药物分析,主讲: 罗容珍,Pharmaceutical Analysis,第九章: 二氢吡啶类钙通道阻滞药物的分析,2020/8/2,前言,二氢吡啶类钙通道阻滞药物,钙通道?,是一种跨越细胞膜的结构，它严格控制着钙离子进入细胞的过程。,钙离子信号与很多重要生理功能相关，例如心脏收缩、基因转录等，因此调节钙离子进入细胞的精确反馈机制就至关重要。,2020/8/2,前言,二氢吡啶类钙通道阻滞药物,离子通道,2020/8/2,前言,二氢吡啶类钙通道阻滞药物,钙通道?,2020/8/2,前言,二氢吡啶类钙通道阻滞药物,能抑制跨膜钙内流及细胞内的钙释放，降低细胞内游离钙浓度及其利用率,2020/8/2,前言,二氢吡啶类钙通道阻滞药物,能抑制ATP酶的活性，降低心肌收缩力；使平滑肌细胞松弛，血管扩张，降低外周血管阻力,2020/8/2,前言,二氢吡啶类钙通道阻滞药物,又称钙拮抗剂,主要用于治疗高血压，心绞痛、心律失常、充血性心肌病及缺血性心脏病等。此外，还用于原发性肺动脉高压、缺血性脑卒中、肥厚性心肌病等,2020/8/2,前言,二氢吡啶类钙通道阻滞药物,根据化学结构的不同，钙拮抗剂可分为4类；二氢吡啶类；苯基烷胺类；苯并硫类；二苯基哌嗪类等。其中二氢吡啶类钙拮抗剂是上世纪60年代后期研究开发的一类新型药物。,2020/8/2,第一节:二氢吡啶类药物的结构与性质,本类药物均含有苯基-1,4-二氢吡啶的母核,1,4二氢吡啶环和NH基是必需基团，若二氢吡啶环氧化或还原，就会失去活性；,3,5位酯基为必要基团，酯基中烷氧基不同时活性增大；,4位为苯环取代，苯环邻位或间位有吸电子基团时活性增强；,2，6位多为低级烷基，至少一侧为低级烷基时有利于增加活性；,2020/8/2,第一节 二氢吡啶类药物的结构与性质,本类药物均含有苯基-1,4-二氢吡啶的母核,这种构像能增强与受体结合能力,X射线衍射表明，1,4二氢吡啶环为船式结构,苯环上的邻位或间位取代基使苯环同二氢吡啶环呈垂直状态，苯环上的取代基与4位H同侧，,2020/8/2,硝苯地平,一、结构特征,2020/8/2,尼群地平,2020/8/2,尼莫地平,2020/8/2,尼索地平,2020/8/2,苯磺酸氨氯地平,2020/8/2,非洛地平,2020/8/2,拉西地平,2020/8/2,伊拉地平,2020/8/2,尼伐地平,2020/8/2,盐酸尼卡地平,2020/8/2,二、主要理化性质,1、二氢吡啶环的还原性 氧化还原反应（铈量法）鉴别或氧化还原滴定法含量测定。 2、硝基氧化性 先将硝基还原为芳胺，在用重氮化-偶合反应鉴别。,2020/8/2,与碱作用时,1,4-位氢均可发生解离,形成p-共轭而发生颜色变化,利用该类反应可鉴别本类药物,遇光极不稳定,易发生光化学歧化反应,3、二氢吡啶环氨基质子解离性 4、稳定性 5、旋光性 6、吸收光谱特性,2020/8/2,第二节 鉴别试验,一、化学鉴别法 （一）与亚铁盐反应 二氢吡啶类药物苯环上硝基具有氧化性，可将氢氧化亚铁氧化成红棕色氢氧化铁沉淀。,2020/8/2,2020/8/2,2020/8/2,2020/8/2,2020/8/2,2020/8/2,2020/8/2,三,2020/8/2,2020/8/2,第三节 有关物质的检查,2020/8/2,2020/8/2,2020/8/2,2020/8/2,2020/8/2,第四节 含量测定,一、铈量法（氧化还原滴定法）,2020/8/2,2020/8/2,二、紫外-可见分光光度法,2020/8/2,三、高效液相色谱法,2020/8/2,2020/8/2,第五节 体内二氢吡啶类药物的分析,2020/8/2,2020/8/2,2020/8/2,2020/8/2,七、LC-MS/MS,2020/8/2,四极杆质量分析器由四根带有特定直流电压DC和射频电压RF的平行杆组成。