p u b e s c e n sI n h i b i t i n gA n g i o g e n e s i s AD i s s e r t a t i o nS u b m i t t e df o rt h e M a s t e r sD e g r e e C a n d i d a t e ：L i nL i A d v i s e r ： Q i a nX i a o p i n g ，L i uB a o - r u i N a n ji n gU n i v e r s i t yo fC h i n e s eM e d i c i n e ，N a n ji n g ，C h i n a e n S 学号：2 0 0 8 1 2 7 0 硕士学位论文 ( 中药独活及其单体蛇床子素抗血管生成的实验研 究) 作者姓名林黎申请学位级别临床医学硕士学位 指导教师姓名钱晓萍教授刘宝瑞教授职称主任医师 学科专业中西医结合临床医学研究方向中西医结合肿瘤内科学 学习时间自2 0 0 8 年0 9 月0 1 日起至2 0 1 1 年0 6 月3 0 日止 论文提交日期2 0 1 1 年0 4 月0 5 日论文答辩日期2 0 1 1 年0 5 月2 4 日 学位授予单位南京中医药大学学位类型临床医学专业硕士学位 以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。 学位论文作者( 需亲笔) 签名： 球彖 舢忙? 月旷日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并 向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授 权南京中医药大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可 以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。 f 保密口，在一年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密曰。 ( 请在以上方框内打“) 学位论文作者( 需亲笔) 签狡 环麓 导师( 需亲笔) 签名： 3 L o 7f 年6 月心日 幽纠年莎月J E t I I I 第一章研究背景1 一肿瘤血管生成和抗血管生成治疗一1 二中医药在抗血管生成治疗中的相关研究3 参考文献5 第二章中药独活及其单体蛇床子素抗血管生成实验研究l o 一材料和方法11 二结 三讨 参考文献4 0 第三章文献综述4 4 中药独活及其化学成分抗肿瘤作用的研究进展4 4 攻读硕士学位期间取得的研究成果5 0 致 射5 1 M K N 4 5 、B G C 8 2 3 、人肺腺癌细胞株A 5 4 9 、人乳腺癌细胞株M C F 7 及人结肠癌细胞 株L O V O 的增殖抑制率，从中筛选出对药物最敏感的细胞株。以最敏感的肿瘤细胞为 参照，采用M T T 法观察中药独活醇提物及其单体蛇床子素对人脐静脉血管内皮细胞 ( h u m a nu m b i l i c a lv e i ne n d o t h e l i a lc e l l ，H U V E C ) 的增殖抑制作用，通过T r a n s w e l l d x 室 趋化实验、体外小管形成实验以及流式细胞术，观察并比较独活醇提物及单体蛇床子 素对H U V E C 迁移、小管形成、凋亡及周期的影响。建立鸡胚尿囊膜( C A M ) 模型， 观察并比较独活醇提物及其单体蛇床子素对体内新生血管的抑制作用。结果：蛇床子 素在体外能够抑制M K N 4 5 、B G C 8 2 3 、A 5 4 9 、M C F 7 和L O V O 的增殖，l C 5 0 值分别 为4 3 2 9 9 | lg m l 、5 6 7 9 0t lg m l 、3 7 4 4 4ug m l 、3 8 3 9 7pg r r d 、3 6 2 31pg m l ，且I L O V O 细胞为本实验中对蛇床子素最为敏感的肿瘤细胞株。相同条件下，独活醇提物对 M K N 4 5 、B G C 8 2 3 、A 5 4 9 、M C F 7 和L O V O 细胞增殖的抑制作用较弱，I C 5 0 值分别为 5 0 3 3 6 m g m l 、1 9 8 2 6 5 m g m l 、4 1 4 5 6 m g m l 、3 2 5 4 4 m g m l 和3 1 2 8 0 m g m l ，最P L O V O 细 胞为本实验中对蛇床子素及独活醇提物最为敏感的肿瘤细胞株。3 7 5l Ig m l - - 一3 0p g m l 的独活醇提物及蛇床子素作用4 8 h 时对H U V E C 的细胞增殖抑制率分别在 5 1 6 1 0 1 5 和2 2 6 4 - - 6 5 5 6 之间，均有明显的剂量效应关系，两种药物对 H U V E C 的细胞增殖抑制作用均优于对L O V O 细胞增殖抑制作用，具有差异细胞毒作用 ( P O 0 5 ) 。体外小管及小管迁移实验显示，3 7 5ug m l - - - 3 0 l ag m l 的蛇床子素作用2 4 h 时H u v E C 小管形成数目减少，且管腔不完整，相同浓度独活醇提物则没有明显抑制 小管形成的作用，3 7 5 | lg m l “ - 3 0ug m l 的独活醇提物和蛇床子素处理1 2h 对H U V E C 迁移抑制率分别在2 1 6 - - 8 0 0 和1 3 7 0 - - 6 3 0 4 之间。