Cell Counting Kit-8Cell Counting Kit-8 产品编号 产品名称 包装 C0038 Cell Counting Kit-8 (CCK-8试剂盒) 500次 产品简介：产品简介： Cell Counting Kit-8简称CCK-8试剂盒，是一种基于WST-8的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。 WST-8是一种类似于MTT的化合物，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的 formazan (参考图1)。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅和细 胞数目呈线性关系。 图1. WST-8检测原理图 (EC=electron coupling reagent，即电子耦合试剂) WST-8是MTT的一种升级替代产品，和MTT或其它MTT类似产品如XTT、MTS等相比有明显的优点。首先，MTT被线粒 体内的一些脱氢酶还原生成的formazan不是水溶性的，需要有特定的溶解液来溶解；而WST-8和XTT、MTS产生的 formazan都是水溶性的，可以省去后续的溶解步骤。其次，WST-8产生的formazan比XTT和MTS产生的formazan更易溶 解。再次，WST-8比XTT和MTS更加稳定，使实验结果更加稳定。另外，WST-8和MTT、XTT等相比线性范围更宽，灵 敏度更高。 WST-8和WST-1相比，检测灵敏度更高，更易溶解，并且更加稳定。 本试剂盒可以用于细胞因子等诱导的细胞增殖检测，也可以用于抗癌药物等对细胞有毒试剂诱导的细胞毒性检测，或一 些药物诱导的细胞生长抑制检测。 本试剂盒检测非常便捷。试剂盒仅一管已经配制好的含有WST-8的CCK-8溶液，无须再进行任何配制等操作。无须使用同 位素，所有的检测步骤仅在同一块96孔板内完成。不必洗涤细胞，不必收集细胞，也不必采用额外的步骤去溶解 formazan。可以用于大批量样品的检测。 酚红和血清对本试剂盒的测定无明显影响。 WST-8对细胞无明显毒性。加入WST-8显色后，可以在不同时间反复用酶标仪读板，使检测时间更加灵活，便于找到最佳 测定时间。 关于不同细胞增殖和细胞毒性检测试剂盒的比较和选择，请参考 本试剂盒可以测定500个样品。 包装清单： 包装清单： 产品编号 产品名称 包装 C0038 CCK-8溶液 5ml 说明书 1份 保存条件：保存条件： 4避光保存一年有效，-20避光保存两年有效。 注意事项： 注意事项： 由于使用96孔板进行检测，如果细胞培养时间较长，一定要注意蒸发的问题。一方面，由于96孔板周围一圈最容易蒸 发，可以采取弃用周围一圈的办法，改加PBS，水或培养液；另一方面，可以把96孔板置于靠近培养箱内水源的地方， 以缓解蒸发。 本试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化的反应，如果待检测体系中存在较多的还原剂，例如一些抗氧化剂会干扰检测，需设 法去除。 用酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡，否则会干扰测定。 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 使用说明： 使用说明： 1. 通常细胞增殖实验每孔加入100微升微升2000个细胞个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升微升5000个细胞个细胞(具体每孔所用的细胞的数 目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等因素决定)。按照实验需要，进行培养并给予0-10微升特定的药物刺激。 2. 每孔加入10微升微升CCK-8溶液溶液。如果起始的培养体积为200微升，则需加入20微升CCK-8溶液，其它情况以此类推。可以用 加了相应量细胞培养液和CCK-8溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。如果担心所使用的药物会干扰检测，需设置加 了相应量细胞培养液、药物和CCK-8溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。 3. 在细胞培养箱内继续孵育0.5-4小时小时，对于大多数情况孵育1小时就可以了。时间的长短根据细胞的类型和细胞的密度等实 验情况而定，初次实验时可以在0.5、1、2和4小时后分别用酶标仪检测，然后选取吸光度范围比较适宜的一个时间点用于 后续实验。 4. 在450nm测定吸光度。如无450nm滤光片，可以使用420-480nm的滤光片。可以使用大于600nm的波长，例如650nm，作为 参考波长进行双波长测定。 使用本产品的文献使用本产品的文献： 1. Hou G, Xue L, Lu Z, Fan T, Tian F, Xue Y. An activated mTOR/p70S6K signaling pathway in esophageal squamous cell carcinoma cell lines and inhibition of the pathway by rapamycin and siRNA against mTOR. Cancer Lett. 2007 Aug 18;253(2):236-48. 2. Ye CL, Jin YL, Zhou GX, Qin L. Effects of EGb761 on the antioxygen and cell apoptosis induced by H2O2 in RIN2m beta cells. Jou rna l of J inan U niversity(M edicine Edition). Aug.2007;V ol.28 No.4. 