第十六章,抗生素类药物的分析,第一节 概述,一、抗生素的定义,抗生素是指在低微浓度下即可对某些生物的生命活动有特异抑制作用的化学物质的总称。 抗生素主要指细菌、放线菌和真菌等微生物的代谢产物，对各种病原微生物有强大的抑制或杀灭作用。,抗生素的来源,1. 生物合成（发酵）,2. 化学合成或半合成,特点：1. 化学纯度较低 2. 活性组分易发生变异 3. 稳定性差,二、抗生素的分类,1。据来源分 2。据作用对象分 3。据作用机制分 4。据化学结构分（下页）,抗生素的分类（按结构与性质）： 内酰胺类、氨基糖苷类、 四环素类、 大环内酯类、 氯霉素类、多肽类、抗肿瘤类 林可霉素类、其他抗生素类,三、抗生素药物的细菌耐药性,1。耐药性种类 2。耐药机制 （1）产生灭活酶 （2）抗菌药物作用靶位改变 （3）降低细菌外膜通透性 （4）影响主动流出系统,四、抗生素药物的质量分析,1.官能团的显色反应 如内酰胺环 的羟肟酸铁反应 2. 光谱法 红外光谱法紫外光普法 3. 色谱法 TLC HPLC法 4. 生物学法,鉴别,1. 影响产品稳定性的的检查项目 结晶性、 酸碱度、水分等 控制有机及无机杂质的检查项目 溶液澄 清度及颜色，有关物质，残留溶剂等 3. 与临床密切相关的检查项目 异常毒性、热源或细菌内毒素，降压物质等 4. 其他检查项目,检查,含量测定方法,（一）微生物学方法,测定抗生素抑菌或杀菌的能力,（二）化学及物理化学方法,以理化方法测定主药含量,抗生素活性表示方法（人为规定） 效价单位 即指每毫升或每毫克中含有某种抗生素的有效成分的多少。用u或g表示 例如 1mg青霉素钠为1670 u 1mg庆大霉素为590 u,第二节 内酰胺类抗生素,青霉素类,游离羧基 酰胺侧链 氢化噻唑环 内酰胺 母核：6-APA,头孢菌素类,游离羧基 酰胺侧链 氢化噻嗪环 内酰胺 母核:7-ACA,酸性与溶解度,结构与性质,一、,与碱金属(Na+、K+)成盐,（一）羧基,易溶于水,遇酸析出白色沉淀,与有机碱(普鲁卡因)成盐,难溶于水,普鲁卡因青霉素,（二）手性C,(5%头孢唑啉钠溶液 1824),头孢菌素类 C6 C7,青霉素类 C3 C5 C6,旋光性,（三）共轭体系,青霉素类 母核无明显UV 多数有苯环取代基,UV,（四）内酰胺环 不稳定性,水溶液 不稳定,干燥纯净 稳定,不稳定性因素,四元环张力大,酰胺键易水解,二、,鉴别,（二）呈色反应,1. 羟肟酸铁反应,-内酰胺类,NaOH,呈色,2.与重氮苯磺酸反应 头孢哌酮,（偶合）,酚羟基,3. 茚三酮反应,-氨基,-内酰胺环,酰胺,三,HPLC及TLC法,（四）色谱法,三 特殊杂质的检查,特殊杂质主要是高分子聚合物，有关物质，异构体，采用色谱法控制其限量。 高分子聚合物 采用分子排阻色谱法检查 有关物质，异构体采用HPLC法控制其限量,（水解）,可见-紫外分光光度法,（一）,稳定剂,JP,青霉素族,USP JP,红色,-内酰胺类,NaOH,ChP 头孢克洛,特点 快速、高效、灵敏 专属性强、重现性好 一法多用（鉴别、检查、含测）,第三节 氨基糖苷类抗生素,链霉素 双氢链霉素 新霉素 卡那霉素 庆大霉素 巴龙霉素,一、化学结构与性质,链霉胍 + 链霉糖 + N-甲基-L-葡萄糖胺,链霉胍,链霉糖,N-甲基-L- 葡萄糖胺,绛红糖胺 + 2-脱氧链霉胺 + 加洛糖胺,绛红糖胺,2-脱氧链霉胺,加洛糖胺,庆大霉素C复合物 庆大霉素C1 R=H R1、R2=CH3 庆大霉素C2 R=R2=H R1=CH3 庆大霉素C1a R、R1、R2=H 庆大霉素C2a R=CH3 R1= R2=H 庆大霉素C2b R=R1=H R2=CH3,（一）碱性与溶解性 多与硫酸成盐,溶解性：水溶性,链霉素 pH57.5 庆大霉素 pH212,链霉素在230nm 有吸收 庆大霉素、奈替米星 无吸收,过酸或过碱条件下易水解,羟基胺和a-氨基 酸的性质,硫酸小诺霉素5mg水1ml，0.1%茚三酮的水饱和正丁醇溶液1ml,吡啶0.5ml,水浴加热5min,显蓝紫色。,（二）Molisch试验 具有五碳糖或六碳糖结构的氨基糖苷类抗生素经酸水解后，在盐酸或硫酸作用下脱水，成糠醛（五碳）或羟甲基糠醛（六碳糖）。这些产物遇a-萘酚或蒽酮成色。,吡咯衍生物,红色缩合物,（Elson-Morgan反应）,（三） N-甲基葡萄糖胺反应,链霉糖特有反应,（四）麦芽酚（Maltol）反应,链霉胍特有反应,8-羟基喹啉, -萘酚,H+,庆大霉素无UV吸收,链霉素B（甘露糖链霉素）,方法 TLC中的对照品法 （Ch.P BP）,1. 来源 反应中间体,发酵菌种不同 工艺差别,规定控制各组分的相对百分含量,ChP USP BP JP,链霉素、庆大霉素,微生物检定法 本法系利用抗生素在琼脂培养 基内的扩散作用量反应平行线原理 的设计，比较标准品与供试品两者 对接种的试验菌产生抑菌圈的大小 ，以测定供试品效价的一种方法。,HPLC法,硫酸依替米星的含量测定,第四节 四环素类抗生素,A,B,C,D,四并苯或萘并萘衍生物,临床上常用其盐酸盐 具有吸湿性,具紫外吸收，且可以产生荧光 降解物也具有荧光,1.,差向异构化,蓝色荧光,（1）酸性下降解pH2 降解为脱水四环素,（2）碱性下降解,正相分配薄层 色谱,粘合剂中加有EDTA缓冲液 克服痕量金属造成的 拖尾现象, 4-差向四环素（ETC） 脱水四环素（ATC） 差向脱水四环素（EATC） 盐酸金霉素（CTC）,HPLC法,盐酸四环素,ChP、USP,HPLC法（外标法）,系统适用性试验 1. 防护柱 2. 有关物质的混合溶液 （ETC 、 EATC 、 TC、 CTC、 ATC）之间的分离度符合要求,