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食品科学学院本科实验项目实验项目名称 食品中着色剂的测定 所属课程 食品分析与检验所适专业 食品科学与工程、食品质量与安全 带课教师 丁晓雯实验要求 必修或选修 关键词 着色剂、纸层析法实验目的 (1) 学习各类色素测定的原理与方法;(2) 掌握纸层析定性法与提纯色素的定量法。所用教材 吴谋成. 食品分析与感官评定M.北京:中国农业出版社. 2002.实验类型 1 1.基础性实验; 2. 综合与设计性实验; 3.研究与创新型实验 基本描述聚酰胺是具有二极性的化合物,水溶性酸性染料在酸性条件下被聚酰胺吸附,而在碱性条件下解吸附,再用纸色谱法或薄层色谱法进行分离后与标准比较定性、定量。所用主要仪器设备分光光度计、微量注射器或色素吸管、展开槽(2564cm) 、层析缸、薄层板(520cm) 、电吹风机、水泵。实验学时 3 是否特色 是实验 7 食品中着色剂的测定1 实验目的(1) 学习各类色素测定的原理与方法;(2) 掌握纸层析定性法与提纯色素的定量法。2 实验原理聚酰胺是具有二极性的化合物,水溶性酸性染料在酸性条件下被聚酰胺吸附,而在碱性条件下解吸附,再用纸色谱法或薄层色谱法进行分离后与标准比较定性、定量。3 试剂与仪器主要试剂:聚酰胺粉(尼龙 6)、硫酸(1:10) 、甲醇-甲酸溶液(6:4) 、甲醇、20柠檬酸溶液、10钨酸钠溶液、石油醚、海砂、乙醇-氨溶液、 50乙醇溶液、硅胶 G、盐酸(1:10) 、5氢氧钠溶液、碎瓷片、展开剂a、正丁醇-无水乙醇-1氨水(6:2:3) ;b、正丁醇- 吡啶-1氨水(6 :3:4) ;c 、甲乙酮- 丙酮-水(7 :3:3) ;d、甲醇-乙二胺-氨水(10:3: 2);e、甲醇-氨水-乙醇 (5:1:10);f 、2.5柠檬酸钠- 氨水-乙醇(8:1:2)。 :供薄层色谱用、色素标准品(胭脂红;苋菜红;柠檬黄;靛蓝;日落黄;亮蓝:纯度均为60。 ) 。 主要仪器:分光光度计、微量注射器或色素吸管、展开槽(2564cm) 、层析缸、薄层板(520cm ) 、电吹风机、水泵。4 操作与结果(1) 样品处理 果味水、果子露、汽水:吸取 50.0 毫升样品于 100 毫升烧杯中,汽水需加热驱除二氧化碳。 配制酒:吸取 100.0 毫升样品于烧杯中,加碎瓷片数块,加热驱除乙醇。 硬糖:蜜饯类,淀粉软糖:称取 5.0 或 10.0 克粉碎的样品,加 30 毫升水,温热溶解,若样液 PH 值较高,用 20柠檬酸溶液调至 PH4 左右。 含蛋奶的样品a 奶糖:称取 10.0 克粉碎均匀的样品,加 30 毫升乙醇-氨溶液溶解,置水浴上浓缩至约 20 毫升,立即用 1:10 硫酸调溶液至微酸隆再加 1.0 毫升 1:l0 硫酸,加 1 毫升 l0钨酸钠溶液,使蛋白质沉淀,过滤,用少量水洗涤,收集滤液。b 蛋糕类:称取 10.0 克粉碎均匀的样品,加海砂少许,混匀、用热风风干样品(用手摸已干燥即可以),加入 30 毫升石油醚搅拌,放置片刻,倾出石油醚,如此重复处理三次,以除去脂肪吹干后研细,全部转人 G3 垂融漏斗或普通漏斗中,用乙醇氨溶液提取色素,直至色素全部提完以下按(1)自“置水浴下浓缩至约 20 毫升 ”起依法操作。(2) 吸附分离将处理后所得的溶液加热至 70,加入 0.5-1.0 克聚酰胺粉充分搅拌,用 20柠檬酸溶液调 PH 至 4,使色素完全被吸附,若溶液还有颜色,可以再加一些聚酰胺粉。将吸附色素的聚酰胺全部转入 G3 垂融漏斗或玻璃漏斗中过滤 (如用 G3 垂融漏斗过滤,可以用水泵慢慢地抽滤)。用 20柠檬酸酸化 PH4 的 70水反复洗涤,每次 20 毫升,边洗边搅拌,若含有天然色素再用甲醇-甲酸溶液洗涤 1-3 次,每次 20 毫升,至洗液无色为止。