流行性感冒病毒抗原检测试剂注册申报资料指导原则 2011 年 12 月 23 日发布 一、前言 本指导原则旨在指导注册申请人对流行性感冒病毒（以下简称流感病毒）抗原检测试剂 注册申报资料的准备及撰写，同时也为技术审评部门对注册申报资料的技术审评提供参考。 本指导原则是对流感病毒抗原检测试剂的一般要求，申请人应依据产品的具体特性确定 其中内容是否适用，若不适用， 需具体阐述理由及相应的科学依据，并依据产品的具体特性 对注册申报资料的内容进行充实和细化。 本指导原则是对申请人和审查人员的指导性文件，但不包括注册审批所涉及的行政事 项，亦不作为法规强制执行，如果有能够满足相关法规要求的其他方法，也可以采用，但需 要提供详细的研究资料和验证资料，相关人员应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。 本指导原则是在现行法规和标准体系以及当前认知水平下制定的，随着法规和标准的不 断完善，以及科学技术的不断发展，本指导原则相关内容也将适时进行调整。 二、适用范围 流感病毒抗原检测试剂是指利用胶体金法、酶联免疫法等基于抗原抗体反应原理，以特 定的流感病毒抗原为检测目标，直接对人咽拭子、呼吸道洗液、 抽吸液或其他呼吸道分泌物 样本中的流感病毒进行体外定性检测的试剂。 本指导原则适用于进行首次注册申报和相关许可事项变更的产品。 三、注册申报资料要求 （一）综述资料 1 / 17 流感病毒包括甲、乙、丙三型，甲型最容易引起流行，乙型次之，丙型极少引起流行。 依据病毒颗粒外膜血凝素（HA ）和神经氨酸酶（NA ）蛋白抗原性的不同，甲型流感病毒目 前可分为16 个 H 亚型（ H1-H16 ）和 9 个 N 亚型（ N1-N9 ）。在甲型流感病毒中，目前已有 H1、H2、H3、H5、H7 和 H9 等亚型有人感染的报道。由于编码HA 和（或） NA 的核苷酸 序列容易发生突变，致使HA 和（或） NA 的抗原表位发生改变，这种抗原性的转变使人群 原有的特异性免疫力失效，故甲型流感病毒常引起较大规模甚至世界性的流感流行。按照流 行特点， 造成人间流感流行的流感病毒可区分为季节性流感病毒和新型甲型流感病毒。季节 性流感病毒通常在年度间发生小范围的基因变异，这种基因变异会导致微小的抗原性改变， 称为抗原漂移（antigenic drift ）。因此，季节性流感病毒虽具有年度特异性且抗原性的改变 使感染者不易获得持久免疫力，但传播范围通常局限于较小的人群范围，一般不会造成太高 的发病率和死亡率，易感人群多为老年人（65 岁）和婴幼儿（6 岁）。在过去的几十年 中，季节性流感病毒主要集中在甲型H3N2 和 H1N1 亚型。近年来， 新型甲型流感病毒亚型 暴发流行的案例时有发生。例如，2009 年新型甲型H1N1 流感病毒造成全球性流感大流行， 人感染高致病性禽流感（H5 亚型）病毒的病例时有报道，禽类甲型H5N1 亚型流感病毒被 认为具有造成人间大范围流感流行的潜力。新型甲型流感病毒通常由于基因的节段性重组所 致，这种大范围的基因改变易导致病毒抗原特性的重大改变，称为抗原转变（antigenic shif t）。新型甲型H1N1 流感病毒（ 2009）即同时包含了禽流感、猪流感和人季节性流感的基 因片段从而导致病毒在抗原水平发生了明显改变。由于抗原性的明显改变以及可能由此造成 的病毒毒力的增强，病毒的传染性和致病严重程度都有所增加，故新型甲型流感病毒可能造 成更高的发病率和死亡率。 流感病毒主要经空气飞沫传播，常引起发热、乏力、肌肉酸痛以及轻到中度的呼吸道症状， 2 / 17 重者可致肺炎、 心肌炎和心衰。 流感病毒抗原检测试剂可用于流感的辅助诊断，甲型流感病 毒各亚型的抗原类检测试剂还可用于区分季节性流感病毒和新型甲型流感病毒，并可获得关 于流感暴发的流行病学信息。 在注册申报资料中， 流感病毒的命名应采用世界卫生组织关于流感病毒毒株命名的相关 要求进行。