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红细胞血型系统及其检测,重庆医科大学临床血液教研室,血型的发现,1900年,ABO血型系统 1940年,Rh血型系统 Karl Landsteiner,血型(blood type),狭义地讲,存在于红细胞上的特异性同种抗原。 广义地讲,是人类遗传多态性的一种表现,血液中各种成分都有其各自型别。,红细胞血型(系统,抗原),是存在于红细胞上的化学结构,化学本质是糖和多肽,是红细胞膜上的跨膜蛋白。 存在于红细胞膜上(完全抗原),也存在于上皮细胞以及各种体液和分泌液中(半抗原)。,RBC,存在于体液、分泌液中,红细胞血型抗体,天然抗体、免疫抗体 规则抗体、不规则抗体 完全抗体,不完全抗体 同种抗体,自身抗体,天然抗体和免疫抗体,天然抗体:ABO血型系统中,A型个体血浆中天然存在抗B,B型个体血浆中存在抗A。多数天然抗体是IgM型,最佳反应温度为室温或更低。 免疫抗体:一般通过输血、妊娠、注射三种方式接受抗原刺激,多数免疫抗体是IgG型,最佳反应温度是37oC。,天然抗体和免疫抗体特性比较,规则抗体和不规则抗体,规则抗体:ABO系统产生抗、抗是有规律的。 Landsteiner规律: 型抗,型抗,型抗,抗 不规则抗体:除ABO 系统外,其他系统产生的抗体均不符合上述规律。 正常人血液中一般没有不规则抗体,又称为意外抗体(unexpected antibody)。,完全抗体和不完全抗体,完全抗体:在盐水介质中能凝集红细胞抗体,多为IgM抗体。 不完全抗体:能使红细胞致敏,但在盐水质中不能凝集红细胞,需要通过抗球蛋白法或其他非盐水介质法进行检测,多为IgG抗体。,抗IgG,同种抗体、自身抗体,同种抗体:针对患者缺乏的抗原所产生的抗体即为同种抗体,如Rh阴性者输血后产生的抗抗体。 自身抗体:针对自身抗原产生的抗体,如引起自身免疫型溶血性贫血。,红细胞血型,红细胞血型分类: ISBT(The International Society of Blood Transfusion) 2002年,29个系统,200多个抗原 目前,30个系统,300多个抗原,一、ABO血型系统 1. ABO血型抗原和抗体特性,2.ABO血型的遗传与生化,(1)ABO基因型与表型 A型AA,AO B型BB,BO AB型AB O型O A,B是显性基因,O是隐性基因 ABO基因不是产生ABO抗原的遗传密码,(2)ABO血型的生化合成,H基因 L-fucocyltransferase,19chr A基因 N-acetyl-0-galactosaminyltransferase,9chr B基因galactosyltransferase, 9chr O基因无效基因,不产生转移酶,O型红细胞含有H物质,基因,酶,合成抗原,思考:A、B、AB型红细胞是否存在H物质?,(3)ABH可溶性抗原形成,分泌型血型物质:ABH抗原存在于红细胞、内皮细胞、血小板、淋巴细胞、上皮细胞等,也可出现在除脑脊液外的分泌液中,唾液中最丰富。 Se,se基因与体液分泌有关,Se编码 L-fucocyltransferase,形成分泌液中的H抗原,H也可转化为A或B抗原,Se不影响红细胞上ABH形成,Se为分泌型;se为非分泌型;19chr。,分泌型血型物质的意义:,在RBC抗原弱表达个体中确定ABO血型。 检测唾液、羊水中的血型物质,辅助鉴定血型和预测胎儿血型。 能中和天然抗体(IgM),有助鉴别Ab性质。,3.ABO亚型:,亚型:同一血型抗原的结构、性能(质)或抗原位点数(量)存在一定差异。 