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1消瘿强肌汤治疗甲状腺功能亢进性肌病大鼠的形态学观察【摘要】 目的 建立甲状腺功能亢进性肌病(甲亢肌病)的动物模型,观察消瘿强肌汤治疗后大鼠骨骼肌细胞的形态学变化。方法 36 只健康雌性 Wistar 大鼠随机分为 4 组:甲亢肌病模型组 10 只,腹腔注射甲状腺激素钠盐每天 1 次,共 42 d;中药治疗组 10 只,腹腔注射甲状腺激素钠盐 42 d 后,灌服消瘿强肌汤 30 d;生理盐水对照组 10 只,腹腔注射甲状腺激素钠盐 42 d 后,灌服生理盐水30 d。另外 6 只每天腹腔注射生理盐水作为正常对照组。取胫骨前肌、腓肠肌、趾长伸肌标本制成石蜡切片,行苏木精 伊红染色及苏木精 偶氮焰红染色,观察各组骨骼肌细胞形态学变化。结果 苏木精 伊红染色显示,甲亢肌病模型组骨骼肌肌细胞肌膜下核明显增多,细胞间隙略宽,横纹模糊不清,有时可见肌纤维大小不等,肥大和萎缩的肌束交替排列或镶嵌状存在;而中药治疗组骨骼肌肌束排列较整齐,肌细胞核无明显增多。苏木精 偶氮焰红染色法观察显示,甲亢肌病模型组可见明显的肌束间结缔组织增多,染成绿色;中药治疗组结缔组织明显减少。结论 灌服消瘿强肌汤可明显恢复甲亢肌病大鼠骨骼肌的结构。 【关键词】 消瘿强肌汤 甲状腺激素类 肌纤维 组织学 大鼠 Wistar ABSTRACT ObjectiveTo establish an animal model of 2thyrotoxic myopathy, and to observe the morphological changes of its skeletal muscle cells after treatment with Xiaoyingqiangjitang (XYQJT,a traditional Chinese medicine).MethodsThirtysix Wistar rats were randomly divided into four groups: group received intraperitoneal injection of Lthyroxine for 42 days to establish a model of thyrotoxic myopathy; group was treated with XYQJT for 30 days after Lthyroxine intraperitoneal injection; group was given normal saline for 30 days after Lthyroxine intraperitoneal injection as control; group served as normal control group. The skeletal muscles from the legs were removed and made into paraffin sections and stained by hematoxylineosin (HE) and hematoxylin Azocarmine (HA). The morphology was observed made microscopically, and levels of serum T3 and T4 were also detected.ResultsAfter injection of Lthyroxine for 42 days, more nuclei under sarcolemma were observed; the spaces between the muscle fibers became slightly widen, the striations became blurred. After