中国协和医科大学 博士学位论文 赤芍提取物在大鼠体内的药代动力学及其对大鼠皮质、海马和 纹状体中单胺类神经递质影响的研究 姓名：何希辉 申请学位级别：博士 专业：生药学 指导教师：徐丽珍;杜力军 20040401 里堡塑墨型查堂里墨兰型堂堕苎主兰焦笙兰 笪三墨茎望墅墨! 型! 型些竺! 一 简写 A U C C L D A D H B A D O P A C E C D 5 H I 从 H P L C 5 一H T 姗P G 豫T N E 0 S A P F P R E P T t 1 2 V d 简写及英汉对照 英文名 a r e au n d e rt h ec u r v e c l e a r a n c e d o p a m i n e 3 ，4 - d i h y d r o x y b e n z y l a m i n e 3 ，4 - d i h y d r o x y p h e n y l a c e t i ca c i d e l e c t r o c h e m i c a ld e t e c t i o n 5 一b y d t o x y i n d o l e a c e t i ca c i d h i g h - p e r f o r m a n c e1i q u i dc h r o m a t o g r a p h y s e r o t o n i n 3 - m e t h o x y 一4 - h y d r o x y p h e n y l e t h y l e n e g l y c o l m e a nr e s i d e n c et i m e n o r e p i n e p h r i n eo rn o r a c I r e n a l i n e o c t y ls o d i u ms u l f a t e p a e o n i f l o r i n P a e o n i a eR a d i xe x t r a c t p e n t O x i f y l l i n e t e r m i n a lh a l f - 1 i f e v o l u m eo fd i s t r i b u t i o n 汉语名 药时曲线下面积 清除率 多巴胺 3 。4 - - - 羟基苄胺 3 ，4 一二羟基苯乙酸 电化学检测 5 一羟吲哚乙酸 高效液相色谱 5 一羟色胺 3 一甲氧一4 一羟苯乙二醇 平均滞留时间 去甲肾上腺素 辛烷磺酸钠 芍药苷 赤芍提取物 己酮可可碱 半衰期 分布容积 中国协和医科大学中国医学科学院博上学位论文 摘要 赤芍提取物在大鼠体内的药代动力学及其对 大鼠皮质、海马和纹状体中单胺类神经递质影响的研究 博士生：何希辉 导师：徐丽珍教授 杜力军教授 ( 中国协和医科大学中国医学科学院药用植物研究所，北京，1 0 0 0 9 4 ： 十清华大学生物科学与技术系，北京，1 0 0 0 8 4 ) 摘要 本文对大鼠静脉注射不同剂量赤芍提取物( P a e o n i a eR a d i xe x t r a c t ，P R E ) 后，其中的主要活性成分芍药苷( P a e o n i f l o r i n ，P F ) 在正常和脑缺血再灌大鼠血 浆和大脑中的动力学变化进行了研究，并对静脉注射不同剂量P R E 后大脑不同 区域单胺类神经递质的变化进行了考察，还对P R E 的抗抑郁作用进行了初步的 筛选，主要内容如下： 1 P R E 中P F 在正常和脑缺血再灌大鼠血浆中的动力学变化 在本研究中，采用阻断大鼠双侧颈总动脉2h 后恢复再灌，观察脑不完全缺 血再灌对P F l 1 药浓度变化的影响。分别给予6 0 m g - k 菩1 和1 5 m g k g 。1 两个剂量( 给 药剂量以P R E 中P F 的含量计) 的P R E 后，在不同时间点取血样，用H P L C 法 测定了各时间点的血药浓度，并对得到的血药浓度时间数据进行数学模型拟合， 计算相关的药动学参数。 结果表明：静脉给予P R E 后，血中P F 浓度下降速度很快，剂量为6 0 m g k 叠1 时，4h 后血药浓度即低于定量限( 0 5l a g m L 1 ) ，剂量为1 5m g k g 。时，2 h 后 血药浓度即低于定量限( O 5l a g - m E l ) 。P F 的体内过程符合二室开放模型，在正 常和脑不完全缺血再灌注状态下，P F 的药代动力学参数有明显差异( P o 0 5 或 P 0 0 1 ) 。剂量为6 0 m g k g _ l 时，正常组动物的主要药动学参数分布半衰期( t l ，2 。) 、 消除半衰期( q t 2 1 B ) 、药时曲线下面积( A U C ) 、平均滞留时间( M R T ) 、清除率( c L ) 分 别为0 6 9m i n 、1 8 7 7m i n 、5 3 3 8 7 1 ( r a g m i n ) m l 、1 8 1 3m i n 和0 0 1 6 2 m g ( k g m i n ) 缺血再灌组相应参数分别为2 0 4m i n 、2 4 5 1m i n 、9 6 2 6 0 0 ( 1 a g m i n ) m l 、2 9 7 5m i n l 主里塑塑垦整查兰主里墨兰型兰堕竖圭兰垡堡苎_ _ 堕! ! 一 和0 0 0 7 1m ( k g r a i n ) 。