再用70水多次洗涤至流出的溶液为中性。洗涤过程中必须充分搅拌。然后用乙醇-氨溶液分次解吸全部色素,收集全部解吸液,于水浴上驱氨。如果为单色,则用水准确稀释至 50 毫升,用分光光度法进行测定。如果为多种色素混合液,则进行纸色谱或薄层色谱法分离后测定,即将上述溶液置水浴上浓缩至约 2 毫升后移人 5 毫升容量瓶中,用 50乙醇洗涤容器,洗液并入容量瓶中并稀释至刻度。(3) 定性分析 纸色谱精密称取各色素各 0.100 克,用 PH6 的水溶解,移入 100 毫升容量瓶中并稀释至刻度,即为色素标准溶液(每毫升相当于 1 毫克商品色素) 。靛蓝溶液需在暗处保存。取色谱用纸,在距底边 2cm 的起始线上分别点 3-10 微升样品溶液,1-2 微升色素标准溶液,挂于分别盛有 a、b、c、d、e 、f 的展开剂的层析缸中,用上行法展开,待溶剂前沿展至 15cm 处,将滤纸取出于空气中晾干,与标准斑比较定性。也可取 0.5 毫升样液,在起始线上从左到右点成条状,纸的右边点色素标准溶液,依法展开,晾干后先定性后定量,靛蓝在碱性条件下易褪色可用 e 展开剂。 薄层色谱a 薄层板的制备称取 1.60 克聚胺粉,0.4 克可溶性淀粉及 2 克硅胶 G,置于合适的研钵中,加 15 毫升水研匀后,立即置涂布器中铺成厚度为 0.3mm 的板。在室温晾干后,于 80干燥 1 小时置于燥器中备用。b 点样离板底边 2cm 处将 0.5 毫升样液从左到右点成与底边平行的条状的右边点 2 微升色素标准溶液。c 展开苋菜红与胭脂红用 d 展开剂,靛蓝与亮蓝用 e 展开剂,柠檬黄与其他色素用 f 展开剂。取适量展开剂倒入展开槽中,将薄层板放入展开,待色素明显分开后取出,晾干,与标准斑比较,如比移值相同即为同一色素。(4) 定量分析 样品测定 将纸色谱的条状色斑剪下,用少量热水洗涤数次,洗液移入 10 毫升比色管中,并加水稀释至刻度,作比色法定用。 将薄层色谱的条状色斑包括有扩散的部分,分别用刮刀刮下,移入漏斗中,用乙醇-氨溶液解吸色素,少量反复多次至解吸液无色,收集解吸液于蒸发皿中,于水浴上挥发除去氨,移入 10 毫升比色管中,加水至刻度作比色用。 标准曲线的绘制分别吸取 0.0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0ml 胭脂红,柠檬黄,日落黄色素标准使用液或0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml 亮蓝,靛蓝色素标准溶液,分别置于 10ml 比色管中,各加水稀释至刻度。上述样品与标准管分别用 1cm 比色杯,以零管调节零点,于一定波长下(胭脂红510nm,苋菜红 520nm,柠檬黄 430nm,日落黄 482nm,亮蓝 627nm) ,测定吸光度,分别绘制标准曲线比较或与标准色列目测比较。 计算X = 10m2AV式中:X样品中色素的含量 (g/kg 或 g/L);A测定用样液中色素的含量 (mg) ;m样品质量或体积(g 或 mL);V1样品解吸后总体积(mL);V2样液点板(纸)体积(mL)。5 注意事项与补充(1) 本实验方法的最低检出量为 50g,点样量为 1L 时,最低检出浓度为 50 mg/kg。(2) 点样前应对薄层板进行修整,即用刮刀垂直由下往上刮去上行展开薄层板两侧约0.5cm 的硅胶层。目的是防止薄层板展开时产生边缘效应,影响 Rf 值。参考文献:1 张水华. 食品分析实验M. 北京: 化学工业出版社. 2006.
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