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资源描述
血清CK及其同工酶测定 检验系生化,一、概述,肌酸激酶(Creatine kinase,CK,EC2.7.3.2)全称腺苷三磷酸:肌酸N-磷酸转移酶,催化肌酸(Cr)和ATP或磷酸肌酸(CrP)和ADP之间磷酸转移的可逆反应。 肌酸+ATP 磷酸肌酸+ADP+H+,CK,偏碱pH有利于顺向反应进行,中性pH倾向逆向反应,一般逆向反应较顺向反应快26倍; Mg2+是CK 的必需激活剂,但过量反而抑制; 样品宜用血清或肝素化血浆; 标本应避免严重溶血; 血清中CK较不稳定,室温4h或412h可使酶失活。,二、CK测定方法,比色法 紫外分光光度法 荧光法,2、酶偶联-丙酮酸测定法 肌酸+ATP 磷酸肌酸+ADP ADP+磷酸烯醇式丙酮酸 丙酮酸+ATP 丙酮酸+2,4-二硝基苯肼 丙酮酸-2,4-二硝 基苯腙,CK,丙酮酸激酶,顺向反应测定CK的底物较便宜; 测磷法的试剂较易得而稳定; 丙酮酸激酶价格较贵,不易获得; 顺向反应速度较慢,灵敏度较低。,利用逆向反应 CrP+ADP Cr+ATP Cr+双乙酰+-萘酚 红色化合物 Mg2+作激活剂; 半胱氨酸供给巯基; 氢氧化钡和硫酸锌沉淀蛋白并终止反应。,CK,逆向反应的速度较快,敏感性较高,成为目前国内推荐的主要方法。 必须用中性或偏碱的蛋白沉淀剂以防止底物CrP在酸性蛋白沉淀剂中非酶性水解成Cr。,紫外分光光度法,多利用逆向反应,是国际最常用方法 CrP+ADP Cr+ATP ATP+Glu ADP+6-P-Glu 6-P-Glu+NADP+ 6-P-GA+NADPH+H+,CK,己糖激酶,G-6-PD,全部反应最适pH为6.86.9; 主要干扰因素 谷光甘肽还原酶 腺苷酸激酶,荧光法,利用逆向反应生成的Cr在强碱性溶液中与茚三酮反应产生荧光复合物,测其荧光强度,经与同样处理的Cr标准管比较,可计算CK活力。 优点:快速、敏感,巯基化合物不产生干 扰,试剂易得,操作条件易于掌握。 缺点:需精密荧光分光光度计,不适宜基 层单位使用。,酶偶联-丙酮酸测定法步骤(顺向反应),计算:Au/As200U/L,三、血清CK同工酶测定,方法:琼脂糖凝胶电泳法。,
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