A亚型:A1,A2,A3,Ax,Ay,Am B亚型:B1,B2,B3,Bx,Bm,二、Rh血型系统,1940年,Landerstein和Wiener用恒河猴(rhesus)RBC免疫家兔或豚鼠,得到一种抗体,可与85%白种人红细胞发生反应。 Rh系统有50个抗原,最复杂,重要性仅次于ABO血型。,1.遗传与发育规律,胎儿早期充分发育,脐带血/新生儿红细胞同成人。 基因位于1chr,分别命名为RHD,RHCE,RHD编码D抗原,RHCE编码不同组合的CE抗原,ce,cE,Ce,CE。,2.命名和种类,三种命名方式 Fisher-Race、数字命名法、现代命名法,Fisher-Race命名法(CDE命名法),3.Rh血型种类,D、E、C、e、c 抗原的强弱次序 DECce,5.Rh抗体,Rh抗体产生 天然抗体罕见 主要通过输血和妊娠免疫产生IgG 初次免疫后36月出现,再次免疫后3周达高峰 Rh抗体种类 抗D,抗E,抗C,抗c,抗e,ABO和Rh血型系统的临床意义,安全输血的主要保证 新生儿溶血病的诊断 器官移植的必要条件 其他:遗传学研究,法医学鉴定,四、ABO和Rh血型鉴定,常用方法: 盐水介质法、酶介质法、抗人球蛋白法、聚凝胺法 试管法、玻片法、微柱凝胶法,1.盐水介质法(salt medium test),原理:根据IgM类抗体与红细胞膜上特异性抗原能发生凝集反应。 正定型:已知血型抗体试剂 + 红细胞 反定型:已知标准红细胞 + 血清,鉴定红细胞上血型抗原,鉴定血清中抗体,反应条件:生理盐水介质,室温,肉眼可见凝集反应 平板法,试管法,微孔板法,试管离心法最可信赖。 应用:ABO血型定型、RhD抗原定型(IgG+IgM,IgM单克隆抗体),交叉合血,结果判断,注意事项(一):,标准血清:健康壮年人混合血清,培养细胞株的单克隆抗体 要求: 高效价:抗A、抗B1:128 高亲和性:15s内出现凝集,3min后凝集块 1mm2 单克隆抗体具有检出A2,A2B的能力 冷凝集素效价 1:4 无菌,病毒灭活,注意事项(二):,红细胞试剂:三个健康者同型新鲜红细胞混合,用生理盐水洗涤三次。 红细胞悬液不能过浓或过淡,5%生理盐水红细胞悬液,注意事项(三):,所有器材清洁干燥 一般先加血清,后加红细胞 反应温度:IgM抗体反应最适温度为40C,为防止冷凝集素干扰,采用室温,370C反应减弱 离心时间和速度:3000g,30s 反定型不宜用玻片法 结果核对,避免笔误 正、反定型结果一致才能报告,否则查找原因,正反定型不一致的可能原因(一):,操作技术上的错误:主要原因 离心过度或不足 细胞与血清反应比例不适当 阳性反应产生溶血现象而未能识别 漏加试剂、结果判读错误等,正反定型不一致的可能原因(二):,出现假阴性的常见原因: 某些白血病患者和难治性贫血等导致ABO抗原减弱; 免疫系统尚未健全的新生儿、4月6月内婴儿、抗体水平下降的老人; 亚型红细胞抗原性弱,难以检出; 低丙种球蛋白血症患者,血清定型时不凝集或弱凝集。,正反定型不一致的可能原因(三),出现假阳性的常见原因: 红细胞出现多凝集现象; 严重肠道革兰氏阴性杆菌感染,可使红细胞获得类B现象; 异常的血浆蛋白升高、白蛋白/球蛋白异常,高浓度纤维蛋白原造成假凝集现象; 待检血清中有不规则抗体存在; 右旋糖酐、静脉注射某些造影剂等引起红细胞 类似凝集。,方法学评价,简单,灵敏度低,只适合IgM抗体 试管法:需时短,离心增强凝集,可发现亚型和较弱的反应,正、反定型皆适合 玻片法:适合大规模血型普查,反应时间长,有时漏掉弱反应,反定型不适合。,2.