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,补:原核细胞的基因结构,1.2 基因工程的基本操作程序,补:原核细胞的基因结构,1.2 基因工程的基本操作程序,IMN,补:原核细胞的基因结构,1.2 基因工程的基本操作程序,IMN,补:原核细胞的基因结构,1.2 基因工程的基本操作程序,IMN,编码区,补:原核细胞的基因结构,1.2 基因工程的基本操作程序,IMN,非编码区,编码区,补:原核细胞的基因结构,1.2 基因工程的基本操作程序,IMN,非编码区,非编码区,编码区,补:原核细胞的基因结构,1.2 基因工程的基本操作程序,IMN,非编码区,非编码区,编码区,编码区上游,补:原核细胞的基因结构,1.2 基因工程的基本操作程序,IMN,非编码区,非编码区,编码区,编码区上游,编码区下游,补:原核细胞的基因结构,1.2 基因工程的基本操作程序,IMN,非编码区,非编码区,编码区,编码区上游,编码区下游,补:原核细胞的基因结构,1.2 基因工程的基本操作程序,IMN,非编码区,非编码区,编码区,编码区上游,编码区下游,启动子,补:原核细胞的基因结构,1.2 基因工程的基本操作程序,IMN,非编码区,非编码区,编码区,编码区上游,编码区下游,与RNA聚酶结合位点,启动子,补:原核细胞的基因结构,1.2 基因工程的基本操作程序,IMN,非编码区,非编码区,编码区,编码区上游,编码区下游,与RNA聚酶结合位点,启动子,终止子,补:原核细胞的基因结构,1.2 基因工程的基本操作程序,IMN,非编码区,非编码区,编码区,编码区上游,编码区下游,与RNA聚酶结合位点,启动子,终止子,编码区,非编码区,补:原核细胞的基因结构,1.2 基因工程的基本操作程序,IMN,非编码区,非编码区,编码区,编码区上游,编码区下游,与RNA聚酶结合位点,启动子,终止子,编码区,非编码区,编码蛋白质 ,连续不间断,补:原核细胞的基因结构,1.2 基因工程的基本操作程序,IMN,非编码区,非编码区,编码区,编码区上游,编码区下游,与RNA聚酶结合位点,启动子,终止子,编码区,非编码区,编码蛋白质 ,连续不间断,不编码蛋白质,有调控作用,补:真核细胞的基因结构,1.2 基因工程的基本操作程序,IMN,补:真核细胞的基因结构,1.2 基因工程的基本操作程序,非编码区,非编码区,IMN,补:真核细胞的基因结构,1.2 基因工程的基本操作程序,编码区,非编码区,非编码区,IMN,补:真核细胞的基因结构,1.2 基因工程的基本操作程序,编码区,非编码区,非编码区,编码区上游,与RNA聚合酶 结合位点,IMN,补:真核细胞的基因结构,1.2 基因工程的基本操作程序,编码区,非编码区,非编码区,启动子,编码区上游,与RNA聚合酶 结合位点,IMN,补:真核细胞的基因结构,1.2 基因工程的基本操作程序,编码区,非编码区,非编码区,启动子,终止子,编码区上游,编码区下游,与RNA聚合酶 结合位点,IMN,补:真核细胞的基因结构,1.2 基因工程的基本操作程序,编码区,非编码区,非编码区,启动子,终止子,编码区上游,编码区下游,外显子,与RNA聚合酶 结合位点,IMN,补:真核细胞的基因结构,1.2 基因工程的基本操作程序,编码区,非编码区,非编码区,启动子,终止子,编码区上游,编码区下游,外显子,内含子,与RNA聚合酶 结合位点,IMN,补:真核细胞的基因结构,1.2 基因工程的基本操作程序,编码区,非编码区,编码区,非编码区,非编码区,启动子,终止子,编码区上游,编码区下游,外显子,内含子,与RNA聚合酶 结合位点,IMN,补:真核细胞的基因结构,1.2 基因工程的基本操作程序,编码区,非编码区,外显子:能编码蛋白质的序列 内含子:不能编码蛋白质的序列,编码区,非编码区,非编码区,启动子,终止子,编码区上游,编码区下游,外显子,内含子,与RNA聚合酶 结合位点,IMN,补:真核细胞的基因结构,1.2 基因工程的基本操作程序,编码区,非编码区,外显子:能编码蛋白质的序列 内含子:不能编码蛋白质的序列,不编码蛋白质,有调控作用,编码区,非编码区,非编码区,启动子,终止子,编码区上游,编码区下游,外显子,内含子,与RNA聚合酶 结合位点,IMN,1.2 基因工程的基本操作程序,一 目的基因的获取,1.2 基因工程的基本操作程序,IMN,一 目的基因的获取,1.2 基因工程的基本操作程序,IMN,(一)目的基因:,一 目的基因的获取,1.2 基因工程的基本操作程序,IMN,(一)目的基因:,主要指的是编码蛋白质的结构基因;,一 目的基因的获取,1.2 基因工程的基本操作程序,IMN,(一)目的基因:,主要指的是编码蛋白质的结构基因;,也可以是一些具有调控作用的因子。,一 目的基因的获取,1.2 基因工程的基本操作程序,IMN,(一)目的基因:,主要指的是编码蛋白质的结构基因;,也可以是一些具有调控作用的因子。,(二)获取目的基因的常用方法,一 目的基因的获取,1.2 基因工程的基本操作程序,IMN,(一)目的基因:,主要指的是编码蛋白质的结构基因;,也可以是一些具有调控作用的因子。,(二)获取目的基因的常用方法,从自然界已有的物种中分离,用人工的方法合成,一 目的基因的获取,IMN,1. 