生物化学实验 1 生物化学实验内容 1 醋酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白质2 双缩脲测定蛋白质的含量3 血液葡萄糖的测定4 牛乳酪蛋白提取与鉴定5 维生素C的提取与含量的测定6 琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制7 酶的基本性质要求 课前预习 试验中做记录 课后写实验报告 两人一组 离开实验室时签字 2 实验一血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳 一 目的 了解电泳技术基本原理 掌握醋酸纤维薄膜电泳操作技术 二 原理 蛋白质是两性电解质 在非等电点状态下在电场中会向一定电极移动 在碱性条件下多数蛋白质带负电荷 在电场中向正极移动 不同蛋白质由于大小 所带电荷及形状不同 在电场中的迁移率不同 经过电泳可将其分开 结果经染色 漂洗 得电泳图谱 材料 血清 3 pH8 6巴比妥缓冲液滤纸吸去膜上液体醋酸 浸泡 点样纤维薄膜10min沾血清点在无光泽面上2mA 条膜染色液漂洗液 电泳 染色 漂洗40min5min浸泡漂洗数次 观察电泳谱带 三 步骤 4 电泳装置 5 点样 6 7 8 9 10 11 实验二双缩脲测定蛋白质含量 一 实验目的掌握双缩脲测定蛋白质的方法和原理二 实验原理双缩脲在碱性溶液中与Cu2 产生紫色的络合物 这一反应称 双缩脲反应 蛋白质分子中肽键 也能与Cu2 发生双缩脲反应 溶液紫色的深浅与蛋白质含量在一定范围内成正比 而与蛋白质的氨基酸组成及分子量无关 该紫色的络合物在580nm处有最大吸收值 12 三 实验步骤 1 标准曲线制作 已制好 2 样品测定 13 3 结果计算 100 豆粉 g 样品蛋白质含量 标准曲线上查得蛋白质含量 g 14 15 16 17 18 实验三血液葡萄糖的测定 一 实验目的学习和掌握Folin 吴宪法测定血糖的方法二 实验原理 19 三 实验步骤 20 四 计算 21 实验四牛奶中蛋白质的提取与鉴定 一 实验目的学习从牛奶中制备酪蛋白的方法并进行鉴定试验二 实验原理蛋白质等电点沉淀三 实验步骤1 酪蛋白的制备 22 鲜牛乳3Oml 40 3Om醋酸缓冲液 40 边加边摇动 离心3000r 5min 冷却至室温 继续放置5分钟 清液 乳清 沉淀 加热观察现象 醇醚混合物洗2次 沉淀 清液 晾干 鉴定 弃掉 23 2 酪蛋白的性质鉴定 1 溶解度观察 24 2 米伦反应 少许酪蛋白 lmlH2O 米伦试剂10滴 振摇 加热观察其颜色变化 3 含硫 胱氨酸 半胱氨酸和蛋氨酸 测定 少量酪蛋白 lmlO 1MNaOH 5 醋酸铅1 3滴 观察现象 煮沸 25 26 27 28 29 实验五维生素C的定量测定 2 6 二氯酚靛酚滴定法 一 实验目的掌握滴定法测定Vc含量的原理和操作 二 实验原理 30 三 实验步骤 1 提取 2 0克松针 2份 少量2 草酸匀浆过滤后用2 草酸定容到50毫升 也可先定容后过滤或离心 31 2 滴定 1 标定染料 标准维生素C液滴定 准确吸取标准维生素C溶液10毫升 含1 0毫克维生素C 置100毫升锥形瓶中 用微量滴定管以0 1 2 6一二氯酚靛酚滴至淡红色出现 15秒钟不退色即为滴定终点 记录所用染料体积计算出1毫升染料相当于多少毫克维生素C K值 即1 染料ml 2 样液滴定 准确吸取滤液10毫升放人100毫升锥形瓶内 滴定方法同前 做两次平行试验 记录染料体积 3 空白液滴定 准确吸取10毫升2 草酸溶液 放入100毫升锥形瓶中 用上述方法滴定至终点 记录所用染料体积 滴定过程宜迅速 一般不超过2分钟 32 X 100克样品所含维生素C毫克数W 称取样品毫克数V1 滴定样品所用染料毫升数V2 滴定空白所用染料毫升数V3 样品测定时所用滤液毫升数 即10毫升 V 样品提取液稀释至总体积 即50毫升 K 1毫升染料所能氧化维生素C之毫克数 可由标定算出 3 