其与传统化疗药物的关系（协同、拮抗），为治疗骨肉瘤寻找新的方法提供可靠的实验依据反义VEGF抗血管生成作用与细胞增殖、凋亡的关系，从而探讨反义VEGF抗血管生成的机制。预期具有较高的临床应用价值。本课题特色、创新之处：（1）设计并合成VEGF的反义、无义寡核苷酸（2）首次采用反义VEGF抑制人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的生长，并探讨了反义VEGF的抑制作用及其与浓度的关系，以寻找最佳的治疗浓度。（3）应用RT-PCR、Western印迹法检测了不同浓度的反义VEGF对骨肉瘤细胞VEGF表达的抑制情况。（4）率先采用反义VEGF治疗骨肉瘤，并探讨了其与传统化疗药物合用的疗效（协同、拮抗），可为临床骨肉瘤的抗血管生成治疗提供可靠的实验依据。（5）首次检测了反义VEGF对骨肉瘤细胞增殖、凋亡的影响，从大体形态、细胞水平、超微结构到分子水平，探讨反义VEGF抗血管生成的机制。立题依据：骨肉瘤是最常见的骨恶性肿瘤，约占骨原发性肿瘤的20%，其治疗是骨科学的一个难题，传统的截肢和关节