磁珠法尿液基因组DNA提取试剂盒MagBeads Urine DNA Extraction Kit【目 录 号】UDE-5010、UDE-5030、UDE-5100【运输条件】225；【保存条件】磁珠分散液 28，蛋白酶K -20，其它组分室温；【试剂盒组成】Kit Component试剂盒组成UDE-5010（100T）UDE-5030（300T）UDE-5100（1000T） Magnetic Beads 磁珠悬浮液7.5mL22.5mL75mL UDE Buffer ML 裂解液40mL120mL400mL Wash Buffer 1 清洗液160mL180mL600mL Proteinase K 蛋白酶K2mL6mL20mL Elute Buffer 洗脱液10mL30mL100mL【注意事项】1. 磁珠悬浮液严禁反复冻融和离心，以免磁珠受到损害，使用前务必充分混匀；2. 蛋白酶K长期不使用，请置于-20保存，融化后4保存，并尽快使用；3. 尿液样本应避免反复冻融，否则会导致核酸提取得量降低；4. 本操作指南经本公司反复验证，使用前请仔细阅读，并按照操作指南建议操作。1【产品简介】本试剂盒适用于从新鲜或冷冻尿液样本中提取基因组DNA，在裂解液（UDE Buffer ML）环境中，基因组DNA特异性的结合于磁珠表面，经过清洗和洗脱等步骤之后，可得到高纯度的基因组DNA产物，OD260/280的比值在1.71.9之间，OD260/230的比值大于1.8，完整性好，整个操作过程简单、快速且高效。所得产物可直接用作PCR模板、杂交等下游分子生物学实验。本试剂盒可手动法在EP管中进行操作，亦可配合核酸提取仪使用，实现自动化、高通量操作。【试剂盒说明】样本类型样本量DNA提取范围浓缩尿液1mL015g【自备仪器、耗材和试剂】手动版涡旋混合仪、水浴锅或金属浴、EP管（2.0mL）、磁力架（适用于EP管）、无水乙醇、异丙醇、磷酸缓冲盐溶液（pH值7.4）。仪器自动版涡旋混合仪、水浴锅或金属浴、核酸提取仪、96孔方孔圆底板、EP管（2.0mL）、无水乙醇、异丙醇，磷酸缓冲盐溶液（pH值7.4）。【手动版操作步骤】1 尿样前处理1) 取10.015.0mL原尿，室温、5000rpm离心10min，吸弃上清液至剩余约1mL液体；2) 将上述样本转移至2.0mL EP管中，室温、10000rpm离心2min，吸弃上清液；3) 向EP管中加入500L PBS溶液，颠倒混匀3次，室温、10000rpm离心2min，吸弃上清液。2 尿样裂解向EP管中加入400L裂解液和20L蛋白酶K，涡旋振荡充分混匀内容物。置于58环境中裂解35min，每隔5min颠倒混匀一次。3 核酸与磁珠结合向裂解完毕EP管中加入75L磁珠悬浮液（提前摇匀）和400L异丙醇，涡旋振荡10min。24 磁性分离将EP管置于磁力架上静置约20s至磁珠吸附完全，如EP管内盖有残留磁珠，可保持EP管在磁力架上，上下颠倒23次，磁珠可完全被磁力架吸附。保持EP管于磁力架上，吸弃上清液，期间避免接触磁珠。5 清洗1向EP管中加入600L清洗液1，将EP管从磁力架上取下，剧烈震摇或吹打使磁珠充分分散，涡旋震荡2min，磁性分离（参照步骤4操作）。注：若磁珠出现团聚现象，为DNA含量多引起，不影响核酸提取效果。6 清洗2使用600L 80%乙醇，参照步骤5操作2次。7 干燥除醇将清洗完毕并除尽上清液后的EP管置于磁力架上，连同磁力架一起放入45真空干燥箱中，干燥约10min至无明显乙醇味。注：若无真空干燥箱，也可将EP管置于通风橱通风或电风扇直吹约10min，具体时间以除醇完全为原则。8 洗脱取出EP管，加入100L洗脱液，移液枪吹打使磁珠与洗脱液充分混匀，将EP管于58环境中洗脱10min，每隔3min涡旋振荡30s，确保磁珠与核酸洗脱完全。9 核酸转移将EP管置于磁力架上静置20s至磁珠吸附完全，用移液枪将洗脱液转移至另一干净EP管中，提取步骤完毕，此时可以弃去磁珠。【仪器自动版操作步骤】以下操作步骤以英芮诚ETP-300型全自动核酸提取仪为例，可同步完成32个样本的提取工作。1 准备96孔板样品位1、72、83、94、105、116、12试剂磁珠悬浮液：75L80%乙醇：200L异丙醇400L清洗液1600L80%乙醇600L80%乙醇600L洗脱液100L参照下表用量向96孔板中分别加入相应试剂：注：1）吸取磁珠悬浮液前尽量摇晃均匀；2）为提高效率建议使用排枪进行操作。2 尿样前处理1) 取10.015.0mL原尿，室温、5000rpm离心10min，吸弃上清液至剩余约1mL液体；2) 将上述样本转移至2.0mL EP管中，室温、10000rpm离心2min，吸弃上清液；33) 向EP管中加入500L PBS溶液，颠倒混匀3次，室温、10000rpm离心2min，吸弃上清液。3 尿样裂解向EP管中加入400L裂解液和20L蛋白酶K，涡旋振荡充分混匀内容物。58加热裂解35min，每隔5min颠倒混匀一次。裂解完毕，室温放置5min，然后室温、12000rpm离心1min，待用。4 上机提取将步骤3离心完毕裂解液全部转移至96孔板第2/8列孔位中；将96孔板置于核酸提取仪中，插入磁棒套；打开仪器操作软件，调用“尿液DNA提取程序”，并运行程序。“尿液DNA提取程序”参数设置如下，如仪器上程序参数与说明书不一致，请以说明书为准：步骤编号孔位运行类型振荡时间(秒)分离时间 (秒)挥发时间 (秒)振荡幅度振荡强度一组温度 ()二组温度 ()三组温度 ()四组温度 ()11磁珠转移1503强000022DNA结合120004强000032DNA结合480204中000043清洗1240505强000054清洗2180505强000065清洗312053005强000076DNA洗脱3602002中6060606083弃磁珠10005强00005 核酸转移程序运行完毕，取下96孔板，将洗脱液转移至干净的EP管或者PCR板中，提取过程完毕，此时可弃去96孔板。5（1702修订版）* 本产品仅供科研使用，请勿用于临床诊断及其他用途。版权声明： 英芮诚生化科技（上海）有限公司保留本使用指南所有权利。版本：V201702.221