q河 北 农 业 大 学本 科 毕 业 论 文题 目： 化学发光免疫分析用于抗人白蛋白单体的克隆筛选学 院： 生命科学学院 专业班级： 制药工程 1001 学 号： 2010044030111 学生姓名： 石冰卓 指导教师姓名： 张冬冬 指导教师职称： 讲师 二一四年六月一日2化学发光免疫分析用于抗人白蛋白单抗的克隆筛选制药工程 1001 班：石冰卓指导老师：张冬冬摘 要：本实验将化学发光免疫分析用于小鼠抗人白蛋白单克隆抗体（anti-ALB McAb）的克隆筛选。方法简化为一步法操作，通过正交实验L 9（3 4）表优化实验参数，寻找阳性克隆 /空白对照发光值（信噪比）最大时的参数组合，并对该组合进行了方法学评价及统计学分析。结果表明包被抗体为3mg/L, 酶标蛋白 A 稀释比例为 1：2000，温育时间 30 分钟时信噪比最大为 1284，数倍高于其它组合。方法学评价表明该实验条件下检测灵敏度为 20ng/L；其线性范围为 20-20000ng/L；精密度良好，平均批内 CV 为 5.32%，平均批间 CV 为 8.82%。实验结果证实该方法可用于 anti-ALB McAb 的克隆筛选，且方法学上明显优于 ELISA 等传统方法，特别是一步操作的简便快速，也适合其它抗体高通量筛选。关键词：化学发光免疫分析、抗人白蛋白单克隆抗体、正交试验、克隆筛选Chemiluminescence immune assay for screening and cloning of anti human albumin Monoclonal AntibodyAbstract: the chemiluminescent immunoassay for monoclonal antibody of mouse anti human albumin (anti-ALB McAb) cloning and screening. Simplified method for one-step operation, through the orthogonal experiment L9 (34) surface optimization of experimental parameters, find the positive clone/blank control the light value(SNR) parameters of maximum and the combination of analysis and statistical methodology. The results showed that the coating antibody to 3mg/L, the enzyme labeled protein A dilution ratio was 1:2000, the incubation time of 30minutes when the signal-to-noise ratio is 1284, is several times higher than that of other combination. The evaluation shows that the detection sensitivity of the experimental conditions for the 20ng/L method; the linear range is 20-20000ng/L; good precision, the average number of CV was 5.32%, the average number of CV is 8.82%. The experiment results prove that this method can be used for screening and cloning of the anti-ALB McAb, and the method is obviously better than the ELISA and other traditional methods, especially the step of operation is simple and fast, but also for other antibody screening.Keywords: chemiluminescence immune analysis; screening of anti human albumin monoclonal antibody; clone; orthogonal test3目录1 引言 .11.1 理论依据 .11.2 目的意义 .11.3 方法学的建立 .11.4 国内外研究概况 .22 材料和方法 .22.1 试验材料 .22.1.1 试验试剂 .22.1.2 试验试剂的制备 .22.1.3 试验仪器 .22.2 试验方法 .32.3 发光分析微孔板的包被 .32.4 试验参数优化 .32.5 试验方法评价 .42.5.1 标准操作程序的建立 .42.5.2 灵敏度及线性范围分析 .42.5.3 精密度分析 .42.6 统计分析 .53 试验结果与讨论 .53.1 正交试验结果 .