流感病毒毒株命名包括6 个要素：型别/宿主 /分离地区 /毒株序号 /分离年份（ Hn 和 Nn） ，H 和 N 分别代表血凝素和神经氨酸酶，n 是阿拉伯数字，对于人流感病毒可以省略 宿主信息。如名为“A/Shanghai/37T/2009 （H1N1）” 的病毒株代表2009 年在上海分离的以人 为宿主的 H1N1 亚型流感病毒，毒株序号为37T。 综述资料主要包括产品预期用途、产品描述、 有关生物安全性的说明、研究结果的总结 评价以及同类产品上市情况介绍等内容，其中同类产品上市情况介绍部分应着重从方法学及 不同类型毒株检出能力等方面写明拟申报产品与目前市场上已获批准的同类产品之间的主 要区别。应符合体外诊断试剂注册管理办法（试行） （以下简称办法 ）和体外诊断 试剂注册申报资料基本要求（国食药监械2007609 号）的相关要求。 （二）产品说明书 说明书承载了产品预期用途、标本采集及处理、实验方法、 检测结果解释以及注意事项 等重要信息， 是指导实验室工作人员正确操作、临床医生针对检验结果给出合理医学解释的 重要依据， 因此， 产品说明书是体外诊断试剂注册申报最重要的文件之一。产品说明书的格 式应符合 体外诊断试剂说明书编写指导原则的要求， 境外试剂的中文说明书除格式要求 外，其内容应尽量保持与原文说明书的一致性，翻译力求准确且符合中文表达习惯。产品说 明书的所有内容均应与申请人提交的注册申报资料中的相关研究结果保持一致，如某些内容 引用自参考文献，则应以规范格式对此内容进行标注，并单独注明文献的相关信息。 结合体外诊断试剂说明书编写指导原则的要求， 下面对流感病毒抗原检测试剂说明 书的重点内容进行详细说明，以指导注册申报人员更合理地完成说明书编制。 1.【预期用途】应至少包括以下几部分内容： （1）试剂盒用于体外定性检测人鼻咽拭子、口咽拭子、呼吸道抽吸液、洗液和/或其他 呼吸道分泌物样本的流感病毒抗原（如核蛋白抗原），适用样本类型应结合实际的临床研究 完成情况进行确认。 （2）简单介绍待测目标的特征，如病毒生物学性状、感染后的临床表现、亚型、变异 特征等。 （3）待测人群特征介绍：如具有流感样症状的患者、相关的密切接触者、地域要求或 年龄限制（如有）等。 2.【主要组成成份】 （1）说明试剂盒包含组分的名称、数量、比例或浓度等信息，阴性/阳性对照品（或质 控品）可能含有人源组分，应提供其生物学来源、灭活方法及无传染性确认的方法等。 （2）建议对用于单克隆或多克隆抗体研发的流感病毒株的信息进行简单介绍。 （3）试剂盒中不包含但对该项检测必须的组分，企业应列出相关试剂/耗材的名称、货 号及其他相关信息。 3.【储存条件及有效期】 对试剂盒的效期稳定性、开封稳定性、运输稳定性等信息做详细介绍。 胶体金试纸条产品应对开封后未使用产品允许暴露于空气中的温度、湿度及期限等条件 予以明确。 4.【样本要求】重点明确以下内容： （1）样本采集时间点的选择：是否受临床症状、用药情况等因素的影响。 3 / 17 （2）对采样拭子及样本保存液的要求：对采样拭子的材质要求（包括对拭子头和拭子 杆的要求）、保存容器、转运保存液的要求、转运条件等。 （3）样本采集：样本类型、具体采集部位，医护人员防护等信息；详述具体的操作方 法或列出相关操作指南文件（最好能够给出具体图示）以指导使用者， 尽量减少由于样本采 集或处理不当对实验结果造成的影响。 （4）样本处理及保存：保存条件及期限（短期、长期）、运输条件等。冷藏/冷冻样本 检测前是否须恢复室温，冻融次数。 5.【检验方法】详细说明试验操作的各个步骤，包括： （1）实验环境：温、湿度条件，检测试剂及样本复温等要求。 （2）试剂配制方法、注意事项，试剂条（卡）开封后注意事项等。 （3）试剂条和试剂卡的加样方法如有差异，建议分别以图示方式描述清楚。 6.【检验结果的解释】 应以图示方法给出阴性、阳性及无效结果的判读示例。 7.