从基因文库中获取目的基因,一 目的基因的获取,IMN,1. 从基因文库中获取目的基因,(1)基因文库的概念,一 目的基因的获取,IMN,1. 从基因文库中获取目的基因,(1)基因文库的概念,一 目的基因的获取,IMN,1. 从基因文库中获取目的基因,(1)基因文库的概念,将含有某种生物不同基因的许多DNA片段,导入 受体菌的群体中储存,各个受体菌分别含有这种 生物的不同的基因,称为基因文库。,一 目的基因的获取,IMN,1. 从基因文库中获取目的基因,(1)基因文库的概念,将含有某种生物不同基因的许多DNA片段,导入 受体菌的群体中储存,各个受体菌分别含有这种 生物的不同的基因,称为基因文库。,(2)基因组文库和部分基因文库,一 目的基因的获取,IMN,一 目的基因的获取,IMN,1. 从基因文库中获取目的基因,(2)基因组文库和部分基因文库,包含了一种生物所有的基因的基因文库叫做基 因组文库。,一 目的基因的获取,IMN,1. 从基因文库中获取目的基因,(2)基因组文库和部分基因文库,包含了一种生物所有的基因的基因文库叫做基 因组文库。 包含了一种生物的一部分基因的基因文库叫做 部分基因文库。,IMN,(3)基因文库的构建,IMN,(3)基因文库的构建,直接分离法,IMN,(3)基因文库的构建,直接分离法,IMN,(3)基因文库的构建,直接分离法,基因组文库的构建,IMN,(3)基因文库的构建,反转录法:,IMN,(3)基因文库的构建,反转录法:,IMN,(3)基因文库的构建,反转录法:,mRNA,cDNA (互补DNA),双链DNA,反转录,DNA聚合酶,IMN,(3)基因文库的构建,反转录法:,mRNA,cDNA (互补DNA),双链DNA,cDNA文库的构建,反转录,DNA聚合酶,IMN,基因组DNA文库与cDNA文库的比较,一 目的基因的获取,IMN,1. 从基因文库中获取目的基因,(2)如何从基因文库中得到所需要的基因,一 目的基因的获取,IMN,1. 从基因文库中获取目的基因,(2)如何从基因文库中得到所需要的基因,依据:目的基因的有关信息。,一 目的基因的获取,IMN,1. 从基因文库中获取目的基因,(2)如何从基因文库中得到所需要的基因,依据:目的基因的有关信息。,如:根据基因的核苷酸序列 基因的功能 基因在染色体上的位置 基因的转录产物mRNA 基因翻译产物蛋白质等特性。,一 目的基因的获取,IMN,1. 从基因文库中获取目的基因,2. 利用PCR技术扩增目的基因,一 目的基因的获取,IMN,1. 从基因文库中获取目的基因,(1) PCR聚合酶链式反应,2. 利用PCR技术扩增目的基因,一 目的基因的获取,IMN,1. 从基因文库中获取目的基因,(1) PCR聚合酶链式反应,是一项生物体外复制特定DNA片段的核酸合成 技术。通过此技术,可在短时间内获取大量的 目的基因。,2. 利用PCR技术扩增目的基因,一 目的基因的获取,IMN,1. 从基因文库中获取目的基因,(1)PCR聚合酶链式反应,2. 利用PCR技术扩增目的基因,(2)原理:,一 目的基因的获取,IMN,1. 从基因文库中获取目的基因,(1)PCR聚合酶链式反应,2. 利用PCR技术扩增目的基因,(2)原理:,DNA双链复制,一 目的基因的获取,IMN,1. 从基因文库中获取目的基因,(1)PCR聚合酶链式反应,2. 利用PCR技术扩增目的基因,(2)原理:,DNA双链复制,(3)前提:,一 目的基因的获取,IMN,1. 从基因文库中获取目的基因,(1)PCR聚合酶链式反应,2. 利用PCR技术扩增目的基因,(2)原理:,DNA双链复制,(3)前提:,一段已知目的基因的核苷酸序列,一 目的基因的获取,IMN,1. 从基因文库中获取目的基因,(1)PCR聚合酶链式反应,2. 利用PCR技术扩增目的基因,(2)原理:,DNA双链复制,(3)前提:,一段已知目的基因的核苷酸序列,(4)条件:,一 目的基因的获取,IMN,1. 从基因文库中获取目的基因,(1)PCR聚合酶链式反应,模板DNA;DNA引物(做启动子); 四种脱氧核苷酸;DNA聚合酶等。,2. 利用PCR技术扩增目的基因,(2)原理:,DNA双链复制,(3)前提:,一段已知目的基因的核苷酸序列,(4)条件:,IMN,利用PCR技术扩增,IMN,(5) 过程:,变性、退火、延伸三步曲,IMN,(5) 过程:,变性、退火、延伸三步曲,IMN,(5) 过程:,变性、退火、延伸三步曲,变性,IMN,(5) 过程:,变性、退火、延伸三步曲,变性,退火,IMN,(5) 过程:,变性、退火、延伸三步曲,变性,退火,延伸,IMN,(6)方式:,以_方式扩增, 即_(n为扩增循环的次数),IMN,(6)方式:,以_方式扩增, 即_(n为扩增循环的次数),指数,IMN,(6)方式:,以_方式扩增, 即_(n为扩增循环的次数),指数,2n,IMN,(6)方式:,PCR扩增仪,以_方式扩增, 即_(n为扩增循环的次数),指数,2n,一 目的基因的获取,IMN,1. 从基因文库中获取目的基因,2. 利用PCR技术扩增目的基因,3. 通过DNA合成仪用化学的方法直接人工合成,Thanks!,
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