微生物与免疫学试验 六 1 要求 讲解 肠道杆菌 霍乱弧菌 3种厌氧菌 示教片 肠道杆菌 霍乱弧菌 3种厌氧菌 示教平板 SS平板 肠道致病均和非致病均各一个 双糖铁培养基 大肠 痢疾 伤寒 变形 炭疽卷发样菌落 其它示教 小生化反应 大肠 痢疾 伤寒 变形 操作 肥达反应 注意标签贴试管上 不要贴到架子上 录像 肠道杆菌 2 操作 肥达反应 试管凝集反应 器材 试管6支 人 试管架1个 2人 吸管1支 人 标签1个 人 已知 伤寒H抗原 O抗原 4人 组 甲型副伤寒H抗原 乙型副伤寒H抗原 待检 病人血清 1 10稀释 3 倍比稀释法 1 2 3 4 5 6 生理盐水 0 5 0 5 0 5 0 5 0 5 0 5 血清 0 5 吹打 0 5 0 5 0 5 0 5 0 5 弃 菌液 0 5ml 管 从第6 1管加 振匀 水浴43度 2h 最终血清 1 40 1 80 1 160 1 320 1 640 对照 稀释度 凝集强弱 效价 吸管 桶 试管 锅 标签贴在试管上 4 结果判断 以出现 凝集的血清最高稀释倍数为该血 清抗体效价 O 达到1 80 H达到1 160 H甲 PA 或H乙 PB 达到1 80或以上有 诊断意义 结合当地流行病学史 病程和抗体消长的 意义进行判断 5 第6管 均匀混浊 少量凝集 细菌部分沉于管底 液体半澄清 凝集 呈颗粒状 大部分凝集 液体轻度混浊 凝集块较大 全部凝集 液体澄清 大片凝集块 6 OO HH 正常值正常值 感染可能性大感染可能性大 OO HH 低低 感染可能性小感染可能性小 OO 不高不高 HH 高高 预防接种或非特异预防接种或非特异 性回忆反应性回忆反应 OO 高高 HH 不高不高 感染早期或交叉反感染早期或交叉反 应应 类别类别 凝集效价凝集效价 意义意义 7 肠道杆菌的鉴定 8 大肠杆菌 伤寒杆菌 变形杆菌 痢疾杆菌 9 SS培养基 胆盐 枸橼酸盐 煌绿 乳糖 蛋白胨 中性红 抑制杂菌生长 被非致病菌分解产酸 被致病菌分解产碱 酸 红 碱 黄 10 Shigella Salmonella medium 菌落红色 乳糖发酵阳性 非致病菌 菌落无色 乳糖发酵阴性 致病菌 11 双糖铁培养基 下层 上层 葡萄糖 半固体 酚红 乳糖 硫酸亚铁 12 生化反应表 葡乳麦甘蔗H2S尿素靛 大肠 痢疾 伤寒 变形 13 霍乱弧菌 14 炭疽杆菌 致病菌中最大的G 粗 大杆菌 两端平切 排列 呈竹节状 有荚膜 芽 胞在有氧条件下形成 呈椭圆形 位于菌体中 央 15 培养 30 35 在普通琼脂培养基上形成灰白色粗糙型 菌落 边缘不整齐 在低倍镜下观察边缘呈卷发状 炭疽杆菌培养基 16 厌氧菌 17 1 破伤风 G 芽胞位于菌体顶端 大于菌体 使细菌呈鼓槌状 菌体细长 有周身鞭毛 18 厌氧血平板上的羽毛状菌落 19 庖肉培养基 成分 牛肉浸液 1000mL 蛋白胨 30g 酵母膏 5g 磷酸二氢钠 5g 葡萄糖 3g 可溶性淀粉 2g 碎肉渣适量 pH7 8 制法 1 称取新鲜除脂肪和筋膜的碎牛肉500g 加蒸馏水1000mL和1mol L氢氧化 钠溶液25mL 搅拌煮沸15min 充分冷却 除去表层脂肪 澄清 过滤 加水补 足至1000mL 加入除碎肉渣外的各种成分 校正pH 2 碎肉渣经水洗后晾至半干 分装15mm 150mm试管约2 3cm高 每管加 入还原铁粉0 1 0 2g或铁屑少许 将上述液体培养基分装至每管内超过肉渣表面 约1cm 上面覆盖溶化的凡士林或液体石蜡0 3 0 4cm 121 高压灭菌15min 20 庖肉培养基 破伤风梭菌培养基 破伤风痉挛 21 2 产气荚膜梭菌 两端几乎平切的G 粗大杆菌 芽胞位于 次极端 呈椭圆形 不大于菌体 在体内有明 显的荚膜 无鞭毛 22 生化反应 血琼脂平板上 双层溶血环 毒素 靶样溶血 血平板 双层溶血环 23 代谢活跃 高层琼脂断裂试验 庖肉培养基 分解肉渣中的糖类 产酸产气 肉渣淡红色 牛乳培养基 可出现 汹涌发酵 stormy fermentation 24 Nagler反应 卵黄琼脂平板 25 庖肉培养基牛乳培养基 汹涌发酵 26 3 肉毒梭菌 G 芽胞呈椭圆形 粗于菌体 位于次极 端 使细胞呈汤匙状或网球拍状 有鞭毛 无荚膜 肉毒梭菌 27