二十二章真菌学总论 2019 1 真菌学概述 真菌 fungus 也称Eumycota 来源于拉丁文的fungus 即蘑菇 真菌属于真核细胞型微生物 与原核细胞型微生物有很多区别真菌细胞壁含有几丁质 chitin 和 葡聚糖营养方式为吸收 无吞噬作用 营腐生 寄生 共生和超寄生生活 2019 2 原核细胞型微生物与真核细胞型微生物的比较 2019 3 真菌分类 我国普遍采用的是Ainsworth等分类法 与医学有关的真菌为真菌门中的四个亚门 接合亚门 zygomycotina 子囊菌亚门 Ascomycotina 担子菌亚门 Basidiomycotina 半知菌亚门 Deutermycotina 2019 4 假丝酵母菌属 Candida 隐球菌属 Cryptococcus 表皮癣菌属 Epidermophton 球孢子菌属 Coccidioides 组织胞浆菌属 Histoplastoma 2019 5 真菌生物学性状 真核细胞型微生物 属于真菌界 KingdomMyceteae 它具有典型的细胞核 不含叶绿素 以腐生或寄生方式摄取营养 细胞壁含几丁质 Chitin 和 或 纤维素 有完善细胞器 能进行有性生殖和 或 无性繁殖 2019 6 真菌生物学性状 多数对人有益 仅少数导致人类疾病对人致病的真菌分为四类 病原性真菌 条件致病性真菌 产毒真菌及致癌真菌 目前大多数真菌的鉴定 形态学 包括真菌形态 菌落形态 检查仍有重要意义 2019 7 单细胞真菌酵母菌 孢子 无菌丝类酵母菌 芽生孢子 假菌丝多细胞真菌丝状菌 霉菌 孢子和菌丝 真菌形态特征 2019 8 单细胞真菌形态 2019 9 类酵母菌 白假丝酵母菌 孢子 假菌丝 2019 10 多细胞真菌形态 2019 11 二相型真菌 机体内寄生37 单细胞型 多细胞型 含动物蛋白培养基 酵母菌 沙保氏培养基25 普通培养基25 丝状菌 2019 12 二相性真菌 2019 13 真菌的基本形态结构 菌丝 孢子 适宜温 湿度 芽管 延长呈丝状 菌丝营养 气生 生殖菌丝 分支交织成团 菌丝体 2019 14 菌丝多形态 菌种鉴定 2019 15 1 真菌繁殖结构 一条菌丝可生成多个孢子 真菌的基本形态结构 孢子 2019 16 孢子的分类 有性孢子 同一 不同菌体上两细胞融合减数分裂而成无性孢子 菌丝上细胞分化生成 不发生细胞融合 2019 17 无性孢子 分生孢子 叶状孢子 孢子囊孢子 芽生孢子 厚膜孢子 关节孢子 大分生孢子 小分生孢子 大多真菌行有性 无性生殖 病原性真菌多以无性生殖为主 2019 18 生殖菌丝末端细胞分裂或收缩形成 也可从菌丝侧面出芽形成 大分生孢子的形态 2019 19 2019 20 厚膜孢子 2019 21 关节孢子 2019 22 2019 23 真菌的生长特性 营养要求不高 常用沙保氏培养基 基本成分 葡萄糖 蛋白胨 琼脂 生长条件 pH4 0 6 0温度22 28 深部真菌37 较高的湿度 O2 2019 24 菌落类型 1 酵母型 类酵母型 单细胞真菌菌落形式 A 湿润 柔软而致密 形态似一般细菌菌落B 镜下 酵母型类酵母型 卵圆孢子 芽生孢子 芽生孢子 假菌丝 2019 25 菌落类型 2 丝状菌落 多细胞真菌菌落形式 A 棉絮状 绒毛状 粉末状 气生菌丝体 菌落正背面呈不同颜色 可为鉴定依据 B 玻片小培养 乳酚棉蓝 镜下 孢子 菌丝及完整菌丝体 2019 26 酵母型菌落 2019 27 白假丝酵母菌菌落 类酵母型 2019 28 曲霉菌 2019 29 青霉菌 2019 30 临床标本的采集种类 1 皮肤的角质性物质 毛发 指 趾 甲 皮屑等 2 各种分泌物和排泄物 生殖道分泌物 耳垢 痰 粪便 尿液等 3 血液和体液 体液包括胸水 腹水 脑脊液 淋巴穿刺液等 4 脓汁及渗出物 2019 31 采集标本注意事项 1 采集的标本要适宜不同真菌感染应采取不同的临床标本 