第六章电子稿 1 第六章芳酸类药物的分析 学习目标掌握水杨酸 苯甲酸类药物化学结构与分析方法间的关系 鉴别与含量测定的方法 特殊杂质的检验方法与杂质限量计算 两步滴定法和双相测定法的原理 熟悉紫外分光光度法 高效液相色谱法在芳酸类药物中的应用 了解其他芳酸类药物的分析 2 第六章芳酸类药物的分析 本章目录 概述第一节水杨酸类药物分析第二节苯甲酸类药物分析 3 第六章芳酸类药物的分析 羧基直接与芳香环相连的化合物称芳酸 芳酸及其酯类药物的结构特点是 结构中有羧基 酯键和苯环 有些药物有酚羟基 芳伯氨基 概述 4 第六章芳酸类药物的分析 第一节水杨酸类药物分析 水杨酸类药物 结构 理化性质 鉴别 检查 含量测定 5 第六章芳酸类药物分析 阿司匹林结构与理化性质的关系 6 第六章芳酸类药物分析 酸性 用于定性 定量反应 酚羟基 FeCl3呈色反应 苯环 紫外吸收 水杨酸 7 第六章芳酸类药物分析 芳酸碱金属盐 水溶性大 显弱碱性 酚羟基 有何性质 芳伯氨基 重氮化 偶合反应 苯环有何性质 对氨基水杨酸钠 8 第六章芳酸类药物分析 酯键 水解 可生成酚羟基和醋酸 酯键 水解 可生成酚羟基和羧基 酰胺键 水解 可生成芳伯氨基 苯环 苯环 贝诺酯 返回 9 第六章芳酸类药物分析 一 鉴别试验1 三氯化铁反应含酚羟基结构的药物在中性或弱酸性条件下 可与Fe3 反应 形成有色配位化合物 1 水杨酸 加三氯化铁试液1滴 即呈紫色 2 阿司匹林 煮沸水解后 放冷 加三氯化铁试液1滴 呈紫堇色 3 贝诺酯 加入氢氧化钠试液 煮沸 放冷 滤液调成微酸性 加三氯化铁试液2滴 呈紫堇色 10 第六章芳酸类药物分析 反应式如下 贝诺酯和阿司匹林需水解 生成水杨酸 才能发生该反应 紫堇色 11 第六章芳酸类药物分析 2 重氮化 偶合反应贝诺酯由阿司匹林和对乙酰氨基酚酯化而成 在酸性条件下加热水解 生成对氨基酚 呈芳香第一胺反应 供试品 稀盐酸 煮沸 放冷 滤过 滤液 猩红色 亚硝酸钠 碱性 萘酚 12 第六章芳酸类药物分析 13 第六章芳酸类药物分析 3 紫外吸收光谱法贝诺酯溶液 在240nm的波长处有最大吸收 按干燥品计算 吸收系数 为730 760 4 红外吸收光谱法水杨酸 阿司匹林 贝诺酯 对氨基水杨酸钠均采用红外吸收光谱法 供试品的红外光吸收图谱应与对照的图谱一致 对氨基水杨酸钠水溶液还可呈钠盐鉴别反应 14 第六章芳酸类药物分析 二 杂质检查 一 阿司匹林的杂质检查阿司匹林原料主要控制的特殊杂质有 溶液的澄清度 水杨酸 易炭化物 15 第六章芳酸类药物分析 1 溶液的澄清度本项目主要检查碳酸钠试液中不溶性杂质 这些杂质是未反应的酚类 或副反应产生的无游离羧基的醋酸苯酯 水杨酸苯酯和乙酰水杨酸苯酯等 阿司匹林有羧基 溶解于碳酸钠试液 醋酸苯酯 水杨酸苯酯 乙酰水杨酸苯酯 16 第六章芳酸类药物分析 2 游离水杨酸水杨酸可由合成过程中乙酰化不完全或阿司匹林在贮藏过程中水解产生 水杨酸对人体有毒 并有刺激性 其进一步氧化产物使药物变色 影响药物的质量 故应严格控制阿司匹林中的水杨酸 中国药典 2010 采用高效液相法测定 17 第六章芳酸类药物分析 实例分析 阿司匹林中游离水杨酸检查游离水杨酸照高效液相色谱法 附录 D 测定 色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂 以乙腈 四氢呋喃 冰醋酸 水 20 5 5 70 为流动相 检测波长为303nm 理论板数按水杨酸峰计算不低于5000 阿司匹林主峰与水杨酸主峰分离度应符合要求 供试品溶液的制备取本品约100mg 精密称定 置10ml量瓶中 加1 冰醋酸甲醇溶液适量 振摇使溶解 并稀释至刻度 摇匀 即得 临用前新配 对照品溶液的制备取水杨酸对照品约10mg 精密称定 置100ml量瓶中 加1 冰醋酸甲醇溶液适量使溶解 并稀释至刻度 摇匀 精密量取5ml 置50ml量瓶中 用1 冰醋酸甲醇溶液稀释至刻度 摇匀 即得 测定法立即精密量取供试品溶液 对照品溶液各10 