免疫组化结果判断及常见问题分析 武汉大学病理学教研室杨飞 肝脏 CK8理想着色 胆管上皮细胞强阳性 肝细胞呈不同层次阳性 panCK AE1 AE3 在肝脏理想的染色 采用了热修复 肝细胞膜 胆管强而清晰的着色 背景干净 一 特异性染色的判断 1 特定的定位细胞阳性 根据靶抗原不同而呈现胞膜型 胞浆型或胞核型间质阳性 表现为细胞外着色 局限性或弥散性2 染色的不均一性阳性细胞的染色分布不均 片状或点状散在分布染色强弱不等 颜色深浅反映抗原量的多少3 排除人为造成的非特异性染色切片的折叠 刀痕 色素沉着 组织细胞坏死 4 颗粒性显色DAB显色在高倍镜下呈颗粒状而非均匀着色 免疫组化标准化照片 合格的免疫组化染色切片是正确判断染色结果的基础和前提不合格的免疫组化染色切片容易导致误判 C erbB 2 优 良 中 差 4 3 2 1 ER 子宫内膜PR染色 修复不足子宫内膜PR染色 修复良好 PR 二 染色结果的判断 PCNA S P 400 S P 400 1 dayCM 4 dayCM 阳性强度20 10视野下 随机选取5个视野 测100个阳性细胞的平均光密度即为此片的阳性强度 三 结果分析 P53 阳性细胞百分比计数100个瘤细胞 其中阳性细胞的比例 5 5 30 30 50 50 PCNA Barnes法A 瘤细胞显色有无及深浅0 不着色 1 浅黄色 2 棕黄色 3 棕褐色 B 显色细胞的比例1 1 10 2 11 50 3 51 80 4 80 评分 A B0分 阴性1 4分 弱阳性 4分 强阳性 胶原染色 阳性面积百分比40 10视野 选取5个视野 计算阳性区域面积占整个参考面积的百分率 CD34 Weidner法 MVD计数 孤立的棕黄色细胞族代表一条微血管 低倍镜下找到组织内密度最高区域 40 10视野下计数微血管数目 K ras VEGF 附 定量分析 图象处理系统 1 图象处理 利用仪器按照不同的目的进行图象的修正 变换 特征提取和测量 1 狭义 指消除图象的模糊不清部分 校正畸变 2 广义 包括对图象的结构分析 提取特征进行测量 2 图象处理系统组成图象输入 显微镜 扫描仪 图象处理运算 病理图文分析软件 图象 数据输出 3 图象处理系统功能几何形态学定量分析细胞核 浆的大小 面积 核浆比 细胞分布密度 个数 血管 腺体的面积 密度 间质的面积免疫组织化学分析按着色灰度分类 计算阳性 阴性细胞的面积含量DNA倍体分析计算正常细胞及肿瘤细胞DNA含量 给出倍体参数 DNA参数分布直方图AgNOR分析颗粒分析 数目 大小 面积 比例 四 免疫组化异常着色及对策 1 非特异性着色及其对策 内源性生物素 肾小管 内源性生物素 淋巴结转移性甲状腺腺癌 蜕膜组织部分胞核PR阳性 血管内红细胞过氧化物酶显色 嗜酸性粒细胞中细胞色素显色 吞噬细胞内含铁血黄素 坏死组织着色 AE1 AE3 坏死组织着色 交叉反应 乳腺ki 67组织细胞胞浆着色 黑色素瘤 细胞内含黑色素 呈紫黑色 HE染色 灶状着色 机械原因着色 CyclinD1套细胞淋巴瘤 全片着色 全片着色 边缘着色 阴阳脸 着色 气泡 非特异性着色及其对策 无信号片 CD30 2 染色的假阴性及其对策 无色或浅色片 MCL理想的CD5着色 所有的瘤细胞都着色很强 散在的T细胞着色比瘤细胞深 MCL的CD5染色不足 一抗浓度太低 MCL瘤细胞几乎都没有着色 3 染色过弱原因及其对策