过敏原血清学检测 目录 一 过敏原概述二 过敏原常见方法学比较三 欧蒙过敏原产品特性及印迹法的特点四 过敏原体外检测常见问题及解答 一 过敏原概述 1906年vonPiguet提出了allergy一词 其概念为 机体对抗原刺激产生的一种 改变了反应性 的状态 这种状态可能是保护性的 即产生了免疫力 也可能是破坏性的 即产生了超敏反应 超敏反应是机体对某抗原初次应答后 再次接受相同抗原刺激时 发生的一种以机体生理功能紊乱或组织细胞损伤为主的特异性免疫应答 过敏原 吸入过敏原食物过敏原接触过敏原输注过敏原 空气中的吸入过敏原 例如 植物花粉 动物毛发 室内灰尘或虫螨等 过敏原 通过胃肠道吸收 例如 鱼 肉 蛋 坚果和蔬菜等 吸入过敏原食物过敏原接触过敏原输注过敏原 过敏原 皮肤接触 例如 金属饰品 化妆品和生活日用品等 吸入过敏原食物过敏原接触过敏原输注过敏原 过敏原 直接输入体内 例如 昆虫或动物的毒液 注射类药品等 吸入过敏原食物过敏原接触过敏原输注过敏原 过敏的损害 过敏是以损害粘膜为主要表现的过敏性结膜炎 眼粘膜 过敏性鼻炎 鼻粘膜 过敏性哮喘 气管粘膜 过敏性紫癜 皮肤粘膜 过敏性肠绞痛 肠粘膜 过敏性紫癜肾炎 肾内粘膜 心脏有粘膜组织 心脏是肯定会受到损 心肌酶升高 特别是特异性的CK MB 肌酸激酶同工酶 CK MB分布在心肌和结缔组织 心电图表现主要是心肌膜的损害 表现为传导阻滞 1 皮肤科 30 急慢性荨麻疹 异位性皮炎等 2 耳鼻咽喉科 30 以过敏性鼻炎为主 3 内科 25 以哮喘 过敏性肺泡炎为主 4 小儿科 15 儿童变态反应病的诊治 5 变态反应专科 1 仅在少数大型3甲医院设置了变态反应科室 从事变态反应病的研究 并承担某些罕见病 疑难病的临床诊治 应用科室 过敏原II 相关过敏原 5 无关成分 95 过敏原II 过敏原的命名 对于纯化过敏原 拉丁文缩写 序号例如 桦木花粉 betulaverrucosa Betv1 Betv2 蛋白或糖蛋白小分子量物质 15 20kDa 过敏原 过敏原II 过敏原提取物为包含与过敏反应无关的其它成分的混合物纯化天然相关过敏原通常不太可能实现目前尚无有关过敏原的国际标准 Mark12 15 l 5 l 1 l 6 14 22 31 36 55 66 97 116 kDa HPLC SDS PAGE WB 提取过程缓冲液系统温度纯化储存 过敏原II影响因素 过敏原II影响因素 原材料 例如 桦树花粉 除了植物品种个体特征外 树龄 生长环境和过敏原采集时间和方法等多种因素均会影响到过敏原的质量 过敏原应用过敏原提取物进行诊断 所有的试剂生产商通常都检测特异性IgE在检测方法上存在差异结果通常不能避免非特异性反应 来源 由欧蒙生化和分子生物学生产部负责生产从著名的过敏原生产厂商购买商品化的产品质量控制 通过电泳分离的方法检测过敏原成分通过免疫印迹的方法检测其过敏原反应性在膜条上完成功能测试 过敏原生产和质量控制 免疫反应 4种过敏反应类型 超敏反应 byCoombsundGell 1963 TypeITypeIITypeIIITypeIV 早期反应IgE 介导肥大细胞脱核Platzhalter数分钟内花粉热 细胞毒反应IgG IgM介导血细胞的破坏数小时到一天药物过敏 免疫复合物形成持续产生IgG IgM免疫复合物Platzhalter数小时到一天farmerslungs 细胞免疫反应T 细胞介导反应12小时到数周接触过敏反应 Ni 型变态反应 I型过敏反应 Betv1Betv2 确认对桦树花粉过敏的患者 个体分别与不同的桦树花粉过敏原反应 如 Betv1 Betv8 Betv3 Betv7 Betv1Betv4 Betv2Betv6Betv8 过敏原诊断与治疗 诊断方面即往病史皮试实验室检测激发实验治疗方面特异性免疫治疗成功率低于100 过敏原血清学检测 检测IgE 步骤1 总IgEELISA 步骤2 特异性IgEEUROLINE 