receiving XYQJT, all the abnormalities stated above disappeared. HA staining showed that the connective tissue between the muscle fibers in group was apparently abundant, while much less in group . ConclusionXYQJT can obviously recover the structure of 3skeletal muscles caused by thyrotoxic myopathy in rats. KEY WORDS Xiaoyingqiangjitang; thyroid hormones; muscle fibers; histology; rats, Wistar 甲状腺功能亢进(甲亢)累及肌肉而出现的病变称为甲亢肌病,可引起骨骼肌广泛的肌细胞病变,从而影响骨骼肌的功能。肌活检光电镜观察均可见明显的肌病理改变1, 2 。目前中药治疗甲亢常见35 ,但中药对甲亢肌病治疗作用的形态学研究少见报道。本实验在建立甲亢肌病动物模型的基础上观察了消瘿强肌汤对甲亢肌病骨骼肌的形态学影响。 1 材料和方法 1.1 动物与分组 健康雌性 Wistar 大鼠 36 只,体质量为(1805)g,由青岛市药物检疫所提供。常规饮水,自然光照,鼠颗粒饲料适应性饲养 1周后,随机分为 4 组:甲亢肌病模型组、中药治疗组、生理盐水对照组,每组 10 只;另外 6 只作为正常对照组。 1.2 实验方法 甲亢肌病模型制备:大鼠腹腔注射 250 mg/L 甲状腺激素钠盐(Sigma USA 公司),10 mL/kg 体 1 期闫凤霞,于向民,潘晓亮,等.消瘿强肌汤治疗甲状腺功能亢进性肌病大鼠的形态学观察 41 质量,每日 1 次,共注射 42 d。中药治疗组在注射甲状腺激素钠盐后,再给予消瘿强肌汤(由广州中医药大学提供)灌胃,每天42 mL,共 30 d。生理盐水对照组在注射甲状腺激素钠盐后,再给予生理盐水灌胃 30 d,剂量同中药治疗组。正常对照组每天腹腔注射生理盐水 1 次,剂量 10 mL/kg 体质量。 1.3 T3、T4 测定 取材前经心脏穿刺取血 2 mL,离心后留血清,采用免疫分析法测定 T3、T4 的浓度。 1.4 骨骼肌细胞形态学观察 各组动物经 25 g/L 戊巴比妥钠(10 mL/kg)麻醉,40 g/L 多聚甲醛灌注固定,取下胫骨前肌、腓肠肌、趾长伸肌置于 40 g/L 多聚甲醛溶液中,4 下固定 6 h,用 0.01 moL/L 磷酸缓冲液(PBS)冲洗 24 h。常规梯度乙醇脱水,二甲苯透明,石蜡包埋,连续切片,厚 7 m,行苏木精 伊红染色,光镜观察。 1.5 骨骼肌细胞间结缔组织的观察 将上述石蜡包埋标本切片后,常规脱蜡至水,采用苏木精 偶氮焰红法染色,光镜观察。 2 结 果 2.1 各组动物体质量及活动情况观察 正常对照组体质量明显增加,平均每周增加 12 g,到第 6 周末,体质量大约增加 30%,活动自如;甲亢肌病模型组体质量逐渐下降,平均每周下降约 6 g,到第 6 周约下降 8%。动物活动早期增多、激惹,以后活动逐渐减少,肌力下降,首先为前肢,继而后肢,到注射甲状腺激素 42 d 后,动物活动明显减少,爬行缓慢。中药治疗组5体质量逐渐恢复,平均每周增加 5 g,动物活动逐渐增多,肌力逐渐恢复。生理盐水对照组体质量变化与甲亢肌病组基本相同。 2.2 各组大鼠血清 T3、T4 水平比较 与正常对照组比较,甲亢肌病组 T3、T4 浓度升高,差异有显著性。与甲亢肌病组和生理盐水对照组比较,中药治疗组 T3、T4 浓度降低,差异均有显著性;而中药治疗组与正常对照组之间 T3、T4浓度差异无显著性。见表 1。 