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血清中谷丙转氨酶的测定,实验五,(2,4-二硝基苯肼法),一、实验目的,掌握血清丙氨酸氨基转移酶活性测定的基本原理。了解血清丙氨酸氨基转移酶的测定方法及临床意义。,510nm,光吸收法测定,相对血清ALT活力,二、实验原理,丙氨酸氨基转移酶(ALT)催化丙氨酸与-酮戊二酸生成丙酮酸和谷氨酸。丙酮酸可与2,4-二硝基苯肼在酸性溶液中反应形成相应的2,4-二硝基苯腙,呈黄色,后者在碱性条件下呈红棕色。,三、实验器材,材料:人血清试剂:谷丙转氨酶测定试剂盒用具:分光光度计,微量移液枪,试管,试管架,恒温水浴锅,(1)取3支试管,按下表加入试剂:,四、实验步骤,冷却至室温后,510nm处比色,比色方法:以空白管调零,读取标准管及样品管光密度值。,(2)计算:依据朗伯-比尔定律:A=KLC标准管谷丙转氨酶活力:57U/L,样品管谷丙转氨酶活力(U/L),样品管光密度值标准管光密度值,57,参考值,谷丙转氨酶血清参考值:050U/L,正确使用比色器皿:手拿比色皿的毛面;比色液应占比色皿的2/3。每次测定时都需用试剂空白溶液调零,不能用蒸馏水代替微量移液枪的正确使用,注意事项,思考,1、血清谷丙转氨酶测定的临床意义?,
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