牛乳蛋白质的提取与鉴定 一 实验目的 了解蛋白质的化学性质 掌握蛋白质的提取方法和鉴定理 1 酪蛋白提取的原理 蛋白质是含羧基和氨基的两性电解质 在某一pH值溶液中 蛋白质分子所带的正电荷和负电荷相等 蛋白质以两性离子状态存在 这时溶液的pH值 称为该蛋白质的等电点 PI 在等电点时 蛋白质所带净电荷为零 溶解度最小 蛋白质沉淀析出 利用蛋白质的这个特点可将蛋白质提取出来 由于粗提出的酪蛋白中还含有脂肪 可用乙醇和乙醚洗涤除去 2 酪蛋白鉴定的原理 酪蛋白中含有酪氨酸残基 酪氨酸残基的R基团为 含酚羟基 可与米伦试剂反应先生成白色絮状沉淀 继续反应生成红色沉淀 酪蛋白中还含有含硫氨基酸 胱氨酸 半胱氨酸和蛋氨酸 在碱性溶液中水解后可与醋酸铅反应生成黑色的硫化铅 三 操作步骤 一 酪蛋白的制备 新鲜牛奶 醋酸纳缓冲液各5ml40 分别加热至同样温度上清液 保留做鉴定 烧杯 三 边加边摇混匀5min沉淀加4ml95 的乙醇离心5分钟上清液 弃去沉淀 做鉴定 2000r min离心 二 酪蛋白的性质鉴定 1 溶解度取3支试管 0 1MNaOH 0 2MHCl 10 NaCl各2ml 少许酪蛋白 振荡 观察溶解快慢 2 米伦反应1mlH2O少许酪蛋白观察10滴米伦试剂 加热 3 含硫氨基酸的 胱氨酸 半胱氨酸 蛋氨酸 鉴定 1ml0 1MNaOH55滴5 醋酸铅少许酪蛋白溶解加热煮沸观察 三 乳清中可凝固性蛋白质鉴定 将第一次离心所得的上清液徐徐加热 出现蛋白质沉淀 球蛋白 清蛋白 四 实验结果五 讨论 二 常用生化仪器使用 离心机离心技术 centrifugaltechnique 根据颗粒作匀速圆周运动时受到一个外向的离心力的行为而发展起来的一种分离技术 离心技术应用很广 诸如分离出化学反应后的沉淀物 天然的生物大分子 无机物 有机物 在生物化学以及其它的生物学领域常用来收集细胞 细胞器及生物大分子物质 离心机种类 按用途 有分析用 制备用及分析 制备分 按结构特点 有管式 吊蓝式 转鼓式和碟式等 按转速 有为常速 低速 高速和超速三种 实验室用普通低速离心机 实验室普通离心机使用方法1 将离心机放在坚实而平整的工作台上 2 在适用的离心管中加入样品 必须对称配重 否则会损坏离心机 3 按离心机转头的离心管位置刻度所对应孔插入 放下离心机顶盖 4 检查确认调速钮处于最低速位置 5 打开电源开关 调速到需要的转速 6 选择工作时间 调 选时 钮到需要的位置 7 离心完成 离心机自然停止 2 离心机使用注意事项 1 严禁各种液体和杂物进入离心工作室 那样会损坏主机 2 仪器电源线应有良好的接地 以免发生意外 3 离心机工作时不要打开顶盖 4 电压的高低以及不稳定现象直接影响本机的转速 但不会损坏电机 对转速要求较高的使用场合 请使用稳压装置 使运转速度稳定