华中科技大学 硕士学位论文 开口箭提取物对慢性支气管炎治疗作用的探索 姓名：李园 申请学位级别：硕士 专业：药理 指导教师：向继洲 20080526 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 缩略语缩略语 英文缩写 英文全称 中文译名 CB Chronic Bronchitis 慢性支气管炎 COPD Chronic Obstructive Pulmonary Disease 慢性阻塞性肺疾病 TCE Tupistra Chinensis Bak. Extract 开口箭提取物 DMSO Dimethyl Sulfoxide 二甲基亚砜 CMC-Na Carboxymethyl Cellulose 羧甲基纤维素钠 Ach Acetylcholine 乙酰胆碱 ELISA Enzyme-Linked-Immuno-Sorbnent Assay 酶联免疫吸附测定 TNF- Tumor necrosis factor- 肿瘤坏死因- IL-4,5,6,8,10 Interleukin-4,5,6,8,10 白介素-4,5,6,8,10 ABC Avidin Biotin-Peroxidase Complex 亲和素-过氧化物酶复合物 TMB Tetramethylbenzidine 四甲基联苯胺 PBS Phosphate Buffered Saline 磷酸盐缓冲液 IgA,E Immune Globulin A,E 免疫球蛋白 A,E CRP C reactive protein C 反应蛋白 LTB4 leukotriene B4 白三烯 B4 PMN Polynuclear neutrophilic leukocyte 多形核中性粒细胞 IFN- Immunoreactive Fibronectin- 免疫反应性纤维结合素- MHC Major Histocompatibility Complex 主要组织相容性复合体 CSF Colony-stimulating Factor 集落刺激因子 NE Neutrophil Elastase 中性粒细胞弹性蛋白酶 MMPs Matrix Metalloproteinase 基质金属蛋白酶 1-AT 1-Antitrypsin 1-抗胰蛋白酶 SLPI Secrete Leukocyte Protease Inhibitor 分泌性白细胞蛋白酶抑制物 TIMPs Tissue- Inhibitor of Metallo- Protease 组织金属蛋白酶抑制物 SOD Superoxide Dismutase 超氧化物歧化酶 VEGFR Vascular Endothelial cell Growth 血管内皮细胞生长因子受体 Factor Receptor 独创性声明独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得 的研究成果。尽我所知，除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他 个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集 体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到，本声明的法律结果由本人承 担。 学位论文作者签名： 日期： 年 月 日 学位论文版权使用授权书学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有 权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版， 允许论文被查阅和 借阅。 本人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据 库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。 保密 ，在_年解密后适用本授权书。 不保密。 （请在以上方框内打“” ） 学位论文作者签名： 指导教师签名： 日期： 年 月 日 日期： 年 月 日 本论文属于 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 1 开口箭提取物对慢性支气管炎治疗作用的探索开口箭提取物对慢性支气管炎治疗作用的探索 摘摘 要要 目的：目的： 开口箭系百合科铃兰族开口箭属植物， 中医传统理论认为该植物具有 清热解毒、祛风除湿、散瘀止痛等功效。开口箭在民间常用于治疗咽喉炎、扁桃 体炎，疗效显著。近年来有文章报道开口箭具有抗炎和祛痰作用。本研究通过整 体和离体实验，探索并验证开口箭是否能改善呼吸系统常见症状如咳，痰、喘， 以及是否具有抗炎作用，并通过针对慢性支气管炎病理模型研究，探索其对慢性 支气管炎的治疗作用。 方法与结果方法与结果: 1 开口箭镇咳和祛痰作用 1）镇咳作用 采用浓氨水引咳法，记录小鼠从接受氨水引咳开始到出现咳嗽 的潜伏期， 以及 3min 内的咳嗽次数。 结果发现溶剂组与模型组相比小鼠咳嗽潜 伏期及 3min 内咳嗽次数无显著差异（P0.05） ，低剂量、高剂量组与模型组相比 咳嗽潜伏期均明显延长 （P0.05， 0.01） ， 3min 内咳嗽次数均明显减少 （P0.05， 0.01， ） 。 2）祛痰作用 采用气管酚红排泌法，比较各给药组之间小鼠气管酚红排泌量 的差异。结果发现溶剂组与模型组相比气管酚红排泌量无显著变化（P0.05） ， 低剂量组与模型组相比气管酚红排泌量无显著变化（P0.05） ，高剂量组与模型 对照组相比气管酚红排泌量有所增加（P0.05） ， 低剂量组、高剂量组与模型对照组小鼠相比耳廓肿胀度均明显降低（P0.05） ， 对 Ach 引起豚鼠离体气管平滑肌收缩的量效曲线亦无显著影响（P0.05） 。 