园I三什么是电子克隆拼图游戏一样的原理如何做拼接万常用软件及网络资源简介优点与缺点的讨论么是电子克隆DWatson&Crick成功解析了DNA分子二级结构,开创了分子生物学时代。DKarryMullis发明了PCR反应,体外大规模、有目的和快速地克隆目标基成为可能。D信息科学技术特别是数据库技术在战后飞速发展。/日E菖口表达序列标签(eEST)是对某个基cDNA克q隆reSSedsequencetags序辟淅的部分序列片段,长度大约为200600bp口由于基mRNA前口EST既代表了基芯调控作的窒位男不同,所以同个基的仝长cDNA可能包多个ESTDNA的桅了成熟mRNA可能的真接方式一区段,也表征。电子克隆技术是生物学数据库中EST数据库、核酸序列数据库、基因组数据库,采用同源性序列比对和归类分析、重叟区域组装和拼接等方法延长EBST序列,直至没有与之同源的序列可供拼接为止,所得到的序列可以认为是相对应基因的全长cDNA,根据所得的ecDNA序列设计囊括开放阅读框两端的引物,进行RT-PCR克隆出相应基因的方法。传统的克隆方法是利用基因特异性引物大量扩增cDNA未端或构建cDNA文库并采用原位杂交进行筛选,实验进程长、步骤繁琐、成本高、得率低;运用电子克隆的方法延伸得到的cDNA几乎嗣括了所有疑似为目的基的ecDNA序列,无论表达转录如何调控都能通过PCR扩增出表达的那一段基比就如同集约化地捕捞一群鱼传统的方法如同小规模地捕捞一条或几条鱼,电子克隆与之相的原理口相近的物种在核酸序列上有相似性,相近物种中的同源基因序列在一定程度上可以代表目的基因的序列一口可代表程度与两序列的相似度直接相关,加之遗传密码的简并性,这种混同在理论上是可行的,但需要作同源性检验以克服主观素的影响。借助计算机找到具有相同或相似图案的图块,拼成完整的图案,我们需要做的是进行局部的微调。口剩下的工作就是对拼接出的cDNA进行可能的开放阅读框的分析,设计囊括开放阅读框两端的引物，RT-PCR扩增侯选基5电子克隆主要应用于两个方面:娆一个是利用EST序列检索同源性序列并由此拼接cDNA序列以期挖掘新基因“另一方面是在全基研究熬个皋现的基组序歼组已经测序的物种中,以推测目前应用比较广泛的是第一方面其中可能尚未发口以电子克隆新的水稻过氧化氡酶(catalase,CAT)基因为例,简介延伸cDNA的流程:目以登录号为CA759712的EST在对其在核酸序列数据库中进行BLAST检索比对时,发现登录号为CB652681的序列推测为水稻C47基的部分序列,与信息标签EST具有比较高的同源性,该EST序列将作为种子序列。E