资源预览内容
第1页 / 共4页
第2页 / 共4页
第3页 / 共4页
第4页 / 共4页
亲,该文档总共4页全部预览完了,如果喜欢就下载吧!
资源描述
壳聚糖水提液壳聚糖水提液 2010/08/30 目的筛选壳聚糖对黄芩水提液的最佳纯化工艺,从而优化黄芩苷的提取工艺。方法以黄芩苷得重(得重=粗品黄芩苷重量黄芩苷浓度)为衡量指标,运用正交实验考察不同影响因素对絮凝效果的影响,同时采用HPLC测定其含量对工艺进行系统评价。结果壳聚糖对黄芩水提液絮凝的最佳工艺条件:体系pH5,搅拌时间10min,体系温度40,絮凝剂浓度0.5%。结论壳聚糖对黄芩水提液具有较强的絮凝作用,该方法简单可行,可提高黄芩药材的利用率。壳聚糖;黄芩苷;水提液;絮凝剂黄芩ScutcnanaBaicalensisGeorgi为唇形科植物黄芩的干燥根1,主要功效为清热燥湿、泻火解毒、止血安胎。黄芩中主要成分为黄酮类化合物,其中含量较高的有效成分有黄芩苷(Baicalin)、汉黄芩苷(Wogonoside)、黄芩素(Baicalein)、汉黄芩素(Wogonin)等。目前代谢研究表明,黄芩苷和汉黄芩苷为前药,黄芩素和汉黄芩素为二者的真正药效物质基础。药理学研究表明,黄芩具有多种药理作用,如抗菌、抗病毒、抗炎、抗变态反应、抗氧化、清除氧自由基、抗癌、抗肿瘤、抗凝、抗血栓形成和保护肝脏、心脑血管、神经元等作用,目前临床主要用于抗炎和抗菌。在现代中药生产中,经常使用酸沉法从中药黄芩中提取粗品黄芩苷来代替黄芩。但在黄芩水提液的酸沉过程中,水提液中的一些有机大分子杂质如淀粉、果胶、蛋白质等会随有效成分一起沉降下来,这就造成粗品黄芩苷中含有许多无效成分,降低了疗效。如果用传统的纯化工艺,黄芩苷的得率又得不到保证,进而造成了原药材的大量浪费。壳聚糖作为长链高分子碱性多糖,在稀酸中可形成活性基团-NH3+,对溶液中带负电荷的成分如蛋白质、树胶、鞣质、单宁、部分多糖等2进行吸附,从而达到对黄芩水提液净化除杂的作用,在保证产量的前提下实现提高黄芩苷含量的目的。1仪器与试剂1.1仪器LC-20AT型HPLC(岛津公司);88-1型定时恒温磁力搅拌器(上海司乐仪器有限公司);中速自动平衡微型离心机(北京医用离心机厂);ZK-82型真空干燥箱(上海市实验仪器总厂);德国SartoriusBS224S电子天平;METTLERAE240电子分析天平(瑞士)及实验过程所需的玻璃仪器。1.2试剂壳聚糖(济南海得贝生物公司);甲醇(色谱纯);双重蒸馏水;其他试剂均为分析纯。2方法2.1壳聚糖絮凝剂的配制用1%的乙酸为溶剂,分别配制浓度为0.5%,1.0%,1.5%的壳聚糖溶液,充分溶胀后作为絮凝剂,备用。2.2黄芩水提液的制备筛选合格的黄芩干燥根,蒸透后切片。称取黄芩饮片100g,分别加10倍,8倍量水煎煮2次,1h/次,纱布过滤,合并两次滤液,平分4份,待用。2.3黄芩苷粗品的制备3黄芩水提液加入壳聚糖静置过夜离心上清液水浴加热至40盐酸调pH1.540恒温1h静置过夜倾去上清液沉淀水洗至pH6减压抽滤60真空干燥即得。2.4单因素实验分别以体系温度、体系pH、搅拌时间、壳聚糖用量以及壳聚糖的浓度为考察因素,在不同水平下进行单因素实验,以期筛选出影响絮凝效果的主要因素和水平。从而为正交实验设计提供依据。2.5黄芩苷含量测定方法学考察2.5.1色谱条件色谱柱:HypersilODSC18(4.6mm250mm,5m,大连伊利特);检测器:SPD-20A(SHIMADZU);工作站:CS-Light;流动相:甲醇0.4%磷酸水溶液(4753);柱温:35;流速:1ml/min;检测波长:278nm。2.5.2对照品溶液的制备取黄芩苷1.67mg,精密称定,置10ml量瓶中,加少量甲醇溶解并定容至刻度,摇匀,0.45m微孔滤膜过滤,备用。2.5.3供试品的制备称取黄芩苷样品适量,精密称定,置于5ml量瓶内,加少量甲醇溶解并定容至刻度,摇匀,0.45m微孔滤膜过滤,备用。2.5.4标准曲线的绘制分别取黄芩苷(0.167mg/ml)标准品溶液2,4,6,8,10,12l,以进样量为横坐标,峰面积为纵坐标,得到黄芩苷回归方程:Y=565266.1X+69456.9,R=0.9997,说明黄芩苷在0.3342.004g范围内线性关系良好。2.5.5精密度实验精密吸取同一供试品溶液10l,连续进样5次,记录色谱图。测得各共有峰的相对峰面积RSD小于3,相对保留时间RSD小于1。表明仪器精密度良好。2.5.6稳定性实验取同一供试品溶液,分别于0,2,8,16,24h测定,记录色谱图。结果表明供试品溶液在24h内稳定,RSD小于1.5%。2.5.7重复性实验取同一样品5份,按供试品溶液制备方法进行制备,分别进样,记录色谱图。