怀疑为浅部真菌感染如体癣 应刮取病变边缘的痂 皮屑 发癣应取折断了的病发 怀疑为深部真菌感染应取血液 脑脊液 痰 脓汁等 2 在用药前采集标本一般真菌标本须在用药前采集 对已用药者则需停药一段时间后再采集标本 2019 32 采集标本注意事项 3 采集的标本量要足血液和脑脊液标本5ml 胸腔液20ml 皮屑标本两块 活体组织两份 一份送病理科检查 一份作镜检和培养 4 严格无菌操作在采集标本时严格无菌操作 并进行消毒处理 尤其是在采集血液和脑脊液标本时 要避免污染杂菌 5 采集的标本立即送检对采集的标本应立即送检 特别是深部真菌标本采集后最长不超过2h 2019 33 真菌的检验方法 镜检真菌形态真菌抗原检测真菌分离培养与鉴定真菌核酸检测真菌毒素检测 2019 34 真菌标本直接检查 1 直接镜检 方法简便 快速 10 KOH 微加热 低倍 高倍镜检查有无菌丝 孢子 角质标本 皮肤癣菌 直接观察 染色后观察 2 抗原检测 采用免疫学方法检测真菌抗原 常用的方法有胶乳凝集试验 ELISA 半定量放射免疫测定法 2019 35 常用的染色方法 常用的染色方法有革兰染色 瑞氏染色 荧光染色 乳酸酚棉蓝染色 还有墨汁负染色等 对检测骨髓和外周血中的荚膜组织胞浆菌 需作瑞氏染色或姬氏染色后镜检 检测病人脑脊液标本中新生隐球菌 需作墨汁负染色后检查 背景为黑色 新生隐球菌和荚膜不着色 2019 36 直接镜检意义 阳性结果意义1 有诊断意义 如浅部真菌病 隐球菌病 皮肤粘膜假丝酵母菌病等2 代表组织相 直接镜检看到的真菌形态就是该真菌的组织形态 如假丝酵母的菌丝 浅部真菌的厚膜孢子等 确定某些致病性真菌属或种 如皮肤癣菌 曲霉等3 判断某些真菌种的致病性等 2019 37 直接镜检意义 直接镜检局限性1 阴性结果不能排除真菌感染 直接镜检不如培养敏感 其敏感性随标本类型 数量 采集时间和质量等而有所不同2 有假阳性结果 如溶解的淋巴细胞在脑脊液印度墨汁湿片中易误认为新生隐球菌 脂肪微滴也可与出芽酵母细胞混淆 2019 38 分离培养 真菌培养是目前鉴定真菌的唯一方法 培养成功与否与采集的标本是否适当 是否新鲜 培养基的选择 培养温度与时间等有关 大多数真菌培养的温度为28 但深部真菌为37 对二相性真菌培养时 28 培养真菌呈菌丝相 霉菌型 37 培养为组织相 酵母型 2019 39 真菌培养方法 平皿培养 表面较大可使标本散布 便于观察菌落形态 但水分易蒸发 只能培养生长繁殖较快的真菌 如假丝酵母菌 隐球菌 大试管培养 水分不易蒸发 主要用于皮肤癣菌的培养和真菌菌种的保存 玻片培养 微量培养 小培养 可用于真菌菌种的鉴定 2019 40 观察菌落形态时注意 1 菌落性质 是酵母菌还是霉菌 2 菌落大小 一般病原性真菌菌落小 而条件致病性真菌菌落大 3 菌落颜色 一般病原性真菌颜色淡 污染真菌颜色深 4 致病性真菌菌落下沉 污染性真菌菌落不下沉 致病性真菌有时使培养基开裂 但污染霉菌很少引起培养基开裂 2019 41 真菌鉴定 菌种鉴定是一个复杂过程 仅观察菌落形态是远远不够的 还需作生化反应 分子生物学鉴定 必要时将菌种送有关单位鉴定 检验真菌常用的生化反应有糖 醇 类发酵试验 同化碳源试验 同化氮源试验或利用硝酸钾试验 牛乳分解试验 酚氧化酶试验 明胶液化试验和脲酶试验等 试验方法同细菌试验 主要用于检验深部感染真菌如假丝酵母菌 隐球菌等 2019 42 1 多烯类抗生素 如两性霉素B 制霉菌素 曲古霉素等 2 吡咯类 包括酮康唑 伊曲康唑 氟康唑 伏立康唑 克霉唑 益康唑等 3 其他类如氟胞嘧啶 抗真菌药物分类 化学结构分类 2019 43 1 作用于真菌细胞膜 两性霉素B 制霉菌素 氟康唑 伊曲康唑 伏立康唑 酮康唑及克霉唑等 2 作用于真菌细胞壁 尼可霉素Z 卡泊芬净及普拉米星 pradimicin 等 3 作用于真菌核酸 干扰真菌DNA合成 5 氟尿嘧啶 5 FC 等 4 其他 