l 分别注入液相色谱仪 记录色谱图 供试品溶液色谱图中如显水杨酸色谱峰 按外标法以峰面积计算供试品中水杨酸含量 含水杨酸不得过0 1 18 第六章芳酸类药物分析 原则上 制剂不必重复检查原料药项下检查的杂质 但在制剂制备或制剂贮存过程中 有可能再引入的杂质 应检查控制 阿司匹林片在制备或贮存过程中 因酯键易水解 而生成水杨酸 故阿司匹林片剂 栓剂均要检查水杨酸 19 第六章芳酸类药物分析 3 易炭化物本项目检查被硫酸碳化而呈色的低分子有机杂质 20 第六章芳酸类药物分析 4 有关物质照高效液相色谱法 附录 D 测定 色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂 以乙腈 四氢呋喃 冰醋酸 水 20 5 5 70 为流动相A 乙腈为流动相B 按下表进行线性梯度洗脱 检测波长为276nm 阿司匹林峰的保留时间约为8分钟 理论板数按阿司匹林峰计算不低于5000 阿司匹林峰与水杨酸峰分离度应符合要求 21 第六章芳酸类药物分析 测定法取本品约0 1g 精密称定 置10ml量瓶中 加1 冰醋酸甲醇溶液适量 振摇使溶解 并稀释至刻度 摇匀 即得供试品溶液 精密量取供试品溶液1ml 置200ml量瓶中 用1 冰醋酸甲醇溶液稀释至刻度 摇匀 即得对照溶液 精密量取对照溶液10ml 置100ml量瓶中 用1 冰醋酸甲醇溶液稀释至刻度 摇匀 即得灵敏度试验溶液 分别精密量取供试品溶液 对照溶液 灵敏度试验溶液及水杨酸检查项下的水杨酸对照品溶液各10 l 注入液相色谱仪 记录色谱图 供试品溶液色谱图中如显杂质峰 除小于灵敏度试验溶液中阿司匹林主峰面积的单个杂质峰 溶剂峰及水杨酸峰不计外 其余各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰峰面积 0 5 22 第六章芳酸类药物分析 二 对氨基水杨酸钠中间氨基酚的检查间氨基酚易被氧化 氧化产物导致药物变色 并且对人体有毒性作用 应严格控制其限量间氨基酚引入的途径有二 一是未反应完全的原料 二是对氨基水杨酸钠遇热或日光照射脱羧 23 第六章芳酸类药物分析 检查 有关物质避光操作 取本品适量 精密称定 加流动相溶解并稀释制成每1ml中含0 7mg的溶液 作为供试品溶液 精密量取供试品溶液1ml 置100ml量瓶中 加流动相溶解并稀释至刻度 摇匀 作为对照溶液A 另取间氨基酚对照品适量 精密称定 加流动相稀释制成每1ml中含1 2 g的溶液 作为对照品溶液B 照含量测定项下的色谱条件 检测波长为280nm测定 理论板数按对氨基水杨酸钠峰计算应不低于3000 对氨基水杨酸钠峰与杂质峰之间的分离度应符合要求 取对照溶液A20 l 注入液相色谱仪 调节检测灵敏度 使对氨基水杨酸钠色谱峰的峰高为满量程的20 25 另精密量取供试品溶液 对照溶液A与对照品溶液B各20 l 分别注入液相色谱仪 记录色谱图至主成分峰保留时间的3 5倍 供试品溶液的色谱图中如有与间氨基酚峰保留时间一致的峰 按外标法以峰面积计算 其含量不得过0 25 其他单个杂质峰面积不得大于对照溶液A主峰面积的1 10 0 1 其他各杂质峰面积的和不得大于对照溶液A主峰面积 1 0 24 第六章芳酸类药物分析 三 含量测定1 酸碱滴定法1 基本原理 阿司匹林结构中有羧基有酸性 Ka 10 5 可用氢氧化钠滴定液直接滴定 滴定生成的乙酰水杨酸钠偏碱性 故用酚酞为指示剂 25 第六章芳酸类药物分析 实例分析 阿司匹林原料的含量测定取本品约0 4g 精密称定 加中性乙醇 对酚酞指示液显中性 20ml溶解后 加酚酞指示液3滴 用氢氧化钠滴定液 0 1mol L 滴定 每1ml氢氧化钠滴定液 0 1mol L 相当于18 02mg的C9H8O4 阿司匹林的百分含量 式中V 氢氧化钠滴定液消耗的体积 ml T 滴定度 18 02mg F 滴定液浓度校正系数 W 供试品取样量 26 第六章芳酸类药物分析 注意事项 1 中性乙醇 阿司匹林在乙醇中溶解度大 不易水解 