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 2 3 开口箭对慢性支气管炎模型小鼠肺组织形态学和血清 TNF-、IL-6 的影响 实验分正常对照组、模型组、消炎止咳片对照组、开口箭提取物高剂量组、 开口箭提取物低剂量组、 溶剂对照组。 采用烟熏法建立小鼠慢支模型。 采用 ELISA 试剂盒检测并比较血清 TNF-、IL-6 水平，另外取肺组织采用苏木素伊红 （Hematoxylin-Eosin，HE）染色，观察比较小鼠支气管及其周围组织形态学的 改变。 结果发现血清 TNF-、IL-6 水平模型组显著高于正常对照组（P0.05） ，消炎止咳片组、低剂量组、高剂量组均显著低 于模型组（P0.05)；tracheal phenol red secretion on H group compared with M group increase obviously(P0.05). 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 4 2 Anti-inflammatory and tracheal smooth muscle relaxation effect of TCE 1) Anti-inflammatory effect Xylene-induced ear swelling in mice was used to calculate the swelling inhibition rate by the degree of ear swelling which based on the difference between the left and right ear. Results showed that L group and H group compared with M group, the degree of ear swelling decreased obviously(P0.05). 2) Tracheal smooth muscle relaxation effects of TCE The guinea-pig isolated trachea spiral strip was used to evaluate the role of TCE on the guinea-pig isolated trachea spiral strips. Results showed that TCE had no inhibitory effects on the contraction of the guinea-pig isolated trachea spiral strip induced by Ach (P0.05), and no contribution to the concentration-response curves of Ach (P0.05). 3 Effects of TCE on the serum TNF-, IL-6 of chronic bronchitis mice and Pathological Changes of pneumono-tissue Fourty-eight mice were divided into six group: the normal group(N group), the model group(M group), the anti-inflammatory tablets control group(A group), the high-dose of TCE group(H group), the low-dose of TCE group(L group), the dissolvent control group(D group). Exposure to cigarette-smoking was used to establish the mice model of chronic bronchitis. ELISA kit were used to determinate the content of serum TNF-, IL-6 as well as the pathological changes of pneumono-tissue. Results showed that The content of serum TNF-, IL-6 of M group increase obviously (P0.05） 。 （见图 5） 由此可见，开口箭提取物对豚鼠气管平滑肌没有舒张作用。 -1 0 1 2 3 4 5 0.0225g/L0.045g/L0.09g/L0.18g/L0.36g/L 浴槽浓度 舒张效应（） 溶剂对照 TCE 图图 4. TCE 对对 Ach 诱导豚鼠离体气管平滑肌收缩的舒张作用诱导豚鼠离体气管平滑肌收缩的舒张作用 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 21 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 7.576.565.554.54 -lg(Ach) 收缩效应（） 溶剂对照 0.36g/L TCE 图图 5. TCE 对对 Ach 引起豚鼠离体气管平滑肌收缩的量效曲线的影响引起豚鼠离体气管平滑肌收缩的量效曲线的影响 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 22 讨讨 论论 慢性支气管炎常并发哮喘，称为慢性喘息性支气管炎