河北医科大学 学位论文使用授权及知识产权归属承诺 本学位论文在导师( 或指导小组) 的指导下，由本人独立完成。 本学位论文研究所获得的研究成果，其知识产权归河北医科大学所 有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表 与学位论文主要内容相关的论文，第一署名为单位河北医科大学，试 验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。 否则，承担相应法律责任。 研究生签名：纠研导师签章： 妒：爹襄? 怒i 17 _ j 一j ；，? j 。一，、 二级学院翻黪枣i 。辞 钞瞥乡角菇箩 。一堂妒 河北医科大学研究生学位论文独创性声明 本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了 文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰 写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写， 文责自负。 研究生签名：付埘 导师签章： 7 “ O ，驴年弓月谄E t 目录 中文摘要1 英文摘要5 研究论文秦皮质量控制方法研究 引言11 第一部分液质联用技术联合响应曲面法优化提取条件同时定量秦皮及 其混淆品中1 1 种化学成分 前言1 2 日【J 舌。1 2 材料与方法1 3 结果1 7 附图2 2 附表2 7 讨 仑3 6 小结3 7 参考文献”3 7 第二部分秦皮H P L C 指纹图谱研究 前言4 1 日 I 吾4 l 材料与方法：4 1 结果4 4 附图4 8 附表5 4 讨论6 2 小结6 2 参考文献6 3 第三部分H P L C Q T O F M S M S 技术鉴定秦皮中化学成分 前言6 4日【J 舌6 4 材料与方法6 5 结果6 6 附图7 9 附表一9 1 讨论9 3 小结9 3 参考文献一9 4 结论9 6 综述中药秦皮的研究进展一9 7 致谢1 0 4 个人简历1 0 5 中文摘要 秦皮质量控制方法研究 摘要 秦皮是木犀科植物苦枥白蜡树F r a x i n u sr h y n c h o p h y l l aH a n c e 、白蜡树 F r a x i n u sC h i n e n s i sR o x b 、尖叶白蜡树F r a x i n u ss z a b o a n aL i n g e l s h 和宿柱 白蜡树F r a x i n u ss t y l o s aL i n g e l s h 的干燥枝皮或干皮，为临床常用中药。中 国药典记载其具有清热燥湿、收涩、明目的功能，用于治疗多种炎症、 细菌性痢疾等疾病。简单香豆素是秦皮中的一类主要活性成分，具有抗癌、 抗炎、抗病毒等作用。目前秦皮质量控制仅限于少数几种成分的含量测定， 且对于其4 种品种的区分及混淆品的鉴别多限于理化鉴定，难以对其进行 全面质量控制。本研究即采用液质联用技术( H P L C - M S M S ) ，对秦皮化 学成分进行了定性鉴别和定量测定，并建立了其指纹图谱分析方法，为更 科学有效控制秦皮质量提供参考。 第一部分液质联用技术联合响应曲面法优化提取条件同时定量秦皮及 其混淆品中1 1 种化学成分 目的：采用响应曲面法( R S M ) 优化提取条件，建立H P L C - M S M S 方法同时测定秦皮中1 1 种化学成分( 秦皮甲素、秦皮乙素、秦皮素、秦 皮苷、莨菪亭、异莨菪亭、橄榄苦苷、毛柳苷、丁香苷、6 羟基一7 ，8 二甲 氧基香豆素、8 羟基6 ，7 二甲氧基香豆素) ，用于秦皮及其混淆品的质量 控制。 方法：以样品量、甲醇浓度、提取时间3 个因素为自变量，秦皮中 11 种化学成分的含量为因变量，采用B B 设计( B o x - B e h n k e nd e s i g n ，B B D ) 设计3 因素3 水平共1 7 个试验点的响应曲面分析实验，进行多元线性回 归和二项式拟合，D e r r i n g e r S 满意度函数综合1 l 组实验数据，优化萃取 提取条件，并进行预测分析。采用多反应监测( 删) 正、负离子切换 模式进行H P L C M S M S 定量分析，将同二个分析周期分为3 段，分别采 用负正一负离子切换模式检测，1 1 种化学成分在1 6r a i n 内即可被 H P L C M S M S 全部检测。实验采用A g i l e n tZ o r b a xS B C 1 8 ( 2 5 0m m 4 6 m m i d 5 岬) 色谱柱进行分离，梯度洗脱，流动相为甲醇和O 5 乙酸水 中文摘要 缓冲溶液，流速1 0m L m i n 。