基因工程的基本操作程序（第一课时）【学习目标】1说出基因工程基本操作程序。2掌握获取目的基因的方法。3基因组文库与cDNA文库的区别。4PCR技术。【重点难点】重点: 1.掌握获取目的基因的方法。 2.基因组文库与cDNA文库的区别。3PCR技术。难点：1. 掌握获取目的基因的方法。 2. PCR技术。【自主学习】一、基因工程的基本操作程序写出左图各字母所代表的内容A: B: C: D: E: F: G: H: 二、目的基因的获取： （1）目的基因主要是 ，也可以是一些具有 。 (2)目的基因的来源 。（3）获取目的基因的方法： （一）从基因文库中获取目的基因（1）构建基因文库时需要对DNA分子进行切割和连接所使用的酶分别是 和 。（2）基因组文库包含了一种生物的 ；是通过 酶获得的；cDNA文库包含了一种生物的的 ，是通过 获得的。（二）利用PCR技术扩增目的基因PCR扩增目的基因的原理是 ，前提条件是 ，PCR所使用的酶是 ，该酶具有什么特点？ 。过程：第一步：加热至9095 ；第二步：冷却到5560， ；第三步：加热至7075， 从引物起始互补链的合成。（三）人工合成目的基因当基因比较小， 又已知，可以通过DNA合成仪用 人工合成。【问题生成】【师生互动，问题探讨】1.PCR技术与DNA复制有什么区别？项目DNA复制PCR技术不同点场所解旋酶引物合成子链温度特点循环次数产物相同点2.构建基因文库时用到哪些工具？3.如何利用mRNA构建生物的cDNA？【课后小结与反思】基因文库的构建过程【自我检测】1 正确表示基因工程顺序操作的四个步骤的是 ( )A获取目的基因将目的基因导入受体细胞基因表达载体的构建目的基因的检测与鉴定B目的基因的检测与鉴定获取目的基因基因表达载体的构建将目的基因导入受体细胞C获取目的基因基因表达载体的构建将目的基因导入受体细胞目的基因的检测与鉴定D基因表达载体的构建获取目的基因将目的基因导入受体细胞目的基因的检测与鉴定2. 下列获取目的基因的方法中需要模板链的是( ) 从基因文库中获取目的基因 利用PCR技术扩增目的基因 反转录法 通过DNA合成仪利用化学方法人工合成A B C D3. PCR技术扩增DNA，需要的条件是（）目的基因ATP四种脱氧核苷酸DNA聚合酶等mRNA核糖体A B C D4. 已知某种限制性内切酶在一线性DNA分子上有3个酶切位点，如图中箭头所指。如果该线性DNA分子上有3个酶切位点都被该酶切断，则会产生四个不同长度的DNA片段。现有多个上述线性DNA分子，若在每个DNA分子上至少有1个酶切位点被该酶切断，则从理论上讲，经该酶切割后，这些线性DNA分子最多能产生长度不同的DNA片段种类数是 A3 B4 C9 D125.有关基因工程的叙述中，错误的是 （ ）ADNA连接酶将黏性未端的碱基对连接起来B限制性内切酶用于目的基因的获得C目的基因须由载体导入受体细胞 D人工合成目的基因不用限制性内切酶6. 右图为用于基因工程的一个质粒示意图。用EcoRI限制酶切割目的基因和该质粒，再用DNA连接酶连接形成重组质粒，然后导入大肠杆菌，最后将大肠杆菌放在四种培养基中培养：a无抗生素的培养基，b含四环素的培养基，c含氨苄青霉素的培养基，d含四环素和氨苄青霉素的培养基。含重组质粒的大肠杆菌能生长的是 （ ）Aa Ba和c Ca和b Db和c7. 下列不属于获取目的基因的方法的是( )A利用DNA连接酶复制目的基因 B利用DNA聚合酶复制目的基因C从基因文库中获取目的基因 D利用PCR技术扩增目的基因8. 切取牛的生长激素和人的生长激素基因，用显微注射技术将它们分别注入小鼠的受精卵中，从而获得了“超级鼠”，此项技术遵循的原理是A基因突变：DNARNA蛋白质B基因工程：RNARNA蛋白质C细胞工程：DNARNA蛋白质D基因工程：DNARNA蛋白质9.（2014.