硕硕 士士 学学 位位 论论 文文 湖羊瘤胃微生物 Fosmid 文库的构建及木聚糖酶基因 的筛选、分析 作作 者者 姓姓 名名 安安 培培 培培 指指 导导 教教 师师 叶均安叶均安 副副教授教授 刘建新刘建新 教授教授 学学 科科 专专 业业 动物营养与饲料科学动物营养与饲料科学 所所 在在 学学 院院 动动 物物 科科 学学 学学 院院 提提 交交 日日 期期 二二一一 年年 五五 月月 中国中国 杭杭 州州 分分 类号类号： 单 位 代单 位 代 码码： 10339 密密级级： 研究生学研究生学号号：20817027 湖羊瘤胃微生物 Fosmid 文库的构建及木聚糖酶基因 的筛选、分析 论 文 评 阅论 文 评 阅 人人： 答辩委员会主席答辩委员会主席： 教授教授 答辩委员会成员答辩委员会成员： 教授教授 教授教授 教授教授 教授教授 论 文 答 辩 日 期论 文 答 辩 日 期 ： 二二一一 年年 六六月月 Construction of Fosmid Metagenomic Library of Rumen Microbiota from Hu Sheep and xylan enzyme gene screening and analysis By Pei-pei An A Dissertation Submitted to the Graduate School of Zhejiang University for Masters Degree Supervisors: Prof. Dr. J. X. Liu College of Animal Science Zhejiang University Hangzhou 310029 P. R. CHINA MAY, 2010 2010 年浙江大学硕士学位论文 I 目目 录录 目 录 .I 图表一览表 .IV 摘 要 .V Abstract.VII 第一章 文献综述. 1 1 木聚糖以及木聚糖酶 . 1 1.1 木聚糖. 1 1.2 木聚糖酶. 3 2 瘤胃微生物. 5 2.1 瘤胃微生物种类. 5 2.2 产木聚糖酶的微生物. 7 3 宏基因组学简介. 8 3.1 宏基因组学的概念. 8 3.2 宏基因组文库的分类. 9 3.3 宏基因组文库的构建及筛选 . 10 3.4 瘤胃宏基因组学的应用.11 4 本研究的目的和意义 . 12 第二章 湖羊瘤胃微生物 Fosmid 文库的构建. 14 1 材料 . 14 1.1 瘤胃样品来源 . 14 1.2 主要试剂和仪器. 14 1.3 Fosmid 载体及大肠杆菌菌种的保存. 15 1.4 培养基和抗生素的配制. 16 1.5 常规溶液，缓冲液的配制. 16 2 方法 . 17 2.1 瘤胃微生物 DNA 的提取 . 17 2.2 瘤胃微生物 DNA 的纯化 . 18 2010 年浙江大学硕士学位论文 II 2.3 “插入 DNA”的末端修复. 18 2.4 连接反应. 19 2.5 CopyControl Fosmid 克隆的包装. 20 2.6 CopyControl Fosmid 文库的涂布与筛选. 21 2.7 CopyControl Fosmid 文库的保存. 21 2.8 Fosmid 文库稳定性及库效率的评定. 21 3 结果 . 23 3.1 总 DNA 的提取和纯化 . 23 3.2 文库的稳定性及库效率的评价. 24 4 讨论 . 25 5 本章小结. 26 第三章 文库中木聚糖酶基因的筛选与分析.