【检验方法局限性】至少应包括以下内容： （1）本试剂盒的检测结果仅供临床医生参考，不得作为临床诊治的唯一依据，对患者 的临床管理应结合其症状/体征、病史、其他实验室检查及治疗反应等情况综合考虑。 （2）受抗原类检测试剂方法学的限制，其最低检测限（分析灵敏度）普遍较核酸类试 剂低， 故实验人员应对阴性结果给予更多的关注，需结合其他检测结果综合判断，建议对有 疑问的阴性结果采用核酸检测或病毒分离培养鉴定方法进行复核。 （3）如果申报试剂用于甲型流感病毒的检测，应对阳性实验结果做以下建议：建议进 一步实验以确认甲型流感病毒的亚型，并向当地公共卫生预防机构咨询协商处理。 （4）有关假阴性结果的可能性分析 不合理的样本采集、转运及处理、样本中病毒滴度过低均有可能导致假阴性结果。 病毒基因变异可能导致抗原决定簇的改变，从而造成假阴性结果，使用单克隆抗体的 试剂更易发生此类情况。 对于突发的新型甲型流感病毒，其检测的最适样本类型以及感染后的最佳采样时间 （病毒滴度峰值）可能尚未确认，因此，在同一患者分次、多部位采集样本会降低假阴性结 果的可能。 未经验证的其他干扰因素，如 等可能会导致假阴性结果（如有）。 8.【产品性能指标】详述以下性能指标： （1）对相应国家参考品（如有）检测的符合情况。 （2）对于甲型流感病毒抗原（通用型）检测试剂，应首先说明有关其性能指标确定的 病毒亚型基础以及有关新型甲型流感病毒的警示，如：以下性能指标基于季节性A/H1和 A/H3 亚型确认，当其他新型甲型流感病毒出现时，其相关的性能指标可能有所改变。 （3）甲型流感病毒抗原（通用型）各亚型验证：用于甲型流感病毒（通用型）抗原的 检测试剂，应在此列出所有验证过的各亚型病毒株的信息。 （4）最低检测限（分析灵敏度）：说明试剂的最低检出浓度，建议采用生物学方式表示 病毒滴度，如半数组织培养感染量（TCID50 ）或空斑形成单位（PFU）的形式，简单介绍 最低检测限的确定方法以及对最低检测限验证所采用的病毒株信息。 （5）企业内部阳性/阴性参考品符合率，简单介绍阳性参考品的来源、浓度梯度、阴性 参考品组成、来源以及浓度梯度设置等信息。 （6）精密度：精密度参考品的组分、浓度及评价标准。 （7）分析特异性 用于甲型流感病毒各亚型（HA 和/或 NA 抗原） 检测的试剂盒， 应对除待测亚型外的 4 / 17 其他常见亚型进行交叉反应的验证并说明详细情况。 交叉反应：易产生交叉反应的除待测抗原外的其他病原体的验证情况。 干扰物质：样本中常见干扰物质对检测结果的影响，如血液、粘蛋白、脓液等。 药物影响： 治疗感冒或其他呼吸道症状患者外用或内服的常见药物对检测结果的影响， 如常见抗感冒药物、糖皮质激素、抗生素、中药等，如未进行相关研究也应提供相关警示说 明。 （8）钩状（ HOOK ）效应：出现钩状效应时的流感病毒抗原最低浓度或经验证的未出 现钩状效应的最高浓度值。 （9）对比试验研究（如有） ：简要介绍参比试剂（方法）的信息、所采用的统计学方法 及统计分析结果。 9.【注意事项】应至少包括以下内容： （1）与成人相比，儿童更容易在较大范围内传播病毒，且持续时间更长，因此，对儿 童检测的敏感性可能高于成人。 （2）对于甲型流感病毒或各亚型的检测试剂，当所用抗体为单克隆性质时，则由于核 苷酸序列小范围突变导致的抗原表位的微小变化可能会导致假阴性结果或试剂的分析灵敏 度降低。 （3）有关人源组分（如有）的警告，如：试剂盒内对照品（质控品）或其他组分含有 人源物质，虽已经通过了HBs-Ag 、HIV1/2-Ab 、HCV-Ab 等项目的检测，但截至目前，没有 任何一项检测可以确保绝对安全，故仍应将这些组份作为潜在传染源对待。 （4）有关实验操作、样本保存及处理、新型甲型流感病毒验证等其他注意事项。 （三）拟定产品标准及编制说明 拟定产品标准应符合办法和体外诊断试剂注册申报资料基本要求的相关规定。 另外，对于国产试剂，应参考中国生物制品规程（2000 年版） ，将拟申报产品的主要原 材料、 生产工艺及半