广东卷）利用基因工程技术生产羧酸酯酶（CarE）制剂的流程如图14所示，下列叙述正确的是（ ） A、过程需使用逆转录酶B、过程需使用解旋酶和PCR获取目的基因C、过程使用的感受态细胞可用NaCl溶液制备D、过程可利用DNA分子杂交鉴定目的基因是否已导入受体细胞10. 基因工程中目的基因的分离是操作的关键。下面甲、乙图表示从真核生物细胞中获取目的基因的两种方法，请回答下列问题：在甲图中，a过程是在酶的作用下完成的。如果用该类酶中的一种，不一定能获取目的基因，其原因是。在乙图中，c过程在遗传学上称为，d过程除需以mRNA为模板，脱氧核苷酸为原料，还需要的条件是ATP、DNA聚合酶等。 课题：基因工程的基本操作程序（第二课时）主备人： 审核人： 授课人： 使用时间： 年 月 日【学习目标】1基因表达载体的构建2将目的基因导入受体细胞的方法 【重点难点】重点：1基因表达载体的构建2将目的基因导入受体细胞的方法难点：将目的基因导入受体细胞的方法【自主学习】一、基因表达载体的构建（1）基因工程的核心 （2）构建表达载体的目的:使目的基因在受体细胞中 ，并且可以遗传给 。（3）表达载体必须有 、 、 、 、 。（4）启动子位于基因的 ，它是 识别和结合的部位，驱动基因转录得到 。终止子位于基因的 ，也是一段有特殊结构的 。启动子与终止子的结构单位是 （5）标记基因的作用是 。 （6）构建过程的示意图：（7）由于受体细胞不同，将基因导入受体细胞的方法也不同，所以基因表达载体的构建不是千篇一律的。二、将目的基因导入受体细胞阅读课本1213页， （一）转化：目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内 的过程。（二）将目的基因导入植物细胞（1）受体细胞： (2)农杆菌转化法（采用最多的方法）农杆菌特点：易感染 植物和裸子植物，对_ _ 植物没有感染力；Ti质粒的 可转移至受体细胞，并整合到受体细胞的 上。转化过程：构建的表达载体转入 导入植物细胞 目的基因的遗传特性得以稳定维持和表达。(3)基因枪法基因枪法：是单子叶植物中常用的一种基因转化方法，但是成本较高。(4)花粉管通道法 我国独创的一种方法（三）将目的基因导入动物细胞（1）方法： （2）受体细胞： (3)操作程序：目的基因表达载体 取卵(受精卵) 显微注射注射了目的基因的受精卵移植到 性动物的 内发育新性状动物。（四）将目的基因导入微生物细胞（1）原核生物特点： 、多为 、 相对较少等。(2)大肠杆菌最常用的转化方法是： 处理细胞，成为 细胞表达载体与感受态细胞混合 细胞吸收DNA分子。【问题生成】【师生互动，问题探讨】1.启动子与起始密码子有何区别？2.终止子与终止密码子有何区别？3.基因表达载体的构建需要哪些工具酶，如何将目的基因与运载体连接起来形成重组DNA分子（以质粒为运载体）？4.培育转基因动物时，受体细胞能否采用动物体细胞，为什么采用受精卵？5将目的基因与载体混合并用DNA连接酶处理后，会出现几种结果，怎样从中筛选处所需要重组质粒？【课后小结与反思】【自我检测】1.下列关于基因表达载体构建的相关叙述，不正确的是()A需要限制酶和DNA连接酶B必须在细胞内进行C抗生素抗性基因可作为标记基因D启动子位于基因的首端2. 基因工程中科学家常采用细菌、酵母菌等微生物作为受体细胞，原因是( )A结构简单，操作方便 B繁殖速度快C遗传物质含量少、简单 D性状稳定,变异少3. 正确的操作顺序是 ( )使目的基因与运载体相结合将目的基因导入受体细胞目的基因的获取检测目的基因的表达是否符合特定性状要求；提取目的基因。A B C D4. 科学家将人的生长素基因与大肠杆菌的DNA分子进行重组，并成功地在大肠杆菌中得以表达。过程如图，据图回答：(1)人的基因之所以能与大肠杆菌的DNA分子进行重组，原因是