分类号： 密级： 单位代码： 学号： 二氯二茂钛的质量标准、稳定性及初步药代动力学研究 研 究 生： 杜建红 指导教师： 奎壹出教援 申请学位门类级别： 童些堂僮 专 业 名称： 药物丝堂 研 究方向：药物丝堂 所在学院： 药堂院 2 0 1 1 年1 0 月1 0 日 学位论文独创性声明 I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I I i i l l l l l l J 2 12 7 2 2 2 本人声明，所呈交的学位论文系在导师指导下本文独立完成的研究成果。文中任何引 用他人的成果，均已做出明确标注或得到许可。论文内容未包含法律意义上已属于他人的 任何形式的研究成果，也不包含本人已用于其他学位申请的论文或成果。与我一同工作的 同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。 本文如违反上述声明，愿意承担以下责任和后果： 1 、交回学校授予的学位证书； 2 、学校可在相关媒体上对作者本人的行为进行通报； 3 、本文按照学校规定的方式，对因不当取得学位给学校造成的名誉损害，进行公开 道歉。 4 、本人负责因论文成果不实产生的法律纠纷。 论文作者签名： 学位论文版权使用授权书 本人完全了解山西医科大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家 有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权山西医科 大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印 或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。 本人离校后发表或使用学位论文或与该论文直接相关的学术论文或成果时，署名单位 仍然为山西医科大学。 ( 保密论文在解密后应遵守此规定) 论文作者签名： 指导教师签名： 日期：年月日 日期：年月日 ( 本声明的版权归山西医科大学所有，未经许可，任何单位及任何个人不得擅自使用) 山西医科大学硕士学位论文 目录 中文摘要I 英文摘要I I I 前言1剐舌 第一章二氯二茂钛原料药的含量测定2 1 1 实验材料2 1 2 含量测定2 1 3 讨论- 7 第二章二氯二茂钛原料药质量标准研究8 2 1 实验材料8 2 2 性状8 2 3 鉴别实验1 0 2 4 检查1 1 2 5 讨论1 4 第三章二氯二茂钛稳定性试验1 6 3 1 实验材料1 6 3 2 物理性状检测法1 6 3 3 高效液相色谱法2 l 3 4 讨论2 2 第四章二氯二茂钛在小鼠体内药代动力学初步研究2 3 4 1 实验材料2 3 4 2 血浆中二氯二茂钛测定方法的建立2 3 4 3 体内初步药代动力学研究2 6 4 4 讨论2 7 第五章结论2 8 参考文献2 9 综述3 2 个人简介”3 9 致诩 4 0 山西医科大学硕士学位论文 二氯二茂钛的质量标准、稳定性及初步药代动力学研究 摘要 二氯二茂钛是一种新型有机金属抗癌化合物，对实体瘤具有很强的抑制作 用，而且毒副作用较小，国外已进入二期临床研究。但目前国内外尚少见该化合 物的质量标准、稳定性及药代动力学的系统研究，本课题旨在研究二氯二茂钛的 质量标准、稳定性及初步的药代动力学，为新药的开发奠定基础。 方法：所有研究方法都根据“新药( 西药) 临床前研究指导原则汇编”及中 国药典2 0 0 5 版二部的要求。其中方法有：溶解度测定法，熔点测定法，p H 值 测定法，高效液相色谱法，气相色谱法，紫外分光光度法，红外分光光度法，气 相色谱外标标准曲线法，高效液相色谱内标标准曲线法，稳定性试验研究方法， 体内药代动力学研究方法。 结果： 一、质量标准： ( 一) 性状：性状、臭、味和稳定性：本品为暗红色结晶性粉末，无臭，无 味，易吸湿变质。溶解度：本品溶于二甲亚砜、氯仿、甲醇，微溶于乙醇，不溶 于水。物理常数：熔点为2 8 4 2 8 9 。C ；p H 值为3 0 4 3 0 6 ；紫外吸收E 值：8 5 1 ( 2 5 5n m ) 。 ( 二) 鉴别：呈色反应：使高锰酸钾褪色。色谱法：1 、反相H P L C 法：固 定相为V P O D SC 1 8 ，流动相为甲醇、醋酸铵，检测波长为2 5 4n n l 。2 、光谱法： 比较样品与对照品U V 、I R 图谱。 ( 三) 杂质检查：1 、有关物质的检查：反相H P L C 法，使主成分峰高为满 量程的1 1 0 ，记录色谱图到主成分保留时间的两倍，量取各杂质峰面积之和，并 用面积归一化法测定有关物质的量不得 1 。2 、有机残留溶媒的检测：采用气 相色谱法。