北京唯尚立德生物科技有限公司北京唯尚立德生物科技有限公司 www.vwww.v- - 010010- -62963369 62963369 ordervorderv- - Cas9 酶（酶（Cas9） 货号货号 规格规格 价格价格 #E025S 20U 800 元元 #E025L 100U 3200 元元 浓浓 度度 1U/ ul 储储 存存 -20 反应条件反应条件 37温育 应用应用 Cas9 /gRNA 特异位点体外剪切 DNA，如 plasmids、genomic DNA, PCR product 体外检测 gRNA 的剪切靶点 DNA 的效率 Cas9 蛋白结构与功能研究 用于体内注射 概述概述 CRISPR/Cas 是细菌和古细菌在长期演化过程中形成的一种适应性免疫防御，可特异剪切外源的病毒及 DNA 以对 抗入侵。 人工改造过的 Cas9/gRNA 系统通过 gRNA（short guide RNA）引导 Cas9 蛋白识别并剪切带有 gRNA 靶点的双链 DNA， 用于基因敲除和精确编辑 DNA 等操作。 重组表达的 Cas9 蛋白分别在 N 端和 C 端带有 NLS （入 核）序列。 来源来源 重组带有 NLS（入核）序列的 Cas9 蛋白 反应条件反应条件 1Buffer 20 mM HEPES，pH 7.5，150mM KCl，10 mM MgCl2，0.1 mM EDTA，0.5 mM DTT，37温育。 质保声明质保声明 Cas9 经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。请使用前务必仔细阅读本手册。 单位定义单位定义 在 50 l 反应体系中， 37， gRNA 足量时， 1U 等于 1h 能将 1 ug 质粒或线性 DNA 完全酶切所需的 Cas9 蛋白量。 注意事项注意事项 1. Cas9 切割 dsDNA 效率与 gRNA 靶点序列有关，每个 gRNA 的效率都会不同。 2. 所用枪头管子等都必须是 RNase free 的，gRNA 可以适当多加，防止因为部分降解而降低酶切效率。 Cas9 体外酶切法检测体外酶切法检测 gRNA 靶点效率实验步骤靶点效率实验步骤 1、 带有 gRNA 靶点的质粒或 PCR 扩增出的 DNA 片段，gRNA 靶点最好不位于 PCR 片段中央，这样将切割出两 条大小不同带便于判断。 2、 gRNA 靶点设计与体外转录准备见唯尚立德 Cas9/gRNA 质粒构建试剂盒。 3、 反应体系： dsDNA 200 nM gRNA（体外转录） 100 nM Cas9 0.5-1U 10XBuffer 2 ul ddH2O x ul Total 20ul 充分混合后， 37反应 1h， 65煮 5min, 跑琼 脂糖凝胶电泳检测分析酶切结果 琼脂糖凝胶电泳检测分析酶切结果。 图.Cas9 酶切靶点序列效率。 带有靶位点的 DNA 片段：680bp 酶切后条带：500bp+180bp 酶切率=切开条带/检测条带（按带的灰度计算） 北京唯尚立德生物科技有限公司北京唯尚立德生物科技有限公司 www.vwww.v- - 010010- -62963369 62963369 ordervorderv- - 使用限制使用限制 本试剂仅限用于科学研究。 储存与安全储存与安全 本品 4运输，储存于-20，有效期 12 个月。长期储存请置于-80。 本品采用蓝冰运输，蓝冰在使用前在-80冷冻至少 72 小时。实验证明，使用上述方法运输，即使到货时蓝冰已经融化，泡沫 塑料盒中的温度仍然能保持在 4或 4以下 24 小时。比较干冰运输的产品，其活性和稳定性无任何差异。产品纯化整个过程 都在 4进行，且其贮存液经过优化，对保持酶活的稳定性起到重要作用。产品中含有 50%甘油，可以使酶在-35下保持液态， 若使用干冰运输，酶将被冷冻，发生反复冻融可能会导致酶活性下降。