乙醇中有微量乙酸等物质 故应制成中性 对酚酞指示液显中性 2 为防止阿司匹林在滴定过程中水解 一要快速滴定 二要剧烈振摇 防止局部碱过浓 4 滴定终点后 因乙酰水杨酸钠逐渐水解 会使粉红色褪去 所以要注意判断终点 27 第六章芳酸类药物分析 2 高效液相色谱法阿司匹林片和阿司匹林肠溶片中除了加入少量酒石酸或枸橼酸稳定剂外 在制剂的过程中也会有水解产物水杨酸 醋酸产生 如果制剂含量测定采用直接酸碱滴定法 则所加枸橼酸或酒石酸以及水解产物水杨酸 醋酸就会消耗氢氧化钠滴定液 使测定结果偏高 所以不能采用直接酸碱滴定法 中国药典 2010 中阿司匹林的制剂 对氨基水杨酸钠原料和制剂 贝诺酯原料和制剂均采用高效液相法 以阿司匹林片剂含量分析为例介绍 28 第六章芳酸类药物分析 照高效液相色谱法 附录 D 测定 色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂 以乙腈 四氢呋喃 冰醋酸 水 20 5 5 70 为流动相 检测波长为276nm 理论板数按阿司匹林峰计算不低于3000 阿司匹林峰与水杨酸峰分离度应符合要求 测定法取本品20片 精密称定 充分研细 精密称取细粉适量 约相当于阿司匹林10mg 置100ml量瓶中 用1 冰醋酸的甲醇溶液强烈振摇使溶解 并用1 冰醋酸的甲醇溶液稀释至刻度 摇匀 用有机相滤膜 孔径 0 45 滤过 精密量取续滤液10 l 注入液相色谱仪 记录色谱图 另取阿司匹林对照品约20mg 精密称定 置200ml量瓶中 用1 冰醋酸的甲醇溶液强烈振摇使溶解 并用1 冰醋酸的甲醇稀释到刻度 摇匀 同法测定 按外标法以峰面积计算 即得 29 第六章芳酸及其酯类药物的分析 第二节苯甲酸类药物的分析 苯甲酸及其钠盐 结构 理化性质 鉴别 检查 含量测定 30 第六章芳酸药物的分析 2 羧基 4 苯环 3 芳酸 1 在乙醇 氯仿或乙醚中易溶 在水中微溶 在沸水中溶解 其钠盐在水中易溶 乙醇中略溶 2 酸性 用于定量 3 三氯化铁呈色反应 4 共轭双键 紫外吸收 1 溶解性 一 苯甲酸及其钠盐的结构 主要理化性质与分析方法 返回 31 第六章芳酸药物的分析 二 苯甲酸及其钠盐分析 一 鉴别试验1 三氯化铁反应在碱性溶液和苯甲酸钠在中性溶液 苯甲酸与三氯化铁试液生成沉淀 32 第六章芳酸药物的分析 2 分解产物的反应苯甲酸钠升华试验 苯甲酸钠固体 加硫酸 加热 可见白色苯甲酸凝结在试管内壁 此反应收载于中国药典 2005年版 附录 一般鉴别试验 中 3 红外光谱法供试品红外光吸收图谱与对照的图谱比较应一致 33 第六章芳酸药物的分析 二 含量测定1 苯甲酸直接酸碱滴定法基本原理 苯甲酸酸性较强 水中溶解度小 而其钠盐在水中溶解度大 故以中性稀乙醇为溶剂 可用氢氧化钠滴定液直接滴定 终点产物为苯甲酸钠 偏碱性 以酚酞为指示剂 34 第六章芳酸药物的分析 实例分析 苯甲酸的含量测定取苯甲酸约0 25g 精密称定 得0 2478g 加中性稀乙醇 对酚酞指示液显中性 25ml溶解后 加酚酞指示液3滴 用氢氧化钠滴定液 0 1033mol L 滴定 消耗滴定液19 72ml 每1ml氢氧化钠滴定液 0 1mol L 相当于12 21mg的C7H6O2 35 第六章芳酸药物的分析 分析 苯甲酸的百分含量 F 苯甲酸的百分含量 100 4 36 第六章芳酸药物的分析 2 苯甲酸钠的双相滴定法基本原理 苯甲酸钠易溶于水 苯甲酸易溶于乙醚 在乙醚和水组成双相体系中 用盐酸直接滴定水相的苯甲酸钠 生成的苯甲酸溶于乙醚 降低了水相的酸性 增大滴定突越 使滴定完全 终点易于判定 定量准确 37 第六章芳酸药物的分析 实例分析 苯甲酸钠的双相滴定法取苯甲酸钠约1 5g 精密称定得1 574g 置分液漏斗中 加水25ml 振摇使溶解 加乙醚50ml 甲基橙指示液2滴 用盐酸滴定液 0 5012mol L 滴定 随滴随振摇 至水层显橙红色 分取水层 置具塞锥形瓶中 乙醚层用水5ml洗涤 洗液并入锥形瓶中 加乙醚20ml 继续用盐