( 1 ) 色谱条件： A g i l e n tH P 5 ( 5 p h e n y lm e t h y l s i l o x a n e ，3 0 m x 3 2 0 9 m ，0 2 5 9 m ) 毛细管柱，F I D 检测器，载气为N 2 ，二氯甲烷为溶 剂。( 2 ) 线性范围：氯仿、四氢呋喃的浓度与峰面积分别在7 8 5 6 3 5 9 9 m l ， 1 0 3 - 8 3 9 9 9 m l 范围内呈良好的线性关系；Y = 8 1 5 7 9 X + 1 2 3 1 ( r = 0 9 9 8 9 ) ， Y = 5 7 8 9 6 X 9 8 6 9 ( r - 0 9 9 9 3 ) ；( 3 ) 通过精密度、准确度、专属性考察，证明建 立的方法切实可行。( 4 ) 分别对本实验室合成的三批样品进行了测定，结果有机 残留溶剂含量都 9 9 9 ) ： 内标氨基比林对照品( 中国药品生物制品检定所提供，1 0 0 5 0 3 2 0 0 3 0 1 ，纯 度 9 9 8 ) ； 1 2 含量测定4 】 1 2 1 方法的选择 由于二氯二茂钛的溶解性特殊，其分析测试方法比较困难，目前已有的定量 测定方法操作繁琐、灵敏度低，而且析成本比较高。为此，本试验首次采用反相 高效液相色谱法对二氯二茂钛原料药进行了分析，该方法灵敏度高、选择性好， 还可以同时检查有关物质，保证了本品含量测定结果的准确可靠。 1 2 2 试验条件的选择 山西医科大学硕士学位论文 1 2 2 1 检测波长的选择 取本品，加甲醇制成每l m l 溶液中含1 t g 的溶液，照分光光度法( 中国药典 2 0 0 5 年版二部附录V IA ) 测定，在2 5 5 n m 的波长处有最大吸收，见图1 - 1 。 2 2 0 波长(姗)450 图1 1 样品U V 图谱 1 2 2 2 流动相的选择 选用甲醇与水、甲醇与醋酸铵等溶液分别配成不同比例的流动相进行比较研 究，结果表明，当V ( 甲醇) ：V ( 醋酸铵) = 5 5 ：4 5 时，样品与内标物分离度 良好，峰形和保留时间合适。见图1 2 。 t m i n a 标准品溶液 t m i r a b 标准品与内标 t r a i n C 样品与内标 1 二氯二茂钛( t R = 1 1 4 5 m i n ) ；2 内标氨基比林( t r t = 6 0 5 m i n ) ；3 杂质峰( t g = 4 6 5 m i n ) 图1 2 含量测定色谱图 1 2 2 3p H 条件的选择 研究发现，二氯二茂钛在甲醇溶液中会发生水解，会出现不同的峰值，本试 验考察了不同p H ( 2 5 、3 5 、4 5 、5 5 ) 条件下的色谱出峰情况，结果发现在p H 为2 5 时效果最好。 1 2 2 4 内标的选择 本含量测定选择内标法为测定方法，在上述色谱条件下，考察了头孢氨苄、 磺胺甲噫唑、阿司匹林、对乙酰氨基酚、氨基比林等不同的内标物，结果显示氨 基比林可以与二氯二茂钛完全分离( R 1 5 ) ，且保留时间适宜，故选氨基比林作 内标。 1 2 3 色谱条件 S h i m a d z u V P O D S 色谱柱( 2 5 0 x 4 6 m m ，5 I ，t m ) ；流动相为甲醇一醋酸铵( 5 5 ： 4 5 ，v v ) ，流速为1 0 m l m i n ；检测波长：2 5 4 n m ；柱温：室温。二氯二茂钛的峰 与相邻杂质峰的分离度应符合要求。 1 2 4 对照品、内标溶液的配置 对照品溶液准确称取干燥至恒重的二氯二茂钛对照品适量，用甲醇溶解制 备成含二氯二茂钛为0 2 m g m l 对照品贮备液，于4 冰箱中密闭保存。临用时， 精密吸取储备液适量，分别稀释成1 0 ，2 0 ，4 0 ，6 0 ，8 0 ，1 0 0 ，1 2 0 ，1 4 0 p , g m l 的标准系列溶液。 内标溶液 准确称取干燥至恒重的氨基比林适量，用甲醇配制成0 2 m g m l 的内标贮备液，于4 “ C 冰箱中密闭保存。临用时，精密吸取即可。 1 2 5 分析方法 1 2 5 1 线性关系 准备好的系列标准溶液在选定色谱条件下进样1 0 1 d ，记录对照品和内标峰面 积。以对照品与内标峰面积之比( f ) 对浓度( c ) 进行线性回归，得到回归方程 为f = 0 0 1 7 3 c + 0 0 0 8 6 ( 严0 9 9 9 4 ) ，见图1 3 。结果表明，在l O - - - , 1 4 0 9 9 m l 浓度 范围内，对照品与内标峰面积之比与浓度呈良好的线性关系。 1 3 含量测定线性关系考察 1 2 5 2 检测限试验 准确称取对照品适量，用甲醇溶液配制并稀释溶液，经H P L C 测定，记录色 谱图，使二氯二茂钛峰高为仪器响应噪声的3 倍量，测得的最小检测浓度为1 3 n g 。 1 2 5 3 精密