用所建立的方法对不同来源的5 5 批秦皮及 其混淆品药材进行分析( 包括2 1 批经鉴定的4 种秦皮、3 批秦皮混淆品 和3 1 批市售秦皮药材) 。 结果：R S M 优化的最佳条件：样品量1 1 0 0m g ，甲醇浓度7 3 ，提 取时间6 5m i n 。在此条件下提取秦皮药材，依法测定1 1 种化学成分含量， 对预测结果进行验证。实测值与理论预测值接近，相对误差小于4 5 3 ， 说明通过采用响应曲面法得到了能较好预测试验结果的模型方程。该方法 采用多元二次回归方程来拟合因素与响应值之间的函数关系，求得的回归 方程精度高，可精确计算出最优条件的参数水平和预测响应值；此外还能 研究几种因素间的交互作用，并可综合考虑多响应值的最优条件，比单因 素法更全面。11 种化学成分在测定浓度范围内线性关系良好，检测限、 定量限、精密度、准确度和溶液稳定性均符合要求。样品测定结果表明， 秦皮正品及其混淆品差异较大，可根据其主成分含量差异进行区分。 结论：本研究首次建立了正负离子切换模式H P L C M S M S 法联合 R S M 优化多响应提取条件同时测定秦皮药材及其混淆品中11 种化学成分 的方法。该法分析速度快、专属性强、灵敏度高。5 5 批秦皮药材及其混 淆品的质量分析结果表明，秦皮甲素、秦皮乙素、秦皮素、秦皮苷的含量 为秦皮正品及其混淆品的主要成分。该法的建立为中药秦皮的质量控制提 供了新依据，也为中药定量研究提供了新思路。 第二部分秦皮I t P L C 指纹图谱研究 目的：建立秦皮H P L C 指纹图谱分析方法，为科学评价秦皮质量提供 参考依据。 方法：( 1 ) 色谱条件的优化：考察了不同的流动相、波长、柱温等影 响因素，确定最佳色谱条件。( 2 ) 系统适用性试验：在确定的色谱条件下 考察指纹图谱中秦皮甲素峰的理论板数以及各色谱峰的分离度。( 3 ) 方法 学考察：分别进行了精密度、重复性和稳定性考察。( 4 ) 主要色谱峰的指 认：通过与对照品保留时间和紫外光谱图比较，以及分析化合物的质谱离 子特征，指认秦皮样品指纹图谱中主要色谱峰。( 5 ) 样品分析：分别取 5 2 批秦皮样品和3 批秦皮混淆品，制备供试品溶液，进行指纹图谱分析 和相似度评价。 2 中文摘要 结果：( 1 ) 色谱条件：A g i l e n tZ o r b a xS B C 1 8 色谱柱( 2 5 0 m l T l 4 6m l T l i d 5 o m ) ；柱温：2 5 ；流动相：A 为甲醇，B 为0 5 乙酸水缓冲溶 液，梯度洗脱；流速：1 0m L m i n 。进样量：l O 止。检测波长：2 3 0n l i l 。 ( 2 ) 系统适用性试验：秦皮甲素峰的理论板数约为1 6 0 0 0 ，各色谱峰的 分离度均符合要求。( 3 ) 方法学考察：精密度试验：各主要色谱峰相对保 留时间和相对峰面积的R S D 分别小于O 3 8 和3 5 5 ，说明精密度良好。 重现性试验：各主要色谱峰相对保留时间和相对峰面积的R S D 分别小于 0 6 7 和3 9 8 ，说明重现性良好。稳定性试验：各主要色谱峰相对保留 时间和相对峰面积的R S D 分别小于0 8 6 和4 9 8 ，说明样品溶液7 2h 内稳定。( 4 ) 主要色谱峰的指认：共指认出秦皮样品指纹图谱9 个主要色 谱峰。( 5 ) 样品分析：对5 2 批秦皮药材进行指纹图谱分析，以秦皮对照 药材的指纹图谱为对照图谱，计算各样品图谱与对照图谱的相似度，得到 1 0 个共有峰，结果表明，采用所建立的方法可将5 2 批秦皮药材分为3 类， 其相似度分别在O 8 1 0 、0 6 0 8 和0 4 0 6 之间，说明所建立的方法可以 很好的区分秦皮药材质量差异；4 种不同品种秦皮的指纹图谱分析结果表 明，所收集的4 种秦皮品种内相似度较高，而不同品种秦皮所含有的共有 峰数量和面积差异较大，表明品种间存在差异；比较秦皮对照药材与3 种秦皮混淆品的指纹图谱，结果显示，3 种秦皮混淆品的色谱图与秦皮对 照药材的色谱图相似度均小于O 4 7 ，且共有峰仅有两个，表明秦皮与其混 淆品差异较大，所建立的方法可以很好的区分秦皮与其混淆品。 结论：本部分研究建立了秦皮药材的H P L C 指纹图谱分析方法，利用 相似度对不同种类秦皮间的差异、秦皮正品与混淆品间的差异进行了研 究，对秦皮药材的质量进行了综合评价，方法重现性和精密度良好，能简 便、快速的鉴别和区分秦皮正品和混淆品。本方法可用于秦皮药材的质量 分析与评价，为秦皮的质量控制方法做了有意义的补充。 第三部