DNA的粗提取与鉴定 v通过本节课的学习我们要 v知道DNA提取原理 v据原理设计DNA提取方法 v能对DNA进行鉴定 v掌握本实验的基本操作方法 DNA粗提取与鉴定 基础知识基础知识 提取提取DNADNA的方法的方法 1 1 提取生物大分子的基本思路 提取生物大分子的基本思路 选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理 或化学性质的生物大分子或化学性质的生物大分子 2 2 生物大分子 生物大分子 主要指蛋白质 酶和核酸主要指蛋白质 酶和核酸 3 3 提取 提取DNADNA的基本思路的基本思路 利用利用DNADNA与与RNARNA 蛋白质和脂质等在物理和化 蛋白质和脂质等在物理和化 学性质方面的差异 提取学性质方面的差异 提取DNADNA 去除其他成分 去除其他成分 DNA提取原理 资料一 1 DNA在不 同浓度NaCl溶液中溶 解度不同 蛋白质在0 14mol L中的 溶解度大 在高盐浓度 下溶解度小 v2 DNA不溶于酒精 细胞中某些蛋 白质则溶于酒精 v资料二 v洗涤剂瓦解细胞膜 v动物细胞吸水会胀破 v资料三 v1 酶的专一性 蛋白酶水解蛋白 质而不会对DNA产生影响 v2 蛋白质 DNA热稳定性不同 温 度值为60 80 因为该温度值蛋 白质变性沉淀 而DNA不会变性 资料四 DNA的鉴定原理 v当鉴定提取出的物质是否是DNA时 需要使用什么指示剂进行鉴定 在沸水浴条件下 DNA遇二苯 胺呈现蓝色 注意 二苯胺要现配现用 使用时取4ml 二苯胺加一滴已乙醛摇匀再倒入待测 样液 DNADNA的鉴定操作步骤的鉴定操作步骤 A A B B试管中先分别加入物质的量的浓度为试管中先分别加入物质的量的浓度为 2mol L 2mol L 的的NaClNaCl溶液溶液5ml5ml 其中其中A A试管加入试管加入DNADNA丝状物 丝状物 B B不加丝状物 不加丝状物 各加入二苯胺各加入二苯胺4ml 4ml 试剂 试剂 沸水中加热沸水中加热5min5min 待试管冷却后 比较两只试管中溶液颜色的变化待试管冷却后 比较两只试管中溶液颜色的变化 实验设计 v据资料二思考 如何使DNA从细胞里释放出来 得到含有DNA的滤液 v利用什么原理可以使动物细胞或植物细胞破 裂 植物细胞可以加入一定量的食盐和洗涤 剂 动物细胞吸水会胀破 这样能得到含 有DNA的滤液 食盐和洗涤剂的用途分别是什么 食盐溶解DNA 洗涤剂溶解细胞膜 实验设计 v根据资料提供的DNA理化性质 你 能思考提取DNA的基本方法吗 例 根据蛋白质 DNA热稳定性不同 温度值为60 80 因为该温度值 蛋白质变性沉淀 而DNA不会变性 v方案一 将滤液放在 的恒温水浴箱中保温10 15min 注意严格控制温度范围 使 沉淀而 分子还未变性 可以将DNA与 蛋白质分离 60 67 蛋白质 DNA 根据资料一思考 v1 DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度有何特点 要 使DNA溶解 需要使用什么浓度 要使DNA析出 又需要使用什么浓度 在0 14mol L时溶解度最小 较高浓度 可使DNA溶解 0 14mol L可使DNA析 出 在溶解细胞中的DNA时 通常可 选用2mol LNaCl溶液 将DNA分子析 出的方法是向溶有DNA的NaCl溶液中 缓慢注入蒸馏水 以稀释NaCl溶液 如何利用这一性质设计提取方案 v方案二 通过控制 NaCl 的浓度去除蛋白质 30mL滤液 2mol NaCl40mL 同方向搅拌 DNA溶解 加入蒸馏水0 14mol NaCl DNA 析出 过滤得到过滤物 放到2mol LNaCl溶 液中溶解 DNA NaCl溶解液 2采用DNA不溶于酒精的原理 可以 达到什么目的 将DNA和蛋白质进一步分离 v方案三 v直接向滤液中加入 反应10 15min 中的 能够分解蛋白质 v 此方案利用了酶的什么特性 嫩肉粉 木瓜蛋白酶 嫩肉粉 蛋白酶 专一性 v实验拓展 v你还能作些什么探究 交流 v1 动物组织和植物在提取方法上有什么不同 v为什么 v2 用同样的方法提取时 哪种材料较好 v3 用同种材料同样方法时洗涤剂与NaCl比 例不同 有没有影响 v4 用玻璃烧杯和塑料烧杯哪种效果好 v5 你有什么疑惑吗 或者有更好的建议 结果分析与评价 1 你提取出了白色丝状物吗 用二苯胺鉴定的结果如 何 2如果鉴定结果不出现蓝色 讨论可能是什么原因 3 你能分析出粗提取的DNA可能含有哪些杂质吗 4 哪些因素会影响实验效果 v从核DNA数目来看 猪38条 鸡78条 哺乳 动物血0条 猕猴桃58条 洋葱16条 香蕉 33条 菠菜12条 大肠杆菌1条 你能分析 你的实验结果吗