实验一：使用高倍显微镜观察几种细胞一、实验目的：1、学会如何使用显微镜观察细胞；2、了解细胞的结构；3、学会制作临时装片。二、实验原理1.人眼、光学显微镜以及电子显微镜成像原理、分辨率及其影响因素l 人眼自然界各种物体在光线的照射下，不同颜色可以反射出明暗不同的光线，这些光线透过角膜、晶状体、玻璃体的折射，眼球中的角膜和晶状体的共同作用，相当于一个“凸透镜”，在视网膜上形成倒立、缩小的实像，构成光刺激。视网膜上的感光细胞（圆锥和杆状细胞）受光的刺激后，经过一系列的物理化学变化，转换成神经冲动，由视神经传入大脑层的视觉中枢，然后我们就能看见物体了,经过大脑皮层的综合分析，产生视觉，人就看清了正立的立体像。人的眼睛是个复杂的成像系统，而人的大脑像CPU处理这些图像，让人能在视觉上感知到图像。人眼成像最主要的是晶状体和视网膜。晶状体调整眼睛的焦距是光束集中到富有视锥细胞和视柱细胞的视网膜上，在进行光电（生物电）变化，由视觉神经把信号传至大脑生成图像。人类的目标就是能制造出能过可以和眼睛相媲美的视觉系统，这是机器智能化的关键部分。说及人眼分辨率首先需要知道如下几个概念：（1）视角：观看物体时，人眼对该物体所张的角度。（2）分辨角：人眼的分辨角：指刚能看出两黑点时，两黑点对人眼的张角。（3）分辨力：人眼分辨图像细节的能力称为分辨力，可用分辨角来衡量，分辨角的倒数为分辨力。它也反映了人眼的视力。分辨力还与照度及景物相对对比度有关。人眼分辨率指的是人眼能够分辨两个相邻的点或者线的能力，通常以刚能被分开的两点或两线与眼睛瞳孔中心所成的张角表示。其最小分辨的距离在0.2mm左右。l 光学显微镜近代的光学显微镜通常采用两级放大，分别由物镜和目镜完成。被观察物体位于物镜的前方，被物镜作第一级放大后成一倒立的实象，然后此实像再被目镜作第二级放大，成一虚象，人眼看到的就是虚像。而显微镜的总放大倍率就是物镜放大倍率和目镜放大倍率的乘积。放大倍率是指直线尺寸的放大比。光学显微镜最大分辨率200nm光学显微镜下观察的结构称为亚显微结构l 电子显微镜电子显微镜中有一个电子枪，电子在枪集束射出，正像光学显微镜中利用光学透镜的成像作用得到显微的放大像一样，在电子显微镜中用磁透镜，使电子束会聚成像。我们把一片待观察的物体，例如一片很薄的晶体，放在电子显微镜中，电子束就会射向这片物体上，在一块荧光幕上就会得到一个放大的影像。如果在电子显微镜中用感光的底片代替荧幕的话就可以得到一张微观世界的珍贵图片。而一些特别好的电子显微镜，甚至可以观察到一些巨分子的结构！ 电子显微镜分辨率0.2nm电子显微镜下观察到的结构称为亚显微结构三、四、材料用具显微镜、载玻片，盖玻片、镊子、刀片、毛笔、培养皿、碘液、清水、胶头滴管、洋葱、绿叶，永久装片观察洋葱鳞片叶表皮细胞临时装片1. 擦片：用洁净纱布将载玻片和盖玻片擦拭干净；2. 滴水：在载玻片中央滴一滴清水（要适量，水滴太小容易产生气泡或干涸，水滴太大容易溢出载玻片而污染显微镜）；3. 取材、展平：用镊子撕取一小块洋葱鳞片叶内表皮薄膜（可以用刀片纵横划数刀，形成0.5cm0.5cm大小的正方形），将撕下的薄膜放在载玻片中央的水滴中，并用镊子展平；4. 