3. Zhu HL, Shen W, Chen ZY. Apoptosis of hepa tic stella te cells induced by sulfa salazine. Acta academiae medicnae mlitaris tertiae. Jan.2008;Vol.30,No.1. 4. Yang M, Zhou H. Grass carp transforming growth factor-beta 1 (TGF-beta 1): molecular cloning, tissue distribution and immunobiological activity in teleost peripheral blood lymphocytes. Mol Immunol. 2008 Mar;45(6):1792-8. 5. Zhou JR, Xu Z, Jiang CL. Neuropeptide Y promotes TGF-beta1 production in RAW264.7 cells by activating PI3K pathway via Y1 receptor. Neurosci Bull. 2008 Jun;24(3):155-9. 6. Li XT, Zhang Y, Chen GQ. Nanofibrous polyhydroxyalkanoate matrices as cell growth supporting materials. Biomaterials. 2008 Sep;29(27):3720-8. 7. Cheng ST, Chen ZF, Chen GQ. The expression of cross-linked elastin by rabbit blood vessel smooth muscle cells cultured in polyhydroxyalkanoate scaffolds. Biomaterials. 2008 Nov;29(31):4187-94. 8. Lu J, Yue BH, Wang CM, Bai ST, Sheng GY. Efficacy of RNAi-induced down-regulation of wild-type FLT3 on NF-kB pathway in THP-1 cell line. Life Science Journal. Vol.5,No.2,2008. 9. Pan J, Li G, Chen Z, Chen X, Zhu W, Xu K. Alternative block polyurethanes based on poly(3-hydroxybutyrate-co-4-hydroxybutyrate) and poly(ethylene glycol). Biomaterials. 2009 Jun;30(16):2975-84. 10. Dai ZW, Zou XH, Chen GQ. Poly(3-hydroxybutyrate-co-3-hydroxyhexanoate) as an injectable implant system for prevention of post-surgical tissue adhesion. Biomaterials. 2009 Jun;30(17):3075-83. 11. Su X, Zheng X, Ni J. Lanthanum citrate induces anoikis of Hela cells. Cancer Lett. 2009 Nov 28;285(2):200-9. Epub 2009 Aug 12. 12. Li N, Li Q, Qian Z, Zhang Y, Chen M, Shi G. Impaired TLR3/IFN-beta signaling in monocyte-derived dendritic cells from patients with acute-on-chronic hepatitis B liver failure: relevance to the severity of liver damage. Biochem Biophys Res Commun. 2009 Dec 18;390(3):630-5. 13. Wang H, Ji J, Zhang W, Wang W, Zhang Y, Wu Z, Zhang Y, Chu PK. Rat calvaria osteoblast behavior and antibacterial properties of O(2) and N(2) plasma-implanted biodegradable poly(butylene succinate). Acta Biomater. 2010 Jan;6(1):154-9. 14. Wang H, Kwok DT, Wang W, Wu Z, Tong L, Zhang Y, Chu PK. Osteoblast behavior on polytetrafluoroethylene modified by long pulse, high frequency oxygen plasma immersion ion implantation. Biomaterials. 2010 Jan;31(3):413-9. 15. Zhang HY, Sun H. Up-regulation of Foxp3 inhibits cell proliferation, migration and invasion in epithelial ovarian cancer. Cancer Lett. 2010 Jan 1;287(1):91-7. 16. Chen S, Chen Y, Hu C, Jing H, Cao Y, Liu X. Association of clinicopathological features with UbcH