大蒜新素 allitridum 及冰醋酸 glacialeaceticacid 等 抗真菌药物分类 作用机理分类 2019 44 抗真菌药物药敏试验原则 1 提供两种以上有相当活性的抗真菌药物的可信测量方法2 和体内的活性具有相关性 可预测治疗的效果3 可用来监控敏感群体菌株的耐药性发生4 可预期研究新药的潜在治疗效能 2019 45 真菌非培养检测技术 动物试验 分离病原性真菌 确定真菌菌种的致病性 研究药物对真菌的作用等 核酸检测 操作简便 省时省工 敏感性和特异性高的优点 但要一定的实验条件 并大多仍处于实验研究阶段 故目前不可能完全替代常规鉴定方法 真菌毒素的检测 生物学方法 薄层层析法 高效液相色谱法和间接竞争ELISA法等 2019 46 常见深部真菌病动物试验鉴别要点取材接种动物接种途径潜伏期动物病变白假丝痰 尿家兔 耳静脉 3 5d肾脏明显肿胀 肾酵母菌病便 血小白兔腹腔皮质部位有白色脓疡新生隐球脑脊液 小白鼠颅内 2 8周死亡 取标本涂片 菌病脓 痰 腹腔墨汁负染色见带荚膜尿的菌体孢子丝脓汁 痰液大 小腹腔 1 3周肠系膜 腹膜有肉芽菌病活体组织 白鼠睾丸组织形成 睾丸肿大 涂片见G 圆形 卵圆形 雪茄烟 状小体 着色真脓汁 培养物大白鼠腹腔 肺 肾 腹腔呈肉芽菌病 活体组织小白鼠睾丸 数周肿损害静脉组织胞血 骨髓 大白鼠腹腔 死亡 肝 脾 肾淋浆菌病痰 皮肤小白鼠颅内1 2周巴结呈肉芽肿损害 涂片 于巨噬细胞和大单核细胞内可查到本菌球孢子血液 骨髓 小白鼠 腹腔 1 2周死亡 可从肝 脾 菌病痰 皮肤豚鼠睾丸肺等器官及腹膜找到本菌 睾丸脓肿可见典型的球孢子菌 2019 47 第二十三章浅部感染真菌 2019 48 浅部感染真菌概述 浅部真菌 superficialfungi 主要侵犯机体皮肤 毛发和指 趾 甲 寄生和腐生于表皮 毛发和甲板的角质组织中 引起浅部真菌病 浅部感染真菌包括表面感染真菌 皮肤癣真菌和皮下组织感染真菌三类 临床上最多见的浅部真菌为皮肤癣真菌 包括毛癣菌属 表皮癣菌属和小孢子菌属 2019 49 毛癣菌属 毛癣菌属 Trichophyton 属半知菌亚门 丝孢菌目 丛梗孢菌科 有20余种 其中14种能引起人和动物的感染 临床上常见的有红色毛癣菌 trichophytonrubrum 须癣毛癣菌 T mentagrophytes 又称石膏样毛癣菌 许兰毛癣菌 T schoenleinii 又称黄癣菌 紫色毛癣菌 T violaceum 断发毛癣菌 T tonsurans 2019 50 微生物检验 一 标本采集二 直接显微镜检查 皮屑 10 KOH液指甲 25 KOH 25 NaOH含5 甘油处理常用湿标本 不加染色 直接显微镜镜检 2019 51 微生物检验 三 分离培养标本70 乙醇或在青 链霉素混合液内处理5min生理盐水洗3次接种沙氏琼脂斜面25 培养观察菌落特征 四 其他鉴定试验毛发穿孔试验脲酶试验特殊营养需要试验 2019 52 2020 5 19 53 可编辑 毛癣菌 菌落灰白 红 橙或棕色 表面呈绒毛状 粉粒状或蜡样 大分生孢子细长棒状薄壁 菌丝有螺旋状 球拍状 鹿角状和结节状 2019 54 表皮癣菌属 表皮癣菌属 Epidermophyton 目前只有一个种 即絮状表皮癣菌 E floccosum 能引起人类感染 絮状表皮癣菌是一种常见的皮肤癣菌 可引起皮肤感染如股癣 足癣 体癣 手癣和甲癣 2019 55 絮状表皮癣菌生物学性状 皮屑和甲屑经 10 KOH液消化镜检可见分枝断裂的有隔菌丝 少见孢子沙氏培养基上培养后 菌落初为白色鹅毛状 以后转变为黄色粉末状 镜下可见球拍状菌丝 卵圆形或巨大棒状薄壁大分生孢子 无小分生孢子 在陈旧培养物中可见厚膜孢子 2019 56 表皮癣菌 菌落初为白色鹅毛状 以后变为黄绿色粉末状 粗棒状薄壁大分生孢子 菌丝球拍状 2019 57 小孢子菌属 我国常见的有铁锈色小孢子菌 石膏样小