第一章 无菌操作技术实践(时间：90分钟满分：100分)一、选择题(本题包括15小题，每小题3分，共45分)1.下列有关微生物培养与应用的说法，正确的是()A.天然培养基是指直接取自自然界不需加工的培养基B.接种前需对培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手等进行严格的灭菌处理C.大肠杆菌的纯化培养过程包括培养基的配制和纯化大肠杆菌两个阶段D.分离分解尿素的细菌时，尿素是培养基中唯一的氮源和碳源答案C解析天然培养基是指用天然物质制成的培养基，但也需要加工；实验操作者的双手应消毒，不能灭菌；分离分解尿素的细菌时，尿素是培养基中唯一的氮源，不是碳源，需加入不含氮元素的有机物(如葡萄糖)作为碳源。2.微生物(除病毒外)需要从外界吸收营养物质，并通过代谢来维持正常的生长和繁殖。下列有关微生物营养的说法，正确的是()A.纤维素分解菌与硝化细菌所利用的碳源物质是相同的B.在纤维素分解菌生长的培养基中只需碳源、氮源、水、无机盐即可正常生长C.培养基中的营养物质浓度越高对微生物的生长越有利D.生长因子是微生物生长必需的，而微生物本身合成这些物质的能力往往不足答案D解析纤维素分解菌是异养型微生物，其碳源为有机物，如纤维素等。硝化细菌是自养型微生物，其碳源物质为CO2，因此A错误；纤维素分解菌的培养基中需加入维生素做生长因子，才能正常生长，因此B错误；培养基中的营养物质浓度过高会导致微生物不能从培养基中吸水，将出现失水过多而死亡的现象，对生长不利，因此C错误。3.下列说法错误的是()A.因为土壤中各类微生物的数量不同，所以为获得不同类型的微生物，要按不同的稀释倍数进行分离B.测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围不同C.在统计菌落数目时，为了保证结果准确，一般采用密度较大的平板进行计数D.牛肉膏蛋白胨培养基的菌落数明显大于选择培养基的数目，说明选择培养基已筛选出一些细菌菌落答案C解析样品的稀释度直接影响平板上生长的菌落数目，土壤中各类微生物数量不同，含量最多的是细菌，大约占70%90%，其次是放线菌，最少是真菌，所以为获得不同类型的微生物，要按不同的稀释倍数进行分离；一般选择菌落数目在30300的平板计数，密度过大会使计数结果偏小，影响结果的准确性；验证选择培养基是否具有选择作用，需设立牛肉膏蛋白胨固体培养基作为对照，若后者上的菌落数明显大于前者，说明前者具有筛选作用。4.MRSA菌是一种引起皮肤感染的“超级细菌”，对青霉素等多种抗生素有抗性。为了研究人母乳中新发现的蛋白质H与青霉素组合使用对MRSA菌生长的影响，某兴趣小组的实验设计及结果如下表，下列说法不正确的是()组别培养基中的添加物MRSA菌1100 g/mL蛋白质H生长正常220 g/mL青霉素生长正常32 g/mL青霉素100 g/mL蛋白质H死亡A.细菌的死亡不能通过光学显微镜观察其细胞的有无来确定B.第2、3组对比表明，使用低浓度的青霉素可杀死MRSA菌C.实验还需设计用2 g/mL青霉素做处理的对照组D.此实验设计不能揭示蛋白质H的作用机理答案B5.下列关于微生物分离和培养的有关叙述，错误的是()A.微生物培养前，需对培养基进行消毒B.测定土壤样品中的细菌数目，常用菌落计数法C.分离土壤中不同的微生物，要采用不同的稀释度D.分离能分解尿素的细菌，要以尿素作为培养基中唯一的氮源答案A解析微生物培养前，需对培养基进行灭菌，而不是消毒；测定土壤样品中的细菌数目，常用菌落计数法；分离土壤中不同的微生物，要采用不同的稀释度，以便能从中选择出菌落在30300的平板进行计数；分离能分解尿素的细菌，要以尿素作为培养基中唯一的氮源。