计算 33 34 35 实验六琥珀酸脱氢酶的作用及其竞争性抑制的观察 一 实验目的了解琥珀酸脱氢酶的作用及其竞争性抑制剂对其活性的抑制 二 实验原理 甲烯白 36 三 实验步骤 1 酶的制备猪心1 5 2g 1 15M磷酸氢二钠溶液3 4ml匀浆1 15M磷酸氢二钠溶液6 7ml 放置30min2000r min离心10min 取上清备用 37 加好混匀 立即在各管中加入一层 约8滴 液体石蜡油 置37度恒温水浴保温30分 观察各管颜色变化 分析原因 然后用力振摇1号管 观察变化记录并解释 2 酶促反应 38 实验一 温度 pH及酶的激活剂 抑制剂对酶活性的影响 一 目的 了解酶催化的特异性以及pH 温度 抑制剂和激活剂对酶活力的影响 二 实验原理 以唾液淀粉酶为例 观察温度 pH 激活剂和抑制剂对其活性的影响 唾液淀粉酶可水解淀粉生成糊精 麦芽糖 葡萄糖等物质 淀粉遇碘呈呈蓝色 糊精按分子从大到小的顺序 遇碘可呈蓝色 紫色 暗褐色和红色 最小的糊精和麦芽糖遇碘不呈现颜色反应 酶具有极高的催化效率 过氧化氢酶比铁粉的催化效率高出许多倍 39 三 操作步骤 一 温度对酶活性的影响 唾液淀粉酶的制备 取漱口水0 5Ml 稀释至50ml 以下简称酶液 1 取3支试管 编号后按下表操作 2 在比色板上 置碘液2滴于各孔中 每隔1分钟 从第二管中取出反应液1滴与碘混合 观察颜色变化 3 待第二管中反应液遇碘不发生颜色变化时 向各管中加入碘液1滴 摇匀 观察并记录各管颜色 做出解释 40 二 pH对酶活性的影响取试管5支 编号 按下表操作 摇匀 37 水浴中保温 每隔l分钟从pH6 8的管中 2号 取出1滴于白瓷板上 加碘液1滴 观察淀粉水解的程度 待颜色不变时 向各管中加碘液1 3滴 观察颜色 比较水解程度 做出解释 41 三 酶的激活剂 抑制剂对酶活性的影响 氯离子是唾液淀粉酶的激活剂 铜离子是抑制剂 取小试管3支 按表操作 将3支试管放入37 水浴中 在比色板上用碘液检查第2管 待不变色时向各管中加碘液1滴 记录颜色并解释 42 四 酶的高效性酶具有极高的催化效率 比普通催化剂活性高出很多倍 过氧化氢酶能催化过氧化氢分解为二氧化碳和水 铁粉也能催化此反应 但二者的催化效率有很大差距 取小试管4支 编号 按下表操作 43 恒温水浴锅 44 电磁炉水浴锅 45 电子天平 46 需冷藏 冷冻试剂和材料放在冰柜和冰箱 47 注意 生物材料及试剂在冰箱中 取完放回原处 请勿将固体物质扔进水槽 台面上有垃圾盆 水槽上有蒸馏水管 节约使用 用过器皿立即用水洗净 做完实验清理台面 将实验用具清洗后放入洗涤柜 48 实验报告 一 目的二 原理 必须写清楚 三 实验材料四 实验步骤五 结果与分析 标出正负极 说明从正极到负极的条带依次是 49 后面内容直接删除就行资料可以编辑修改使用资料可以编辑修改使用 50 主要经营 网络软件设计 图文设计制作 发布广告等公司秉着以优质的服务对待每一位客户 做到让客户满意 51 致力于数据挖掘 合同简历 论文写作 PPT设计 计划书 策划案 学习课件 各类模板等方方面面 打造全网一站式需求 52 感谢您的观看和下载 Theusercandemonstrateonaprojectororcomputer orprintthepresentationandmakeitintoafilmtobeusedinawiderfield 53 后面内容直接删除就行资料可以编辑修改使用资料可以编辑修改使用 54 主要经营 网络软件设计 图文设计制作 发布广告等公司秉着以优质的服务对待每一位客户 做到让客户满意 55 致力于数据挖掘 合同简历 论文写作 PPT设计 计划书 策划案 学习课件 各类模板等方方面面 打造全网一站式需求 56 感谢您的观看和下载 Theusercandemonstrateonaprojectororcomputer orprintthepresentationandmakeitintoafilmtobeusedinawiderfield 57