总IgEELISA 标准品500IU ml100IU ml10IU ml0IU mlWHO75 502 4点定标 总IgEELISA 参考范围 参考范围 可能存在过敏反应 参考范围 一般无过敏反应 年龄 最高参考上限 新生儿 1 2IU ml 1 6月 7 2IU ml 7 12月 12 7IU ml 1 5岁 60IU ml 6 9岁 155IU ml 10 15岁 199IU ml 16岁 100IU ml 总IgEELISA 结果解释 总IgE超出参考范围大多数是由于过敏反应导致例外 寄生虫病 免疫抑制 HIV 重度烧伤临床相关特异性IgE结果与总IgE相关的特异性IgE浓度越高 患者临床过敏反应的可能性就越大 总IgEELISA 结果解释举例 特异性IgE总IgE 特异性IgE5IU ml kU l 总IgE200IU ml 患者1 特异性IgE5IU ml kU l 总IgE25IU ml 患者2 总IgEELISA 总结 简单和快捷的实验操作低检出限 1IU ml 高重复性 批内实验 5 通过4份标准品计算定量结果标准品采用WHO标准通过ELISA工作站实现自动分析 特异性IgE EUROLINEALLERCOATTM6 DP3713E 吸入性及食物性过敏原 特异性IgEEUROLINE 简便和快捷的实验操作仅需少量样本 过夜温育 结果基于广泛应用的EAST分级系统与PharmaciaCAP具有良好的相关性自动温育通过EUROLineScan程序实现结果的自动判读 特异性IgE分级标准及临床意义 特异性IgEEUROLINE血清温育 颜色反应 色原 底物 膜条 抗原提取物 温育 60min二抗反应 10min底物温育 AP标记二抗 清洗3x5min 清洗3x5min 自动化判读或肉眼观察 60min未稀释 过夜1 11稀释 EUROLINE检测系统 结果判读 EUROLineScan 特异性IgE欧蒙印迹法自动化 欧蒙印迹法过敏原谱 中欧吸入儿童吸入食物特应性交叉反应儿童昆虫毒液 亚洲中国吸入中国食物中国特应性韩国吸入1 2韩国食物1 2东南亚吸入东南亚食物 地中海中东地中海吸入中东吸入中东食物Inhal ScreenAEFoodScreenAE海湾吸入海湾食物 特异性IgE欧蒙印迹法各种组合 为不同过敏原组合提供可能 在一条膜条上包被36种以上过敏原大约170种以上过敏原满足新过敏原组合的需要 市场信息反馈目标过敏原的定位和其它参数确认提供特殊过敏原的原材料提供阳性血清 二 过敏原常见方法学比较 既往病史皮试 刺试 抓试 皮外试 皮内试实验室检查 IgE检测CAST 细胞抗原刺激实验 激发试验 金标准 鼻腔激发试验 双盲稳定剂控制的食物刺激试验 DBPCFC 二 过敏原常见方法学比较 二 过敏原常见方法学比较 体外诊断的优势 对患者来说不存在风险尤其适合5岁以下儿童 可避免强烈的皮肤反应与其它皮肤病区别不需附加其它药物适合无法进行皮试的食物过敏原的检查 二 欧蒙过敏原产品特性及印迹法特点 同类产品中单一膜条内过敏原数量最多不添加任何增效剂针对中国人设计的过敏原对患者来说不存在风险不需停止服用抗组胺药物独家包被有CCD指示带 解释交叉反应的假阳性结果所有厂家中样本使用体积最小 100ul 快速测试过敏原 整个实验完成仅需要2 5 3小时 欧蒙过敏原体外诊断的优势 同类产品中单一膜条内过敏原数量最多 可一次检测20大项 30小项过敏原 不添加任何增效剂 现在有些产品为了增大反应强度 在产品中添加增效剂 加大了反应强度 导致了判定结果与临床有不符现象 欧蒙产品不添加任何增效剂 本着科学 实事求是的精神真实 准确的判定实验结果 针对中国人设计的过敏原 过敏原采集于中国 提高特异性检出率DP3713 1601E 中国组合 针对中国人设计的组合 对患者来说不存在风险 无痛检测 通过血清中IgE抗体与过敏原结合 测试过敏反应避免了人体与过敏原直接反应导致的风险 