6.在涂布有大肠杆菌的培养基上进行抑菌实验，在a、b、c处分别贴浸有不同抗生素(浓度相同)的无菌滤纸片，d处滤纸片浸有无菌水。培养后的结果如下图。以下判断错误的是()A.a处抑菌效果小于b处B.b处的滤纸片没有沥干C.c处抗生素无效D.d为对照答案A7.某研究小组从有机废水中分离微生物用于废水处理。下列叙述正确的是()A.培养基分装到培养皿后进行灭菌B.转换划线角度后需灼烧接种环再进行划线C.接种后的培养皿需放在光照培养箱中培养D.培养过程中每隔一周观察一次答案B解析在配制培养基的过程中要先灭菌后倒平板，A项错误；转换划线角度后需灼烧接种环再进行划线，B项正确；接种后的培养皿放在恒温培养箱中培养，C项错误；培养过程中每隔一天观察一次，D项错误。8.细菌需要从外界吸收营养物质并通过代谢来维持正常的生长和繁殖。下列与此有关的说法正确的是()A.乳酸菌与硝化细菌所利用的碳源物质是相同的B.无机氮源不可能作为细菌的能源物质C.琼脂是细菌生长和繁殖中不可缺少的一种物质D.以尿素为唯一氮源的培养基上长出的不都是尿素分解菌答案D解析乳酸菌是异养型微生物，需要有机碳源，而硝化细菌是自养型微生物，需要的碳源是CO2，故A项错误；有些无机氮源也可以提供能量，如硝化细菌可以利用氧化氨释放的能量进行有机物的合成，故B项错误；培养基中的琼脂是凝固剂，不会被微生物利用，故C项错误；自生固氮微生物可以利用大气中的N2作为氮源，因此以尿素为唯一氮源的培养基上长出的不都是尿素分解菌，故D项正确。9.植物组织培养和花药离体培养都是实验室条件下快速得到大量幼苗的两种方法。下列关于两者的比较中，错误的是()A.植物组织培养和花药离体培养的理论基础是细胞具有全能性B.花药能诱导为单倍体植株的原因是花药细胞中含有本物种生长发育的全部遗传信息，尽管遗传物质是体细胞的一半，但仍具有全能性。C.植物组织培养获得的试管苗必须经过移栽、炼苗后才能在大田栽培，而花药培养不需要D.植物组织培养中若发生突变，则其后代不一定表现其突变性状，但是花药培养中的突变一定表现相应突变性状答案C解析花药培养和植物组织培养的理论依据都是植物细胞的全能性。尽管花药细胞中的遗传物质是体细胞的一半，但仍含有本物种生长发育所需的全部基因(或遗传信息)，因此仍具有全能性。在组织培养过程中，若发生隐性的基因突变，由于基因成对存在，所以不一定表现其突变性状，仍能保持亲代的性状；而花药中基因单个存在，若有突变，则性状就发生变化。两种方法所得到的试管苗，都必须通过移栽、炼苗后方可进行大田栽培。10.下列有关植物组织培养的叙述，正确的是()A.愈伤组织是一团有特定结构和功能的薄壁细胞B.二倍体植株的花粉经脱分化与再分化后得到稳定遗传的植株C.愈伤组织是一种细胞呈正方形、排列紧密的组织D.植物耐盐突变体可通过添加适量NaCl的培养基培养筛选而获得答案D解析愈伤组织是一团排列疏松而无规则、高度液泡化的、呈无定形状态的、具有分生能力的薄壁细胞，不具有特定的结构和功能，A、C项错误；二倍体植株的花粉中只含一个染色体组，培养得到的个体为单倍体，高度不育，只有幼苗用秋水仙素处理后得到的植株才能稳定遗传，B项错误；用特定的选择培养基可筛选出所需的突变体类型，如植物耐盐突变体的筛选可利用添加适量NaCl的培养基进行，D项正确。11.植物组织培养技术需要在无菌条件下完成，下列哪些植物的组织、器官或细胞，在人工控制环境里容易形成完整的植株()茎尖花药子房壁薄壁细胞形成层细胞根尖成熟区细胞A. B.C. D.