结直肠癌异时性肝转移的分子标志物 miR 181a及其生物学功能 顾晋陈治国 研究背景 microRNA的概念及其作用机制 研究背景 miRNA对肿瘤的发生发展起着重要的作用miRNA在不同肿瘤组织中具有特征性表达模式miRNA与肿瘤的生物学行为密切相关可用于诊断CLL 乳腺癌和软组织肉瘤等肿瘤miRNA与结直肠癌 CRC 肝转移的关系 实验目的 筛选可能有助于预测CRC肝转移的miRNAsCRC肝转移相关的miRNAs功能研究 无肝转移的CRC 肝转移 miRNA表达的芯片检测 伴有同时性肝转移的CRC 生物信息学分析 原位杂交检测 筛选出CRC肝转移相关miRNAs 分子生物学验证 组织芯片构建 实验方案 实验方案 体外培养 病毒感染 基因增强表达效率测定 比较转染前后生物学性状的改变 低转移潜能CRC细胞系HT29 接种 裸鼠移殖瘤 裸鼠局部成瘤能力 浸润能力 生长增殖 裸鼠局部瘤的转移潜能 携带miRNA前体的慢病毒表达载体 实验结果 完成miRNA芯片检测无肝转移的CRC组织 5例伴有同时性肝转移的CRC组织 5例筛选出7个在两组间差异表达倍数大于1 7倍的miRNAsmiR 181a 152 320aLet 7d miR 15b 20b 223 实验结果 构建组织芯片同时性肝转移的CRC原发灶 n 160异时性肝转移的CRC原发灶 n 37无肝转移的CRC原发灶 n 97远癌正常CRC粘膜 n 72原位杂交Dig标记的LNA探针 实验结果 构建慢病毒过表达载体LV miR 181a GFPLV NC GFP慢病毒载体转染HT29细胞系 实验结果 Figure1 miRNAdetectionincolorectalcancertissuesbyLNA ISH 表1 miRNAs在CRC组织中的表达情况 Figure2 overallsurvivalinCRCpatientswithdifferentexpressionlevelofmiR 181a Figure3 TheexpressionofreportergeneGFPinHT29cellline Figure4 ThefoldchangeofthemiR 181aexpressionincellline Figure5 miR 181aenhancetheproliferationofHT29cell Figure6 miR 181aenhancethemigrationofHT29cellinvitro Figure7 miR 181aenhancethemigrationandinvasionofHT29cellinvitro Figure8 InvivotumorgrowthinNOD SCIDmice Figure9 Xenografttumorsinthreegroups 结论 miR 181a对预测CRC异时性肝转移可能具有重要的意义miR 181a高表达是预后不良的分子标志物miR 181a促进HT29细胞的生长 迁移和浸润对miR 181a功能的后续研究可能有助于阐明CRC异时性肝转移的调控机理