单击此处编辑标题样式 单击此处编辑副标题样式 *1 大肠杆菌的培养和分离 1、微生物 病毒病毒 细菌细菌 放线菌放线菌 真菌 原生动物 一、微生物的基础知识 (1)定义 (2)种类 (3)用途 2、菌落 （1）概念 （2）菌落是鉴定菌种的重要依据。 菌落 细菌的菌 落特征因 种而异 3、培养基 （1）成分 细菌培养：蛋白胨、酵母提取液、氯化钠 霉菌培养：无机物或添加蔗糖的豆芽汁 （2）种类 分离(纯化)细菌、 保存菌种 固体培养基 液体培养基 凝固剂 琼脂 作用 扩大培养细菌 液体培养基： 表面生长均匀混浊生长 沉淀生长 固体培养基：菌落，菌苔 4、生活环境 霉菌：中性偏酸 细菌：中性偏碱 二、无菌技术二、无菌技术 1.无菌操作的目的 防止培养基被其他微生物污染 (及避免操作者被微生物感染) 2、无菌技术包括 (1)将实验器具和培养基：高压蒸汽灭菌 (2)接种环(针)、试管口: 灼烧 灭菌 (3)实验操作空间：酒精+紫外线 消毒 （接种室(箱)、超净工作台） (4) 双手: 酒精 消毒 (5) 实验操作应在 酒精灯火焰 旁进行 (6)避免已灭菌处理的材料用具与 周围物品 相接触。 (7)棉塞(封口膜):只让空气通过，而空 气中的微生物不能通过。 灼烧灭菌 高压蒸汽灭菌锅 （）消毒定义： 利用化学或物理方法，杀死大部份 致病微生物的过程。 3.消毒与灭菌 （2）灭菌的定义： 以化学剂或物理方法消灭所有微 生物，包括所有细菌的繁殖体、芽孢 、霉菌及病毒，而达到完全无菌之过 程。 灭菌与消毒技术是微生物有关工 作中最普通也是最重要的技术。 三、分离细菌方法 2、涂布分离法 1、划线分离法 1、划线分离法 2、涂布分离法 2、涂布分离法 2、培养：在LB液体培养基上扩大培养 四、大肠杆菌的培养和分离 1、大肠杆菌 (1)特性： 革兰氏阴性、兼性厌氧的肠道杆菌 (2)用途： 基因工程技术中被广泛采用的工具 3、分离 灭菌 倒平板 培养 划线分离 LB液体和固体培养基及培养皿高压 蒸汽灭菌 将固体培养基倒入4个灭菌后的培养 皿中，制备平面培养基 在装有液体培养基的三角瓶中接种 大肠杆菌，培养12h 平板划线法 培养皿倒置，37恒温培养 1224小时 倒平板技术倒平板技术倒平板操作 接种到固体斜面培养基，菌落长成后，置于 4冰箱保存。 4、保存菌种 微生物的恒温培养微生物的恒温培养 微生物的恒温培养微生物的恒温培养 微生物的恒温培养微生物的恒温培养