答案A解析依据细胞全能性表达的先后顺序，全能性容易表达的组织是分化程度较低的组织。有些薄壁细胞属于高度分化的细胞，全能性相对较低；茎尖和形成层细胞属于分生组织，分化程度低，全能性较高；花药属于生殖细胞，尽管分化程度相当高，但是全能性也较高。12.下列关于MS培养基与微生物培养基的配方相比的不同之处，说法错误的是()A.MS培养基中常常添加植物激素，微生物培养基中不需要B.MS培养基中的碳源和能源是蔗糖，微生物培养基中的碳源和能源主要是葡萄糖C.MS培养基中需提供植物生长必需的大量元素和微量元素D.MS培养基中不需加维生素，微生物培养基中要加维生素作生长因子答案D解析MS培养基中需要加入甘氨酸、维生素等物质，主要是为了满足离体植物细胞在正常代谢途径受到一定影响后所产生的特殊营养需求。13.在下列选项中，需要采用植物组织培养技术的是()利用秋水仙素处理萌发的种子或幼苗，获得多倍体植株获取大量的脱毒苗利用基因工程培育抗棉铃虫的植株单倍体育种无子西瓜的快速大量繁殖A. B.C. D.答案B14.用水稻(基因型为AaBb)的花药通过无菌操作，接入试管，经过如下图所示过程形成试管苗，以下选项中叙述正确的是()A.a：用花药离体培养法获得的是单倍体植株；b：通过有丝分裂产生愈伤组织；c：培养基中应有固氮菌；d：试管苗的生长发育不需要光照B.a：用花药离体培养法获得的是二倍体植株；b：通过减数分裂产生愈伤组织；c：培养基是由碳源物质组成的；d：试管苗的生长发育不需要光照C.a：用花药离体培养法最终获得的是单倍体植株；b：通过有丝分裂产生愈伤组织；c：培养基中应有植物生长和发育所需的全部物质；d：试管苗的生长发育需要光照D.a：用花药离体培养法获得的是二倍体植株；b：通过有丝分裂产生愈伤组织；c：培养基是由氮源物质组成的；d：试管苗的生长发育需要光照答案C解析用花药离体培养法获得的试管苗为单倍体，不是二倍体，故排除B、D；试管苗生长发育时进行光合作用，需要光，故排除A；花药内细胞经有丝分裂产生愈伤组织，培养基中应有植物生长和发育所需的全部物质，包括水、矿质元素、蔗糖、维生素、植物激素和有机添加物等。15.将无根的非洲菊幼苗转入无植物激素的培养基中，在适宜的温度和光照等条件下培养一段时间后，应出现的现象是()答案B解析细胞分裂素促进细胞分裂，诱导芽的分化；生长素可以促进不定根、侧根的形成；此题中虽然培养基中没有植物激素，但是植物幼苗叶片本身可以产生生长素，而细胞分裂素的产生部位是根尖，细胞分裂素不能产生，所以植物能够在一段时间后长出少量的根而没有出芽。二、非选择题(本题包括5小题，共55分)16.(10分)科学研究发现，某种细菌能降解石油、增大石油乳化度、降低石油黏度。通过向油井中注入含有该种细菌的水可提高采油率，为了获得高纯度的该种细菌，科研人员做了相关实验，请分析回答下列问题：(1)虽然不同微生物对营养物质的需求不同，但培养基中一般都含有_；为了防止杂菌污染，应对培养基进行_处理，常采用的处理方法是_。(2)当以菌落数统计目的菌株数时，至少应选择3个菌落数在_(范围)的平板进行计数，并以菌落数的_作为统计结果，一般情况下该统计结果会_(填“低于”“高于”或“等于”)实际值。(3)因分离获得的目的菌降解石油的效果不甚理想，科研人员对其进行了诱变处理(实验组)。与对照组相比，最可能的结果为：实验组中大多数菌落周围的透明圈(石油被目的菌分解后褪色形成的圆形圈)大小_；实验组中少数菌落周围的透明圈_。答案(1)水、碳源、氮源和无机盐灭菌高压蒸汽灭菌法(2)30300平均值低于(3)无显著差异变大或变小解析(1)不同微生物对营