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Trizol 提取总 RNA一、实验所需试剂:trizol 1. 氯仿 普通试剂 实验前未开封或在工作台中使用过2. 异丙醇 普通试剂 实验前未开封或在工作台中使用过,使用前冰浴待用3. 75%酒精 用无水乙醇加 RNase-free h2o 配好,实验前未开封或在工作台中使用过,使用前冰浴待用二、实验所需物品:1. 1ml 枪头及枪头盒0.2ml 枪头及枪头盒10 微升枪头及枪头盒,用 1/1000 DEPC 泡过夜,高压 121 度 40 分钟,烤干备用0.5ml 1.5ml 的 EP 管用 1/1000 DEPC 泡过夜,高压 121 度 40 分钟,烤干备用2. 研钵、小勺、镊子、剪刀:180 度 4 小时烘烤3. 1/1000 DEPC 水高压 121 度 40 分钟4. 枪 三种5. 多用途离心管架放入操作台内二、实验步骤:(一)1. 取液氮中的组织块,取出放研钵中加液氮研磨,研磨至粉末状。2. 加入适量 trizol 1ml (50-100mg/ml) ,吹打混匀,转移至 EP 管中,静置 5分钟。3. 每 1ml TRIZOL 加 0.2ml 氯仿,手动摇晃 15 秒,室温静置 2-3 分,12000g*15 分 ,4 度。4. 可见上层水相,中间混合相,下层酚相,吸取水相,转至新的 EP 管中。5. 加入等体积冰预冷的异丙醇,颠倒混匀,1ml trizol 加 0.5ml。15-30 度放 10分或-20 度沉淀 40 分,12000g*10 分 4 度。6. 吸去液体可见白色沉淀,加入 1ml 冰预冷 75%乙醇,混匀,洗涤,7500g*5分,4 度沉淀。7. 弃上清,晾干,溶于 Rnase-free H2O (每管 30-50 微升)8. -70 度保存。注意事项1. RNA 提取完的样本不能保存最好做 CDNA 再保存2. 注意操作是戴手套、帽子、口罩。3. 操作完把枪调回最大刻度。4. 操作时戴双层手套,操作时用外层,其他用里层。
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