GB/T 发布国家市场监督管理总局中国国家标准化管理委员会-实施-发布畜禽饲料有效性与安全性评价 反刍动物饲料瘤胃降解率测定 尼龙袋法Feed efficacy and safety assessment Determination of rumen degradability of feeds for ruminantsNylon bag technique（送审稿）GB/T -中华人民共和国国家标准ICS 65.120B46Nnn 7前 言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准的附录A为规范性附录。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会提出（SAC/TC76）并归口。本标准起草单位：中国农业大学，农业农村部饲料效价与安全监督检验测试中心（北京）。本标准主要起草人：赵广永、张晓明、邢建军、冯仰廉、曹志军。畜禽饲料有效性与安全性评价 反刍动物饲料瘤胃降解率测定 尼龙袋法1 范围本标准适用于一切理化性质符合要求的、饲料主要营养成分干物质、有机物、粗蛋白、中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维的牛、羊、鹿瘤胃降解率测定。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注明日期的引用文件，仅注明日期的版本适用于本文件。凡是不注明日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）使用于本文件。GB/T 6435 饲料中水分的测定GB/T 6438 饲料中粗灰分的测定GB/T 6432 饲料中粗蛋白的测定 凯氏定氮法GB/T 20806 饲料中中性洗涤纤维（NDF）的测定NY/T 1459 饲料中酸性洗涤纤维含量的测定3 术语与定义以下术语与定义适用于本规程。3.1实时瘤胃降解率 instantaneous rumen degradability被测饲料样品在瘤胃中停留一定时间内, 被降解的营养成分数量占饲料样品中该营养成分含量的百分比，以质量百分数（%）表示。3.2瘤胃食糜外流速率 outflow rate of rumen digesta瘤胃食糜外流速率是表示饲料在瘤胃内停留时间的重要指标。该指标是指单位时间内从瘤胃中流出的食糜质量占瘤胃内食糜质量的百分比，计量单位以%/h表示。3.3有效瘤胃降解率 effective rumen degradability不同性质的饲料在瘤胃内实际停留的时间不同，根据不同时间点的实时瘤胃降解率，结合瘤胃食糜外流速率计算得到的降解率，称为有效瘤胃降解率。表示在实际饲喂条件下被测饲料在瘤胃中的降解程度，是配合反刍动物日粮时实际使用的降解率，计量单位以质量百分数（%）表示。3.4培养时间 incubation time装有待测饲料样品的尼龙袋在瘤胃内放置的时间。以h表示。4 试验条件4.1 动物一般应使用2-5岁的成年普通牛、成年绵羊或成年鹿作为试验动物，也可以根据研究目的使用山羊或水牛作为试验动物。动物头数至少应有4头。动物的品种、年龄、生理状态和生产性能应相近，动物应发育正常，健康状况良好。动物应安装永久性瘤胃瘘管，瘘管内径大于40 mm。安装瘤胃瘘管手术应在20天以上、恢复正常生理状态后，方可用于试验。4.2 日粮动物的日粮应根据牛（羊）的品种、生产阶段、生产水平及当地饲料资源状况，选用常规的牛（羊）饲料原料，根据相应的饲养标准配合日粮。一般应按照1.3倍的维持营养需要水平进行饲养，日粮精粗料比例应为1：1。对于特殊生理阶段或特殊生产阶段的牛（羊），可以采用高于1.3倍维持需要的营养水平饲养，但是在相关研究报告中应明确说明。4.3 饲养管理4.3.1 应按照相应品种动物的饲养标准对动物进行饲养管理，每天应饲喂23次，自由饮水。4.3.2 在进行正式测定前，动物预饲至少15天。4.3.3 在预饲期和正试期，不应更换日粮或对动物进行免疫、疾病治疗及实施其他可能干扰瘤胃消化机能的任何措施。4.4 试验材料4.4.1 尼龙袋4.4.1.1 应选用孔径为4060 mm的尼龙布，制成长宽为12 cm8 cm的尼龙袋，袋底部两角呈钝圆形，以免饲料样品残留。4.4.1.2 尼龙袋的边应使用细涤纶线双线缝合。应使用在瘤胃内不易溶解的胶粘剂弥合缝合所留针孔。尼龙袋散边应使用电烙铁烫焦或用酒精灯烤焦，以防尼龙布脱丝。4.4.1.3 应使用在瘤胃中不易褪色的墨水对新尼龙袋编号。应将新尼龙袋放置在瘤胃内72 h，取出、洗净、在65烘箱中烘干后，方可使用。每个尼龙袋的使用次数不超过3次。4.4.2 半软塑料管4.4.2.1 半软塑料管的作用是固定尼龙袋，并保证装有待测样品的尼龙袋始终沉浸于瘤胃食糜中。4.4.2.2 半软塑料管的直径应为0.50.8 cm，用于羊的稍细，用于牛的稍粗。羊用半软塑料管长度为25 cm，牛用半软塑料管长度为50 cm。4.4.2.3 在塑料管的一端距顶端12 cm处, 划出长度为3 cm左右的夹缝，用于固定尼龙袋。在塑料管的另一端距顶端12 cm处打一直径为0.3 cm的孔，系一条结实的尼龙线，用于将半软塑料管固定于瘤胃瘘管盖上。