测得各共有峰相对峰面积的RSD小于3,相对保留时间的RSD小于1。结果表明实验重复性良好。2.6正交实验根据单因素实验结果,采用正交试验法优化实验操作条件,选择L9(3)4正交实验表,分别以pH值(A)、搅拌时间(B)、温度(C)、絮凝剂浓度(D),作为实验因素各设置3个水平,对絮凝条件进行考察。结果见表1。表1正交实验因素水平(略)3结果3.1搅拌时间对絮凝作用的影响黄芩水提液在自身pH和60条件下,随机取3份黄芩水提液加入1.0%的壳聚糖溶液25ml后,继续用搅拌器分别搅拌10,30,50min。再按黄芩苷粗品的工艺流程操作。测其得重依次为:0.9670,0.8474,0.6297。由测定结果可知,在搅拌10min后其得重最大。3.2体系pH对絮凝作用的影响随机取3份黄芩水提液,体系在60条件下分别调节pH至5,6,7。加入1.0%的壳聚糖溶液25ml并搅拌30min,再按黄芩苷粗品的工艺流程操作。测其得重依次为:1.3746,0.6747,0.3130g。由测定结果可知,当体系pH为5即在自身pH条件下其得重最大,但如果体系pH过低会使黄芩苷大量析出,影响粗品黄芩苷重量。3.3体系温度对絮凝作用的影响随机取3份黄芩水提液,在自身pH条件下恒温水浴中分别加热至40,50,60。加入1.0%的壳聚糖溶液25ml并搅拌30min,再按黄芩苷粗品的工艺流程操作。测其得重依次为:0.5442,0.5699,0.4276g。由测定结果可知,当体系温度在50时其得重最大。3.4絮凝剂浓度对絮凝作用的影响随机取3份黄芩水提液,在自身pH和60条件下分别加入0.5,1.0,1.5的壳聚糖溶液25ml并搅拌30min,再按黄芩苷粗品的工艺流程操作。测其得重依次为:1.1963,0.9902,0.9678g。由测定结果可知,用0.5的壳聚糖溶液作絮凝剂时其得重最大。3.5絮凝剂用量对絮凝作用的影响随机取3份黄芩水提液,在自身pH和60条件下分别加入1.0%的壳聚糖15,25,35ml并搅拌30min,再按黄芩苷粗品的工艺流程操作。测其得重依次为:1.1771,1.0917,1.0907g。由测定结果可知,加入15ml1.0%的壳聚糖作絮凝剂时其得重最大。但其得重的变化率低于其他因素得重的变化率,相对于上述4个因素而言,壳聚糖用量对絮凝作用的影响可以忽略,可以不作为主要影响因素考察。3.6正交实验结果与分析见表23。表2正交实验结果与分析(略)表3实验结果方差分析(略)由表23可知,搅拌时间的极差最大,其次是体系pH,故对黄芩水提液絮凝效果影响的大小顺序为BADC,最佳絮凝条件为A1B1C1D1,即体系pH5,搅拌时间10min,体系温度40,絮凝剂浓度0.5%。3.7最佳方案的验证实验以正交表所得出的最佳絮凝条件为工艺条件,取黄芩饮片25g,按黄芩苷粗品的工艺流程操作。重复两次。结果见表4。表4验证实验结果(略)由表4可知,采用优化的最佳工艺对黄芩水提液进行除杂后,其黄芩苷得重显著增高,且工艺条件稳定可靠。4讨论与结论实验表明,在保证得率的前提下,壳聚糖对黄芩水提液有较好的絮凝净化作用,而且絮凝作用具有良好的选择性。本实验在综合考虑各种因素的影响后,最终确定了絮凝的最佳工艺条件:体系pH=5,搅拌时间10min,体系温度40,絮凝剂浓度0.5%。本实验在克服传统酸沉法不能兼顾得率与含量的缺点的基础上,采用絮凝法进行除杂,取得良好的预期效果,得重较高,有效地减少有效成分的损失,并且工艺简单,提高了原药料的利用率。壳聚糖属于一种高分子聚合物,絮凝是通过长碳链上的一些活性官能团,可在同一个分子上吸附多个微粒。因而它在微粒之间产生了联系作用,这种作用称之为架桥作用。由于这种作用,可以将许多微粒连接在一起形成一个絮团2。絮凝是一个复杂的化学动力学过程。搅拌和pH对絮凝效果有显著的影响,原因可能是:当搅拌不充分时,会导致加入的壳聚糖局部浓度过高,使壳聚糖不能及时充分地与微粒相结合,反而被先形成的絮团所包容而沉淀出来,这种沉淀下来的絮团的动力学常数相当稳定,一般的搅拌方式不能有效地一一对其进行完全的破环。这就大大降低了壳聚糖的利用率。同时如果在较低的pH条件下,更有利于壳聚糖分子中的活性基团-NH3+的形成,使絮凝作用进行得更完全。新晨范文网:1国家药典委员会中国药典,部S.北京:化学工业出版社,2005:211.2董方言现代实用中药新剂型新技术M.北京:人民卫生出版社,20013冀春茹.中药化学实验技术与实验M.郑州:河南科学技术出版社,1986:273
网站客服QQ:2055934822
金锄头文库版权所有
经营许可证:蜀ICP备13022795号 | 川公网安备 51140202000112号