用点刺针穿过液滴 轻轻刺入皮内 将可疑致敏物质敷贴于患者皮肤上 斑贴试验 点刺试验 不需停止服用抗组胺药物 以往过敏原检测需要患者体检停止服用抗组胺药物 以便提高试验的准确性 欧蒙过敏原检测试剂无需患者停止服用抗组胺药物 常用的有苯海拉明 异丙臻 扑尔敏 赛庚啶 息斯敏 特非拉丁等 独家包被有CCD指示带 独家包被有CCD指示带 解释交叉反应的假阳性结果CCD是 交叉反应性碳水化合物决定因子 CCD存在于多种植物性或动物源性的过敏原中 由于结果相似性导致一些独特的交叉反应出现CCD的检测对于患者提示 虽然对于某些过敏原没有临床症状 但是在过敏进程中对有些具有交叉反应的过敏原可能会有改变 所以对于患者又针对性的预防交叉过敏反应 有着重要的临床指导意义 欧蒙印迹法的特点 一次可以检测多项过敏原 8 20项 常见食物及吸入组合 如葎草 艾蒿 豚草 常见树花粉 霉菌 尘螨 猫毛 狗毛 蟑螂 鸡蛋 牛奶 鱼 虾 蟹 花生 大豆等 适合体检筛查 采血量少 100 1000微升血清可以检测多项 特别适合儿童患者 性价比高 一次可得到多种过敏原信息谱 适合各类人群 一定范围内脂血 溶血 黄疸血清或血浆样本对检测结果无影响 有配套仪器软件可以省时省力 全自动操作 判读软件 2 5h出结果 无需暗室孵育 半定量可以直接获得结果 可以直接用肉眼判读 也可以用欧蒙配套软件判读 EAST分级并有数字及单位结果 易于保存原始数据 结果样式可灵活设计 结果可转为excel表 方便科研 欧蒙印迹法的特点 四 过敏原体外检测常见问题及解答 Q1 为何患者sIgE结果阳性与临床表现不符 过敏原 特异性IgEEUROLINE产品调整 提供CCD检测指标 何谓CCDs CCD是 CrossreactiveCarbohydrateDeterminants 交叉反应性碳水化合物决定子 的英文缩写 该结构为结合于糖蛋白N末端的多聚糖 依据糖基化作用的不同而产生不同的结构 举例 MMXF Man 1 6 Man 1 3 Xyl 1 2 Man 1 4GlcNAc 1 4 Fuc 1 3 GlcNAc CCDs在自然界中的存在 CCDs存在于多种植物性或动物源性的过敏原中 由于结构的相似性导致一些独特的交叉反应出现 典型含CCD结构的过敏原 植物花粉植物性食物植物乳胶昆虫毒液 抗CCDIgE结果的临床价值 大部分糖蛋白仅含有一个IgE结合的多聚糖 因此无法促进结合有IgE抗体的肥大细胞表面受体形成二聚体化 进而无法活化肥大细胞发生脱核及释放组胺的作用 因此对于仅为抗CCDIgE抗体阳性的患者而言往往无临床症状的表现 在何种情况下应排除抗CCDIgE的干扰 当体外实验结果与临床症状或皮试结果不符的情况下 当某一患者出现多个特异性IgE结果阳性时举例 花生 特异性IgE阳性但并不表现出临床症状出现多个食物相关的阳性结果但缺乏临床症状表现 植物乳胶 针对花粉敏感的患者抗植物乳胶阳性 但无相关接触史 昆虫毒液 针对蜜蜂和马蜂特异性IgE阳性的患者可能存在交叉反应 Q2 如何解释总IgE结果与sIgE结果不符 解释1 总IgE浓度与sIgE水平并不存在必然相关性 约20 30 超敏疾病患者特异性IgE可能较高 但总IgE可维持正常 甚至低于几何均值 如患者仅对牛奶高度过敏 其特异性IgE为18kU L 对于特异性IgE而言 该结果已属于严重过敏 IV级 的范畴 从理论上讲 该患者的总IgE也应该为18kU L 而对于总IgE来说 这个结果是很低的 总IgE升高并不一定是超敏反应 而过敏患者总IgE也不总是一定升高 这一要点在评价总IgE检测结果时非常重要 结果解释1 不同批号产品所使用过敏原提取物的成分可能不同 2 针对过敏原检测阳性结果若临床存在明显过敏症状 则应明确判断阳性 Q3 针对同一过敏原检测 为何出现吸入和食物组合结果差异 Q4 未温育膜条为何出现浅色条带 血清温育前 血清温育前 在膜条特定过敏原区域出现浅色条带 血