4%多聚甲醛配置：（4%是指4g多聚甲醛固体溶于00mL PBS中）1. 先配好PBS2. 称取4g多聚甲醛固体3. 将多聚甲醛放入PBS中水浴锅65加热3h注意：1.先配现用，多聚甲醛容易挥发。上午使用，前一天下午配置；下午使用，当天上午配置。2.多聚甲醛有毒，使用时要在通风橱中进行并配戴口罩40g多聚甲醛固体1L PBS120g多聚甲醛固体3L PBS药品用量PBS1LNaCl8gKCl0.2gNa2HPO4 12H2O2.88gKH2PO40.2g加三次水，1L定容取50只小鼠，1只小鼠注射20mL 4%的多聚甲醛溶液，共需1000mL，故要配置 1、5L的4%的多聚甲醛溶液从组织中提取总蛋白组织匀浆8mL裂解液8mL RIPA+80L PMSF（100）+190.5Lcocktail（100）1mL RIPA+10L PMSF（100）+23.8Lcocktail（100）1. 裂解：取少量组织+600L裂解液匀浆4振荡裂解45min4离心12000r/min，离心15min2. 稀释：取3L上清+27L无菌水BCA试剂盒 以A液：B液=50：1的比例混合样品25L+混合液200L（设置三组平行对照）温敷：37下温敷30min570nm下检测OD1.0左右测蛋白浓度，计算50g/70g对应体积和buffer体积5buffer，最大上样量4=buffer体积3. 变性：100煮沸10min，-80保存组织总RNA提取取小鼠肝组织50100mg,加人1mL TrizolTM试剂,置于碾钵中快速研磨,样品体积不超过TrizolTM的10%。匀浆后的样本于室温孵育5min(使核蛋白复合物完全融解),再加人0.2mL氯仿,盖好样本管盖,用手剧烈振荡15s后室温静置3min；4下,12000r/min离心15min(离心后混合物分为下层红色的酚、氯仿相,中间相和无色的上层水相。RNA分布于上层水相,水相占总体积60%。取上清液转人另一样品管,并加人0.5mL异丙醇,混匀后室温放置10min；4下,12000r/min离心10min。弃上清液,并用焦碳酸二乙酯(DEPC)处理过的双蒸水(ddH20)配置的75%乙醇1mL洗涤沉淀物,振摇后沉淀。然后在4下,7500r/min离心5min。真空干燥510min或吸尽乙醇开盖挥发,弃上清液，敞开关口,凉干沉淀;最后溶沉淀于50uL RNase-free ddH2O中。-70保存。