相对的两组杆上分别加有电压(DC+RF)和-(DC+RF)， 四级杆上的电压变化时，通过质谱仪来过滤具有不同 m/z 值的离子。,2020/8/2,可使用概念模型来说明单四极杆质谱仪的理论,样品在外部电离源中离子化，生成的所有离子收集在漏斗中。不同颜色和大小的球代表具有不同 m/z 值的不同离子。,四极杆质量过滤器用移动带表示，通过移动带上不同大小的孔（代表不同的电压组合）过滤离子，离子从漏斗经过过滤器到达检测器。,当带（质量分析器）移动时，或杆上的电压变化时，通过质谱仪来 过滤具有不同 m/z 值的离子,2020/8/2,三重四极杆质谱仪的工作原理模型,在此示例中，使用第一级四极杆来选择前级离子，并将其发送到六级杆碰 撞反应池以进行碎裂。然后通过第三级四极杆来扫描碎片离子（产物离子）。,2020/8/2,具体机理就不深入讲解了,2020/8/2,总离子流色谱图： 在GC-MS或LC-MS等方法中使用的一种色谱图。质量分析器在可能出现的质荷比范围内以固定时间间隔重复地扫描，检测系统就可连续不断的得到变化着的质谱信号。计算机一边收集存储，一边将每次扫描的离子流求和，获得总离子流。总离子流随时间变化的图谱称为总离子流色谱图(TIC)。在TIC中，纵坐标表示收集存储离子的电流总强度，横坐标表示离子的生成时间或连续扫描的扫描次数。,2020/8/2,提取离子色谱图： EIC（Extracted Ion Chromatogram）即提取离子色谱图，就是从TIC中提取的某个离子的色谱图；SIM是一种扫描模式，single ion monitor or select ion monitor。,2020/8/2,质谱定量时,是以后面产生的碎片峰（子离子）定量,但是这一子离子是由母离子在碰撞室产生的特征性碎片，所以用MRM定量灵敏度会比用SIM定量好很多。 建立方法的步骤是：用一定溶度的标准品溶液（1-10 ug/mL）Tune化合物的一级质谱条件，找到母离子的最佳质谱条件，然后对母离子进行打碎，优化碰撞能量，得到其特征性的子离子。最后利用该质谱条件和该母离子-子离子对进行定量。,2020/8/2,（1）将样品由贮存器送入电离室。 （2）样品被高能量（70100ev）的电子流冲击。通常，首先被打掉一个电子形成分子离子（母离子），若干分子离子在电子流的冲击下，可进一步裂解成较小的子离子及中性碎片，其中正离子被安装在电离室的正电压装置排斥进入加速室。（只要正离子的寿命在105106s）。,2020/8/2,（3）加速室中有2000V的高压电场，正离子在高压电场的作用下得到加速，然后进入分离管。在加速室里，正离子所获得的动能应该等于加速电压和离子电荷的乘积（即电荷在电场中的位能）。 式（9.1）中z为离子电荷数, U为加速电压。显然，在一定的加速电压下，离子的运动速度与质量m有关。,（9.1）,2020/8/2,（4）分离管为一定半径的圆形管道，在分离管的四周存在均匀磁场。在磁场的作用下，离子的运动由直线运动变为匀速圆周运动。此时，圆周上任何一点的向心力和离心力相等。故： m2/R=H z （9.2） 其中，R为圆周半径，H为磁场强度。,2020/8/2,由式（9.1）和（9.2）可得： m / z = H2R2/2U (9.3) 式（9.3）称为磁分析器质谱方程，是设计质谱仪的主要依据。式中R为一定值（因仪器条件限制），如再固定加速电压U，则m/z仅与外加磁场强度H有关。实际工作中通过调节磁场强度H，使其由小到大逐渐变化，则m/z不同的正离子也依次由小到大通过分离管进入离子检测器，产生的信号经放大后，被记录下来得到质谱图。,2020/8/2,