剂量为1 5m g k g1 时，正常组动物的主要药动学参数t l 2 a 、 t 1 ，2 B 、A U C 、M R T 、C L 分另U 为6 8 0 m i n 、2 4 5 1m i n 、9 0 3 3 4 ( 斗g m i n ) m l 、2 7 2 6 m i n 和O 0 1 7 7m g ( k g r a i n ) ，缺血再灌组相应参数分别为4 9 9m i n 、4 3 9 9r a i n 、 3 5 6 0 0 ( I x g m i n ) m l 、3 2 6 3m i n 和0 0 4 3 5m g ( k g m i n ) 。 上述结果表明在正常和脑缺血再灌状态下，P F 体内过程变化较大，其原因 有待于进一步探讨。结果提示我们，缺血再灌可能对P F 的药动学过程有着重要 影响。此外，我们还发现，大鼠分别给予P R E 和单体P F ( 按P F 计算剂量相同) 后，在同一时间点( 1 0 r a i n ) 给予P R E 的动物P F 血药浓度明显高于给予单体的 动物( P 0 0 5 ) ，提示给予有效部位后，药理作用的持续时间可能比给予单体 长。 2 P R E 中P F 在正常和脑缺血再灌大鼠不同脑区的分布 在本研究中，我们建立了测定皮质、海马中P F 含量的H P L C 分析方法：定 量I 辊( L L Q ) 为1 I l g m 1 1 ，在l 5 0g g m l - 1 范围内，线性关系良好( r - - 0 9 9 9 9 ) ，P F 浓度分别为1 ，1 0 ，5 0 鸺m 1 1 时，日问和日内精密度分别为7 0 0 ，0 5 8 ，1 4 6 和 5 4 8 ，1 7 9 ，1 7 0 ，海马样品的回收率分别为9 8 2 8 2 1 4 ，9 8 9 6 1 4 8 和 9 5 3 4 0 9 2 ，皮质样品的回收率分别为8 2 0 0 - 1 3 8 ，8 2 7 9 - 士1 0 6 和8 2 4 5 3 5 7 。 用所建立的方法，测定了静脉给予不同剂量P R E 后，在正常和脑缺血再灌 损伤模型大鼠大脑不同核团中P F 浓度的经时变化过程。实验结果表明，静脉给 予P R E 后，其中的主要成分P F 能迅速穿透血脑屏障，到达大脑各个区域，这为 P F 对大脑的药理作用提供了物质基础。剂量为6 0m g k 9 1 时，皮质、海马和其它 脑区均能检测到P F ，剂量为1 5m g k g 。时，除了皮质中的P F 外，其它脑区中P F 浓度均低于检测限。与正常动物相比，除个别时间点外，缺血再灌对P F 在大脑 中动力学变化没有明显影响。此外，我们还发现，分别给予P R E 和单体P F ( 按 P F 计算剂量相同) 后，在同一时间点( 1 0 r a i n ) 给予P R E 的动物脑内不同核团 中P F 浓度明显高于给予单体的动物( P o 0 5 ，或P O 0 1 ) ，提示与单体给药相比， 给予P R E 后，能促进P F 穿透血脑屏障，药理作用的持续时间可能比给予单体长。 2 中国协和医科大学中国医学科学院博士学位论文 摘要 3 静脉注射P R E 对皮质、海马和纹状体中单胺类神经递质的影响 在本研究中，我们用H P L C 电化学检测法对大鼠静脉给予P R E 后神经分布 密集的脑区皮质、海马和纹状体中单胺类神经递质多巴胺( D a p a m i n e ，D A ) 、5 一 羟色胺( S e r o t o n i n ，5 - H T ) 、去甲肾上腺素( N o r e p i n e p h r i n e ，N E ) 及其代谢产 物3 , 4 一二羟基苯乙酸( 3 ，牟d i h y d r o x y p h e n y l a c e t i ca c i d ，D O P A C ) 、5 羟吲哚乙酸 ( 5 - h y d t o x y i n d o l e a c e t i ca c i d ，5 - H I A A ) 进行了测定，探讨了P R E 对这些递质及 其代谢产物的影响及可能机制，并采用脑不完全缺血再灌模型，观察了P R E 对缺 血再灌注损伤后递质变化的影响。 正常大鼠静脉给予不同剂量P R E 后，大脑不同神经核团中单胺类神经递质 水平变化的主要表现如下：皮质和海马中的D A 及其代谢产物D O P A C 下降， 而大脑中D A 含量最高的脑区纹状体中D A 及其代谢产物D O P A C 的明显升高； 皮质和纹状体中N E 的迅速下降，海马中的N E 则无明显变化：皮质中5 - H T 和5 一H I A A 变化趋势并不明显，大剂量组引起海马和纹状体中5 - H T 下降而 5 一H I A A 的含量增高。 缺血再灌大鼠静脉给予P R E 后，大脑不同神经核团中单胺类神经递质水平 变化的主要表现如下：P R E 对皮质中D A 表现出双向调节作用，使D A 维持在 相对稳定的水平，而对海马中D A 先是上升，继而下降，D O P A C 则下降，未引 起纹状体D A 及D O P A C 明显变化，二者的比值亦无明显变化。缺血再灌动物 给予P R E 后，使皮质5 一H I A A 的水平相对稳定；海马中5 。H T 下降，5 一H I A A 变 化不明显。 上述实验结果表明，给予P R E 后，大脑不同神经核团单胺类神经递质水平 变化不尽相同，这可能与P R E 作用于不同受体或不同受体亚型有关。此外在正 常和模型动物中，P R E 对皮质、海马和纹状体中单胺类神经递质及其代谢产物表 现出不同的作用，其原因有待于进一步探讨。 4 P R E 抗抑郁作用初步筛选 抑郁症是危害全人类身心健康的常见病，近年来，国内外在抑郁症的病因学、 发病机制以及治疗方法和治疗药物的研究，都取得了令人瞩目的进展。在本部分 研究中，我们应用小鼠悬尾、强迫性游泳、隔离攻击性行为等行为绝望，实验 中国协和医科大学中国医学科学院博士学位论文 摘要 诱导的抑郁模型对P R