5 试验过程5.1 待测样品的准备将待测样品进行风干处理, 经过2.5 mm网筛粉碎，置于样品瓶内，于清洁干燥处保存备测。5.2 称样与装袋5.2.1 将尼龙袋、饲料样品置于65烘箱内，干燥至恒重。5.2.2 用分析天平称取尼龙袋重量，然后采用适当工具将经称重的待测样品送入尼龙袋底部。每个尼龙袋中，精饲料称取4g左右，粗饲料称取2g左右。尼龙袋和待测样品的称量均应精确至0.0001g。根据不同动物调整饲料样品用量。5.2.3 对于某些饲料样品，每个尼龙袋中的饲料样品量可根据其容重大小适当调整。5.3 尼龙袋的绑定分别将两个装有待测样品的尼龙袋口交叉夹于一根半软塑料管底端的夹缝中，用橡皮筋缠绕固定，确保饲料样品不渗漏、尼龙袋不脱落。5.4 尼龙袋的放置在早晨饲喂前1 h，打开动物的瘤胃瘘管盖，借助木棒（或其他适宜工具）将固定尼龙袋的半软塑料管连同尼龙袋一起送入瘤胃腹囊食糜中。使用半软塑料管上端的尼龙线将半软塑料管固定于瘘管盖上。也可以在不同时间点分别投样，最后将样品一起取出。也可以采用其他方法放置尼龙袋，但必须保证尼龙袋始终沉浸于瘤胃腹囊食糜中。5.5 在瘤胃内的培养时间精饲料的培养时间点为：2、4、8、16、24、36和48 h。粗饲料的培养时间点为：4、8、16、24、36、48和72 h。 5.6 尼龙袋从瘤胃内取出将装有待测样品的尼龙袋放入试验动物的瘤胃后, 开始记录培养时间，每个培养时间点从每头（只）动物瘤胃中各取出一根管（连同上面所系的2个尼龙袋），直至所有塑料管（尼龙袋）全部取出为止。5.7 尼龙袋的冲洗将取出的尼龙袋浸泡在冰水中，并立即用自来水冲洗，在冲洗过程中可用手轻轻挤压，直至水澄清为止。在冲洗过程中应防止尼龙袋中的残余物随水逃逸。5.8 尼龙袋烘干将洗净过的尼龙袋（连同之中的残余物）置于65烘箱内，干燥至恒重。称重精确至0.0001g。5.9 样品与培养残余物营养成分含量的分析将各培养时间点尼龙袋中的残余物完全转移出来，分别采用GB/T 6435、GB/T 6438、GB/T 6432、GB/T 20806、NY/T 1459测定饲料样品和尼龙袋残余物中水分、有机物、粗蛋白、中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维含量，并换算为65下的风干物质含量。5.10 样品校正试验饲料样品的部分细小颗粒可能不被降解而通过尼龙袋孔直接逃逸，此部分逃逸样品应通过空白试验进行校正。即在进行上述操作的同时，按5.2和5.3的操作步骤另装2个尼龙袋，但不将其放入瘤胃内，直接按照5.7、5.8和5.9的操作步骤进行处理。6 结果计算6.1 装袋饲料样品量的校正6.1.1装袋饲料样品逃逸率按式（1）计算。FER (风干物质基础) =（FBI FAI）/FBI 100（1）式中：FER装袋饲料样品逃逸率，单位为%。FBI校正试验装袋样品风干饲料样品质量，单位为g。FAI校正试验袋中残余饲料质量，单位为g。6.1.2校正装袋饲料样品量按式（2）计算。CF (风干物质基础) = AF （1 FER）（2）式中：CF校正装袋饲料样品质量，单位为g。AF实际装袋饲料样品量，单位为g。FER装袋饲料样品逃逸率，单位为%。6.2 营养成分降解量营养成分降解量按式（3）计算。IDN（风干物质基础）（CF CFRN）（IFRIFRN）（3）式中： IDN某营养成分某培养时间点的降解量，单位为g。CF校正装袋饲料样品质量，单位为g。 CFRN校正试验残余物中某营养成分含量，单位为%。IFR某培养时间点残余物的质量，单位为g。IFRN某培养时间点残余物中某营养成分含量，单位为%。6.3 营养成分实时瘤胃降解率营养成分实时瘤胃降解率按式（4）计算。DP = DN/(CFCFRN) 100（4）式中：DP某营养成分某时间点的实时降解率，单位为%。DN某营养成分某时间点的降解量，单位为g。CF校正装袋饲料样品质量，单位为g。CFRN校正试验残留物中某营养成分的含量，单位为%。6.4 降解参数的计算某饲料营养成分的实时瘤胃降解率符合指数曲线式（5）.dp = a + b (1exp(-ct) （5）式中：dpt时刻某营养成分的实时瘤胃降解率，单位为%。a某营养成分的快速降解部分，单位为%。b某营养成分的慢速降解部分，单位为%。cb部分的降解速率，单位为百分比每小时（%/h）。t饲料在瘤胃内停留的时间，单位为小时（h）。6.5 有效瘤胃降解率的计算利用6.4的计算结果（a、b、c值），待测饲料营养成分的有效瘤胃降解率按式（6）计算。P = a + bc/(c + k) （6）式中：P某营养成分的有效降解率，单位为%。a某营养成分的快速降解部分，单位为%。b某营养成分的慢速降解部分，单位为%。cb部分的降解速率，单位为百分比每小时（%/h）。k某营养成分的瘤胃外流速率，单位为百分比每小时（%/h）。式中k值应按照本标准的规范性附录A 反刍动物饲料瘤胃外流速率的测定进行测定。 7 结果表示试验结果应包括各营养成分在各培养时间点的实时瘤胃降解率、降解参数a、b、c、食糜外流速率k和有效瘤胃降解率。试验结果的表示应精确到小数点后两位有效数字。在试验报告中，应对试验动物的种类、品种、数量等情况，以及对k值的测定方法加以说明。规范性附录A 反刍动物饲料瘤胃外流速率的测定 铬标记法A.1 原理利用铬在动物消化道内基本不被消化的特性，将待测饲