3 7 5I lg m l “ - 3 0l ag m l 的 中药独活及其单体蛇床子素抗血管生成的实验研究 独活醇提物和蛇床子素作用H U V E C4 8 h 后，诱导H U V E C 细胞凋亡率分别在6 1 1 4 4 7 F 1 1 8 8 - 8 9 5 之间。3 7 5ug m l - - 一3 0 ug m l 蛇床子素作用H u V E C2 4 h 后，使 内皮细胞周期主要阻滞在G 0 G l 期，相同浓度独活醇提物对细胞周期没有明显的影响。 京中医药人学硕十论文 A B S T R A C T O b j e c t i v e s ：T h i se x p e r i m e n ta i m st os t u d yt h ee f f e c ta n d t h em e c h n i s mo fe t h a n o le x t r a c t s f r o mA n g e l i c ap u b e s c e n sa n do s t h o l eo na n t i - a n g i o g e n e s i si nv i t r oa n di nv i v o M e t h o d s ：M T Ta s s a yW a su s e dt oo b s e r v et h ee f f e c to fe t h a n o le x t r a c t sf r o mA n g e l i c a p u b e s c e n sa n do s t h o l eo nt h ep r o l i f e r a t i o no fh u m a ns t o m a c hc a n c e rc e l lM K N 4 5 、 B G C - 8 2 3 ，h u m a nl u n gc a n c e rc e l lA 5 4 9 ，h u m a nb r e a s tc a n c e rM C F 7c e l la n dh u m a nc o l o n c a r c i n o m ac a n c e re e l lL O V O A n dt h em o s ts e n s i t i v et u m o re e l lt ot h em e d i c i n eh a db e e n s c r e e n e d T u m o rc e l lw h i c hw a sm o s ts e n s i t i v et ot h ed r u gW a su s e da sc o n t r o l ，t h e i n h i b i t i o ne f f e c t so fe t h a n o le x t r a c t sf r o mA n g e l i c ap u b e s c e n sa n do s t h o l eo np r o l i f e r a t i o n o fh u m a nu m b i l i c a lv e i ne n d o t h e l i a lc e l l s ( H U V E C s ) w e r em e a s u r e db yM T T a s s a y T r a n s w e l lm i g r a t i o na s s a ya n dt u b ef o r m a t i o na s s a yw e r eu s e dt oo b s e r v et h ei m p a c to f e t h a n o le x t r a c t sf r o mA n g e l i c ap u b e s c e n sa n do s t h o l eo nc e l lm i g r a t i o na n dt u b ef o r m i n g a b i l i t yo fH U V E C s T h er a t eo fe t h a n o le x t r a c t sf r o mA n g e l i c ap u b e s c e n sa n do s t h o l e i n d u c i n gH U V E Ca p o p t o s i sa n dt h ee f f e c to fe t h a n o le x t r a c t sf r o mA n g e l i c ap u b e s c e n sa n d o s t h o l eo nc e l lc y c l eo fH U V E Cw a sc a l c u l a t e db yfl o wc y t o m e t r y T h eC h i c kc h o r i o a l l a n t o i cm e m b r a n e ( C A M ) m o d e lw a su s e dt oo b s e r v et h ea n t i a n g i o g e n i ce f f e c to fe t h a n o l e x t r a c t sf r o mA n g e l i c ap u b e s c e n sa n do s t h o l ei nv i v o R e s u l t s ：O s t h o l eh a di n