2.3 苏木精 伊红染色结果 正常对照组纵切面骨骼肌肌细胞呈长柱状,多个细胞核呈扁椭圆形,位于肌膜下方,分布均匀,胞浆嗜酸性,可见清晰的横纹;横切面细胞排列整齐紧密,呈圆形或椭圆形,可见核位于肌膜下方,胞浆丰富,肌原纤维的断面呈细点状;肌束之间有少量结缔表 1 各组大鼠血清 T3、T4 水平比较与正常对照组比较,F=175.79、91.86,*q=10.53、21.52 ,P0.01;与甲亢肌病组及生理盐水对照组比较,#q=0.5420.83,P0.01 组织和毛细血管。甲亢肌病模型组肌束间结缔组织增多,肌膜下核明显增多,细胞间隙略宽,横纹模糊不清,有时可见肌纤维大小不等,肥大和萎缩的肌束交替排列或镶嵌状存在,未见坏死区域。中药治疗组肌纤维与正常对照组无明显差别;但生理盐水对照组仍可见肌膜核增多,肌束间结缔组织增生。 2.4 苏木精 偶氮焰红染色结果 正常对照组骨骼肌纤维胞浆丰富染成红色,可见核染成紫蓝色,6位于肌膜下方,细点状结构为肌原纤维的断面;肌束之间有少量结缔组织染为绿色。甲亢肌病模型组骨骼肌细胞可见肌膜下核增多,随着给药时间的延长,肌束间结缔组织明显增多,肌膜下核增多更加明显。中药治疗组肌纤维同正常对照组无明显差别。但生理盐水对照组仍可见肌膜核增多,肌束间结缔组织增生。 3 讨 论 甲亢累及肌肉而出现的病变称为甲亢肌病,甲亢肌病可分为多种类型,其中慢性甲亢肌病(CTM)是甲亢肌病中最常见的一种 68 。本文实验结果显示,大鼠注射甲状腺激素钠盐后 T3 和 T4 水平明显升高,而且大鼠肌力下降,运动受限,说明出现甲亢肌病,甲亢动物模型制备成功。甲亢时高浓度的甲状腺激素作用于肌肉,使线粒体氧化过程加速,引起肌肉收缩和维持肌张力所必需的高能磷酸键供应不足, 或肌酸进行磷酸化的功能减弱, 以致引起骨骼肌的病理学改变9 。 正常骨骼肌细胞呈细长圆柱体,哺乳动物的骨骼肌纤维为多核,核位于周围肌膜下。肌纤维的横断面通常为多边形,紧密并列,周围有结缔组织包绕10 。目前有关甲亢肌病形态学的研究资料大多是在对甲亢肌病病人的活检中得到,结果显示,高甲状腺激素可引起骨骼肌明显的形态学改变11 。本研究中注射甲状腺激素钠盐 42 d 后大鼠骨骼肌肌束间结缔组织增多,肌细胞核增多更加明显,细胞间隙略宽,横纹模糊不清,这与前人的工作完全吻合。 目前部分研究通过口服甲状腺素片,或通过腹腔注射一定剂量甲7状腺素钠盐的方法,建立甲亢肌病的动物模型,并观察了高甲状腺激素状态时骨骼肌肌电图的变化和骨骼肌的病理学改变。国外有的研究观察了高甲状腺激素对骨骼肌肌球蛋白的影响1217 。对于甲亢肌病的临床治疗尚无规范程序,主要以改善甲亢症状为主。有研究表明,中药消瘿颗粒剂和消瘿片等可明显改善甲亢症状35 。本文在建立甲亢肌病的动物模型基础上灌服消瘿强肌汤观察其对甲亢肌病的治疗作用。结果表明,中药治疗组注射甲状腺激素 42 d 后灌服消瘿强肌汤 30 d,横纹肌肌纤维本身完全恢复正常,同正常对照组无明显差别,灌服生理盐水组仍可见肌膜下细胞核增多,肌束间结缔组织增生,说明消瘿强肌汤对甲亢肌病引起的骨骼肌形态学改变有明显的改善作用。 【参考文献】 1霍晓丽, 王立 . 慢性甲状腺功能亢进性肌病:附 4 例报告J. 临床神经病学杂志, 1999,12(1):228230. 2黄蕙芬. 慢性甲状腺功能亢进性肌病:附 19 例临床、肌电图与病理观察J. 临床神经病学杂志, 1992,5(2):8083. 3贾锡莲,李沛霖. 消瘿颗粒剂对甲状腺功能亢进症模型大鼠心率、肛温及血清 T3、T4 的影响J. 河北中医, 2002,24 ( 8):632635. 84尹义辉,孙丰雷. 消瘿片治疗甲状腺功能亢进症的临床研究J. 中药新药与临床药理, 1999,10(5):264267. 5刘静,殷健. 芪海消瘿汤治疗甲状腺功能亢进症
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