盖片：用镊子夹起盖玻片，轻轻盖在表皮上。盖时，让盖玻片一边先接触载玻片上水滴的边沿，然后慢慢放下，以免产生气泡；5. 染色：在盖玻片一侧滴12滴碘液；6. 吸水：在盖玻片另一侧用吸水纸吸引碘液；（步骤16为装片制作）7.观察：参照显微镜使用；8.绘图：先用铅笔，根据观察到的图像（不能抄书，看到什么画什么），轻轻画出轮廓。经修改，再正式画好，务必使图形真实。图中比较暗的地方，用铅笔点上细点表示（越暗的地方细点越多，不能用阴影、涂黑表示暗处）。字尽量注在图右侧，用尺引出水平指示线，然后注字；在图下方写上所画图形名称。擦、滴、撕、展、盖、染、吸观察人口腔上皮细胞临时装片1.擦片：用洁净纱布将载玻片和盖玻片擦拭干净；2.滴水：在载玻片中央滴一滴生理盐水；3.取材：用牙签在口腔内侧轻刮几下（操作前请漱口），并将之涂抹在生理盐水滴中；48步骤：参照制作洋葱鳞片叶表皮细胞临时装片擦、滴、刮、涂、盖、染、吸显微镜的使用取镜、安放：a.打开显微镜箱，右手握镜臂，左手托镜座，把显微镜放在试验台的前方偏左；对 光：b.安装好目镜（10或16）；c.转动转换器使低倍物镜对准同光孔；d.转动遮光器，使最大光圈对准通光孔，左眼向目镜内注视（右眼也要睁开），同时转动反光镜，使其朝向光源，使视野内亮度均匀合适；低倍镜观察：e.将装片放在载物台上，用压片夹压住，标本要正对通光孔中心；f.转动粗准焦螺旋，使镜筒徐徐下降，同时两眼从侧面注视物镜镜头，当物镜与玻片相距23mm时停止；g.用左眼向目镜内注视，并转动粗准焦螺旋，使镜筒徐徐上升，直到看清物象为止。若不清楚，可调节细准焦螺旋，使物象更加清晰；收 镜：h.转动粗准焦螺旋，升高镜筒，取出玻片；再转动转换器，把2个物镜偏到两旁（3个物镜时低倍物镜对准通光孔），将镜筒下降至最低，然后将显微镜放回显微镜箱。高倍物镜的使用：使用高倍物镜之前，必须先用低倍物镜找到观察的物象，并调到视野的正中央，然后转动转换器再换高倍镜。换用高倍镜后，视野内亮度变暗，因此一般选用较大的光圈并使用反光镜的凹面，然后调节细准焦螺旋。观看的物体数目变少，但是体积变大。反光镜的使用：反光镜通常与遮光器（或光圈）配合使用，以调节视野内的亮度。反光镜有平面和凹面。对光时，如果视野光线太强，则使用反光镜的平面，如果光线仍旧太强，则同时使用较小的光圈；反之，如果视野内光线较弱，则使用较大的光圈或使用反光镜的凹面。相关重要知识1. 显微镜放大倍数=目镜物镜2. 显微镜放大的是长度或宽度，而不是面积3. 放大倍数变大（即低倍镜换高倍镜）：视野内细胞数目减少，体积变大，视野变暗4. 目镜越短，物镜越长，物镜与玻片距离越近，放大倍数越大5. 视野中污点判断：转动目镜/物镜，污点移动则污点在目镜/物镜上；玻片移动，则污点移动在玻片上；若以上操作污点均不移动，则污点在目镜中央。6. 换上高倍镜后禁止向下转动粗准焦螺旋仅供参考，绘图不要照抄7. 气泡辨别：气泡往往有粗而黑的边缘，形状呈圆形或椭圆形，里面往往一片空白，用镊子尖轻轻压一下盖玻片，气泡就会变形和移动。一般光学显微镜可能看不到叶绿体，细胞质用稀疏的细点表示；细胞核用黑圈表示，其中用密集的细点填充。