,汉坦病毒 肾综合征出血热,HFRS,2016级预防一班 第四组,汉坦病毒详述,1,形态学特征，汉坦病毒归属布尼亚病毒科，是一种有包膜分节段的负链RNA病毒，形态呈圆形或卵圆形，有双层包膜，外膜上有纤突。平均直径为120nm。 基因组包括L、M、S 3个片段， 分别编码L聚合酶蛋白G1和G2糖蛋白、核蛋白 汉坦病毒属至少有10个以上血清型 I型汉坦病毒 II型汉城病毒 III型普马拿病毒 IV型希望山病毒,引发疾病及症状,2,流行病学,3,汉坦病毒的诊断,临床表现 -三种主要表现 发热中毒症状、充血、出血、 外渗征、肾损害 -病程五期经过 发热期、低血压休克期、少尿期、多尿期、恢复期。 热退后症状加重,血常规检查 尿常规检查,4,样品采集方法,采集方法,采集肘部静脉血 将血清标本稀释 10 倍，接种到单层Vero E6 细胞，每 20 天传一代，盲传三代后滴抗原片，经直接免疫荧光检测 HV 抗原，结果为阳性，继续传代直至荧光颗粒增强到 + + + + + + +，70冰箱保存。,检测方法,病毒分离 将血清标本稀释 10 倍，接种到单层Vero E6 细胞，每 20 天传一代，盲传三代后滴抗原片，经直接免疫荧光检测 HV 抗原，结果为阳性，继续传代直至荧光颗粒增强到 + + + + + + +，70冰箱保存。,病毒 RNA 的提取和 HV 分型检测 采用 QIA-GEN 公司的 QIAamp Viral RNA Mini Kit，从反复冻融的细胞液中提取病毒 NA，操作方法按试剂说明书进行。以病毒 NA 为模板，用 HTN 和 SEO 型特异性分型引物进行分型检测,5,逆转录聚合酶链反应 ( R T一P C R ),R T 一P C R 法被广泛应用于H V 感染的诊断, 可检测感染细胞、人及动物的活检组织和血清样本中的H V R N A 该方法的优点 是可用于区分病毒的种和亚型, 还可用于检测用病毒分离或血清学方法不能诊断的样本。设计引物及反应条件要依具体情况而定,检测已知病毒的基因组, 主要应用直接PC R法, 而检测未知基因型宜用套式PCR 法。序列分析表明,H V 的S 片段序列较M 片段更为保守。根据S片段保守区设计了种特异性引物, 根据M 片段设计了针对每一型别的特异性引物, 并对27 个分离株进行了R T一P C R 法检测, 产物用限制性内切酶分析。 结果显示: PCR 法与血清学分型完全吻合, 因此R T一P C R 法不仅可以辅助血清学诊断, 且可独立地进行H V 的分型和诊断。,6,治疗方法和预防性措施,谢谢观看,Thank you for watching,