2.2 实验原料的来源 迎春花于2014年3月12日采自安阳工学院德馨园内。2.3 天然活性成分的精制 2.3.1 迎春花的预处理常温下，先将迎春花花上的绿帽摘掉，晾干或45烘干，粉碎。2.3.2 迎春花的提取向烧杯中加入60%乙醇溶液600mL浸泡，并用塑料袋罩住烧杯口，放置24小时；取出滤液再用离心机2000离心20分钟，滤去沉淀即可得到精制无杂质的迎春花花提取液。方法：以抑菌效果为指标,在单因素试验的基础上,确定提取溶剂的体积分数、提取温度和提取时间进行4因素3水平正交试验2.4 洗手液的配制将原料按照配方顺序溶解，搅拌，静置36小时。装瓶。1洗手液的配置（1）预配置用电子天平称取0.36g柠檬酸和2.38g柠檬酸钠于50mL的烧杯中，加蒸馏水搅拌溶解，用玻璃棒转移到100mL容量瓶中定容至刻度，为6；同样取0.79g柠檬酸和1.74g柠檬酸钠溶解定容于100mL容量瓶中，为5。作为调节剂。（a）取50g蒸馏水于100mL烧杯中，加羧甲基纤维素调节其粘度，称得纤维素为30g，测定溶液的为13，呈强碱性。（b）取100mL蒸馏水于200mL烧杯中，加琼胶1.0g在50、500r下搅拌30分钟溶解，测定溶液的为56，呈微酸性。（c）在上述（b）中添加羧甲基纤维素，并一边搅拌溶解，一边测定其，直到为中性，此时加入的羧甲基纤维素为6.0g。根据国家标准要求，并参考其他配方，综合改进，拟定的洗手液配方如下：表3.1 洗手液配方Tab3.1 Hand washing liquid formula组分w/%十二烷基硫酸钠（SDS）6.6乙氧基化烷基硫酸钠（AES）3.4柠檬酸0.4柠檬酸钠2.4甘油（丙三醇）2.0迎春花提取液10.0羧甲基纤维素6.0琼胶1.0水70.2（2）配置根据上述配方配置洗手液：（a）取上述配好的=6的缓冲溶液50mL于200mL的烧杯中，先将羧甲基纤维素和琼胶加入烧杯中，在50恒温磁力搅拌器上加热30分钟，并用500的转速搅拌使其溶解，并调节其粘度；（b）测定上述溶液的，并用柠檬酸和柠檬酸钠调节其为67；（c）将上述配方中的其他原料依次加入烧杯中，并稀释溶液至100mL，调节1000，搅拌2小时，使其充分混合均匀；（d）超声30分钟，静置陈化一天，使体系自均衡。3.2 总活性物含量根据配方中所添加SDS和AES的含量可以得到该洗手液的总活性含量为10.0%。2.5.4 抑菌性能的测定将配置好的培养基分装在培养皿和平底培养瓶中，并封口包扎，贴上标签编号，在121的高压灭菌器中灭菌25min，灭菌后将试管摆成斜面使其凝固，在无菌的通风厨中，靠近火焰用接种针在试管斜面处接种大肠杆菌，接种曲线为波浪线型，在37的培养箱中培养24h。将培养有大肠杆菌的试管中倒入无菌水，待大肠杆菌溶解在水中后将其倒入另一无菌的试管中，按10倍的系列梯度稀释即10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6，再将培养皿依次编号为10-4、10-5、10-6各三套，一套标记为空白组（对照），另两套分别标记某品牌洗手液（A）和本文洗手液（B）为实验对照组，其中标记为某品牌洗手液（A）和本文洗手液（B）的培养皿中各加入一滴相应的洗手液，给这些编号了的培养皿依次接种，并用倒平板将其菌液均匀的分布在装有培养基的培养皿表面，在37的培养箱中培养48h后进行计数。计数时，选择一组比较好的菌落，用平板菌落计数法进行菌落计数，并记录数据。3.6 抑菌性能选择稀释倍数为10-5的菌落计数：左手拿培养皿，右手拿记号笔在培养皿上划分区域并记上标号，空白组（对）、某品牌洗手液（A）本文洗手液（B），如下图所示：根据上表可以看出，空白的培养基中的菌落数要比某品牌洗手液A和本文洗手液B多一倍，很明显，我们配置的洗手液比对照的活菌数少，说明我们的洗手液具有较好的抑菌效果。2.5.3 的测定用玻璃棒蘸取洗手液后，涂抹在pH试纸上，30后和比色卡对照，并记录其范围 。2.5 产品性状性能检测 对已配置的洗手液进行泡沫高度、pH、粘度、重金属含量、微生物指标等性能的检测。2.5.1 泡沫高度的测定（1）用500ml容量瓶配制1/1000的洗手液溶液,取其溶液80ml，加入20ml的自来水；（2）在100ml量筒中加入上述溶液50ml，塞住量筒口上下摇动三次，记下泡沫高度；（3）重复上述步骤，测量3次，记录数据。2.5.2 粘度的测定（1）清理粘度计，调节两个水平调节脚，直至粘度计顶部的水泡在中央位置；（2）将转子保护框架装在粘度计上（向右旋入装上，向左旋出卸下）；（3）将选用的转子旋入连接螺杆（向左旋入装上，向右旋出卸下）；（4）插入电源，打开粘度计后面开关按钮；（5）输入选用的转子号3号；（6）选择转速60 ；（7）旋动升降架旋钮，使粘度计缓慢的下降，转子逐渐浸入被测液体当中，直至转子上的标记与液面相平为止，调整粘度计位置至水平；（8）开始测量，当每次产量的百分比在20%90%之间时，读数并记录；（9）重复（5）至（8）的步骤再测量2次，读数并记录。2.5.5 洗手液中重金属（）含量的测定3.3 起泡力表3.2 泡沫高度测定Tab 3.2 Foam height determination序号泡沫高度/mm平均高度/mm152025015223546根据国家质量标准中理化性能指标可以看出，洗手液泡沫高度100mm为正常，并且我们制备的洗手液泡沫平均高度为520mm，是符合洗手液理化性能指标的。3.4 粘度用3号转子，转速60测定表3.3 粘度的测定Tab 3.3 Determination of viscosity次数百分比/%粘度( )平均粘度()160.51210260.811961223360.21264根据国家指标要求，工业上的洗手液总活性物含量10%，而我们所配置的洗手液中含量为6%，由于我们实验室配置的没有工业上的那么严格，也没有工业上生产的量大，所以这个含量还是基本符合洗手液的总活性物含量要求的。3.5 pH值测得洗手液的值范围为67，而人的皮肤的范围为57，所以该洗手液基本符合国家洗手液标准。 图3.1 稀释倍数为10-5菌落培养皿区域划分Fig 3.1 Dilution multiple of 10-5 colony culturing dish region用平板菌落计数法进行菌落计数，为方便，拿水笔点点计数，如下图：图3.2 点点菌落计数Fig 3.2 Little colony count将上图中划定的区域计数如下表，点数皿中每毫升菌液活菌数N同一稀释度菌落数稀释倍数（105）5 表3.4 培养皿中菌落总数Tab 3.4 The total number of colonies in culture dish编号菌落数n菌落总数N（8n）每毫升菌液活菌数空白39631681.58109A1541232 6.16108B20516408.20108