单克隆抗体的产生过程,从用抗原X免疫的小鼠体内分离脾细胞,抗原X,混合的脾细胞，包括一些产生anti-X抗体的脾细胞,融合,突变的骨髓瘤细胞系；不能生长在HAT选择性培养基；不产生抗体,未融合细胞和融合细胞的混合,在HAT培养集中体外选择,仅仅融合的细胞（杂交瘤细胞）能够生长,分离衍生自单个细胞的克隆,筛选上清来鉴定出每个含anti-X抗体的克隆，并扩增阳性克隆,产生单克隆抗体的杂交瘤细胞,小鼠单克隆抗体产生过程（详见于善谦免疫学导论p.144）,用某一特定抗原（例如抗原X）免疫小鼠。 取出免疫小鼠的脾脏，分离脾细胞，这样的脾细胞群中已含有能产生anti-X抗体的脾细胞。 将分离的脾细胞群与突变的骨髓瘤细胞融合，并在HAT培养基中筛选，仅仅融合的细胞才能在HAT培养基上生长。 分离并筛选阳性克隆 将筛选的阳性克隆扩增培养，以得到能产生单克隆抗体的杂交瘤细胞，并将这些细胞进一步扩增以制备大量单克隆抗体。,第三节 免疫系统,第六章补体系统The complement system,补体的发现与功能 补体的组成 补体的活化 补体系统的调节 补体的功能与生物学意义 补体缺陷,本章主要内容,补体的发现:1890年J. Bordet(博尔代),1890年，体液免疫系统的重要一年：抗体发现，补体发现 溶菌现象：37 新鲜免疫血清+相应细菌细菌溶解 加热处理的血清+相应细菌细菌不溶解 加热处理的血清+不含直接对抗细菌的抗体的新鲜免疫血清+相应细菌细菌溶解 新鲜免疫血清包含热稳定的组分（抗体），对热不稳定的组分（杀菌素，alexine) Paul Ehrlich,命名这类物质为补体（completes）,即完善抗体作用的血清活性 后来的发现显示，补体为一大类复杂蛋白系统组成的系统，它们的功能也远非仅是最初观察到的抗体介导的细胞裂解。,补体系统的功能可能被抗体启动也可能被天然免疫成分启动,在血液或体液内除Ig分子外，另一类参予免疫效应的大分子。 在天然和适应性免疫中都其关键作用。 主要作用：对病原的识别与破坏。 这种主要作用是基于对病原相关分子模式（PAMPs）的识别，而非基于抗体的特异性。 补体级联的活化可能被一些正常血清中的蛋白所起始。这类蛋白称为急性期蛋白（actue phase poteins）,它们拥有模式识别能力，并在炎性反应期间无浓度改变。,补体系统的功能,裂解,调理,活化,清除,补体的组成,化学本质：可溶蛋白和糖蛋白 主要合成于肝细胞，另外血液单核细胞、组织巨噬细胞和胃肠道及泌尿生殖道上皮细胞也能产生 占血清球蛋白的5-10% 大多数在血清中以失活的酶原形式存在 命名原则 1）通常编号命名（如C1-C9），按照发现顺序； 2）当分解成新片段，通常小片段加a，大片段加b，如C3分解为C3a(小)和C3b（大），但C2是一个例外，恰好相反 3）当不同片段合成新的复合物，则将各组分数字代号及小写英文字母写在C后，如C4b和C2a形成C4b2a；当这一复合物有酶活性时，则在小写英文字母和数字上加一横线，如,补体成分的功能特性,补体活化,活化的前期阶段： 经典途径(Classical pathway) 凝集素途径(Lectin pathway) 旁路途径 (Alternative pathway) 活化的后期阶段 补体的溶膜途径形成溶膜复合体（membrane-attack complex,MAC ）,补体活化的通路,参与补体系统的蛋白成分,起始者,转化酶活化剂和酶介质,调理素,过敏毒素,溶膜复合体,补体受体,调控蛋白,经典途径起始于抗原抗体的结合,经典途径的活化通常源于可溶性的抗原-抗体复合物的形成，或者在合适的靶标（如：细菌）上发生的抗原-抗体的结合。 激活经典途径的抗体类别有IgM和IgG亚类（IgG1,IgG2，IgG3)。,C1是经典途径活化的识别单位,经典活化途径：1）C1,经典活化途径：2）C4和C2,经典活化途径：3）C3,经典活化途径：4）C5,经典活化途径：5）C6和MAC,旁路活化途径不依赖于抗体,旁路活化途径不必有抗体的参与，但抗体对旁路途径的活化有重要作用。 旁路活化途径从C3开始，有B、D、H、I及P诸因子的参与，不需要经典途径中的C1，C2，C4的参与。 旁路途径的活化需要有Ca2+的参与,旁路途径的活化物质,旁路活化途径,补体活化的凝集素途径起始于结合在微生物表面的宿主蛋白,三条途径汇合于MAC的形成,MAC,区分微生物和自身 被动调控机制：所有通路包含了高度易变的组分，这些组分如果不与别的组分反应而变得稳定，就会经历自发的失活 一系列的调控蛋白：失活不同的组分,补体系统的调控,区分微生物和自身 被动调控机制：所有通路包含了高度易变的组分，这些组分如果不与别的组分反应而变得稳定，就会经历自发的失活 一系列的调控蛋白：失活不同的组分,调控补体系统的蛋白,补体系统调控蛋白,调控蛋白对补体系统的调控：在转化酶活性装配前,调控蛋白对补体系统的调控：在转化酶装配后,调控蛋白对补体系统的调控：在MAC装配水平,补体结合的受体,补体激活的生物学意义,补体系统的功能,裂解,调理,活化,清除,细胞裂解,微生物对补体介导损伤的逃避,C3b 是主要的补体系统调理素 C4b 和 iC3b 也有调理活性,补体易化调理(Opsonization),清除免疫复合物,课后作业,请翻译PPT7页补体系统的功能，周四上课前交给班长。,