酶介质法(enzymic medium test):,原理和方法:主要用于Rh血型鉴定(IgG抗体),蛋白水解酶,增强IgG抗体的凝集作用,注意事项:,Rh血型不需作反定型 每次实验均需作阳性、阴性对照,方法学评价,简单经济 稳定性、准确性较差,不能检出MN、Duffy血型系统,3.抗人球蛋白实验(Coombs test),原理和方法,抗IgG,待测红细胞 + 抗RhD(IgG) + 抗人球蛋白,红细胞凝集,应用延伸:,检测红细胞同种抗体的经典方法,新生儿溶血、病、溶血性输血反应、自身免疫性溶血性贫血 直接Coombs(direct antiglobulin test, DAT) 间接Coombs(indirect antiglobulin test, IDAT),DAT:检查红细胞是否致敏,IDAT:检测血清中不完全抗体,4.聚凝胺介质法(polybrene test),原理和方法 低离子强度盐溶液(low ionic strength salt solution, LISS):降低介质离子强度,增加抗原抗体结合 聚凝胺:中和红细胞表面负电荷,使红细胞发生非特异性凝集。 重悬液(resuspension),方法学评价,适于各类抗体(IgM,IgG) 快速、灵敏、可靠 对检测Kell血型系统抗体不理想,不能用肝素抗凝。,5.微柱凝胶法(gel cards with microtubes),1986年法国人Dr. Yves Lappierre发明 1994年,获美国FDA认证,原理和方法,葡聚糖做成微型凝胶柱,上端为反应室,下端凝胶柱为抗原抗体凝集反应的介质。 抗原与抗体结合后离心,经过凝胶分子筛作用,游离红细胞在凝胶底部,而与抗体结合凝集的红细胞位于凝胶上部或悬浮于凝胶中。,反应室,凝胶柱,结果判读:,阳性结果:红细胞凝集块位于凝胶表面或凝胶中,和(或)出现溶血。,注意事项:,专用水平离心机 假阳性:镰型红细胞、巨幼红细胞 白细胞过多 纤维蛋白原未完全去除 细菌污染,血浆蛋白异常 假阴性:抗原抗体比例不合适 不适用于直接Coombs阳性的红细胞标本、酶处理的红细胞标本,方法学评价,灵敏度和准确性高,实验结果重复性好,可长时间保存 自动化程度高,实验过程标准化,ISO9000/CE认证 成本高,应用延伸:用于ABO正反定型,交叉配血、其他血型抗原检测(CcEe)、不规则抗体检测、Coombs实验,凝胶柱,中性胶,抗人球蛋白胶,特异性胶,三、交叉配血(cross matching),定义,检测意义,是安全输血的重要步骤 进一步验证血型鉴定是否正确 发现ABO、Rh血型以外的其他抗体,常用方法及评价,结果判断(同型输血),主侧、次侧管均无凝集、无溶血,表示配血相容,献血者血液可以输注; 出现主侧、次侧试管或单独一侧试管内红细胞凝集和(或)溶血,则表明两血不相容,献血者血液不可输注 。,同型输注是输血的基本原则 紧急情况下,后面内容直接删除就行 资料可以编辑修改使用 资料可以编辑修改使用 资料仅供参考,实际情况实际分析,主要经营:课件设计,文档制作,网络软件设计、图文设计制作、发布广告等 秉着以优质的服务对待每一位客户,做到让客户满意! 致力于数据挖掘,合同简历、论文写作、PPT设计、计划书、策划案、学习课件、各类模板等方方面面,打造全网一站式需求,感谢您的观看和下载,The user can demonstrate on a projector or computer, or print the presentation and make it into a film to be used in a wider field,
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