植物细胞人或动物细胞实验一：使用高倍显微镜观察几种细胞1.制作人口腔上皮细胞的临时装片时，在载玻片中央滴一滴0.9%的生理盐水的作用是（ ） A为细胞提供营养 B避免细胞死亡 C保持细胞形态2用从洋葱鳞片叶上撕下的表皮制成的玻片标本叫 （ ） A.切片 B.装片 C.涂片3在显微镜下观察到的人口腔上皮细胞物像是 （ ）A B C4右图是某同学做的洋葱表皮细胞装片在显微镜视野中的图解，图中哪个结构是气泡？分析产生产生气泡的原因是： （ ） Aa；没有对光 Bb；没有用细准焦螺旋Ca；盖盖玻片时，没按规定操作Db；盖盖玻片时，没按规定操作5用低倍镜观察某一细胞时，如要换上高倍镜观察，首先需要调节（ ）A装片的位置 B粗准焦螺旋 C转换器 D细准焦螺旋6用低倍镜观察根尖细胞分裂图像时，发现某分裂细胞处在视野的右上方，要把它移到视野中央，装片移动方向是（ ） A左上方 B左下方 C右上方 D右下方7用显微镜观察葫芦藓叶的装片时，为使视野内看到的细胞数目最多，应选用（ ） A目镜5 物镜40 B.目镜10 物镜15C目镜5 物镜10 D目镜10物镜408一架光学显微镜的镜盒里有4个镜头，甲、乙一端有螺纹，甲较长；丙、丁无螺纹，丙较长。若要在视野中看到较大的细胞，宜选用 A甲与丙 B甲与丁 C乙与丙 D乙与丁9换用高倍镜观察洋葱表皮细胞时，错误的操作是（ ） A调节粗准焦螺旋 B调节细准焦螺旋 C用凹面镜 D转动转换器10用高倍镜观察没有染色的人的口腔上皮细胞时，正确的操作是（ ） 用平面镜 用凹面镜 缩小光圈 放大光圈A B. C. D. 11. 某学生在显微镜下观察落花生子叶的切片，当调节细准焦螺旋时,有一部分细胞看得清晰,另一部分细胞较模糊,这是由于（ ） A反光镜未调节好B标本切得厚薄不均C细准焦螺旋未调节好D显微镜物镜损坏12观察玻片标本时，若发现视野上方较暗，下方较亮，应调节（ ） A目镜 B物镜 C光圈 D反光镜13在普通光学显微镜下观察水绵细胞，不易观察到的结构是（ ） A细胞膜 B细胞壁 C叶绿体 D细胞核14用高倍镜观察叶的保卫细胞和洋葱细胞，发现保卫细胞特有（ ）A细胞壁 B细胞核 C紫色液泡 D叶绿体15用显微镜观察植物叶片细胞，低倍显微镜视野与高倍显微镜视野相比，其特点是()A亮，细胞数目多，形体小B暗，细胞数目多，形体小C亮，细胞数目多，形体大D暗，细胞数目多，形体大16在低倍镜下观察标本时视野明亮，物像清晰，但换用高倍镜后物像模糊，此时应()A移动装片B调节反光镜C用细准焦螺旋调节焦距D用粗准焦螺旋调节焦距17用显微镜观察某标本时，已知目镜的放大倍数为10，物镜的放大倍数为40，则此显微镜的放大倍数为()A长度、宽度均放大400倍 B面积放大了400倍C长度或宽度放大40倍 D标本的体积放大400倍18下列关于高倍镜使用的叙述中，正确的是()A因为苔藓类的叶片大，在高倍镜下容易找到，所以可以直接使用高倍物镜B在低倍镜下找到叶肉细胞，即可换高倍物镜C换高倍物镜后，必须先用粗准焦螺旋调焦，再用细准焦螺旋调至物像最清晰D为了使高倍物镜下的视野亮一些，可使用最大的光圈或凹面反光镜19实验中用同一显微镜观察了