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2020-12-24,白细胞计数(PPT课件,1,Dr.Feng,白细胞计数,实验一、 白细胞计数,1.原理:血液经稀乙酸定量稀释并破坏成熟红细胞,在血细胞计数池内计数规定区域内的白细胞总数,换算成每升血液中白细胞数。 2.试剂器材 白细胞稀释液:冰乙酸 2.0ml 10g/L亚甲蓝 3滴 加蒸馏水 至100ml,器材 改良牛鲍血细胞计数板及专用盖片、微量吸管、带孔吸头、1ML刻度移液管、小试管、洁净软纱布、干棉球、光学显微镜,毛细血管采血标准操作程序,操作步骤: 1 采血部位成人以左手无名指内侧为宜,半岁以下婴幼儿通常自拇指内侧或足跟两侧采血。 2 轻轻按摩采血部位。 3 用棉签蘸消毒液消毒局部皮肤、待干,4 紧捏刺血部位,使其自然充血。 5 用无菌刺针穿刺取血,动作应迅速,深度 23mm,稍加挤压以血液流出为宜。 6 用干棉球擦去第一滴血。 7 按需要依次采血。 8 采血完毕,用干棉球压住伤口,止血片刻,微量吸管的使用,1将带孔乳胶吸头轻轻套在微量吸管上,连接紧密不漏气; 2拇指和中指夹住吸头中下端,示指盖住吸头小孔,拇、中指轻微挤压排出适量空气; 3将微量吸管插入抗凝血,拇、中指缓慢松劲(松动快血液会吸入吸头),吸取抗凝血至所需刻度略上方(不能有气泡),吸管呈水平略下垂,松开示指; 4用干棉球顺吸管向下拭尽管外余血(保证血量准确),轻触吸管下口吸去多余血量,使管内抗凝血正处所需刻度; 5将微量吸管插入小试管底部,三指轻微用力慢慢排出血液,用上清液冲洗管内余血2-3次,轻摇试管混匀; 6拔出微量吸管弃入污物桶,3.操作步骤 (1)加稀释液 用移液管向小试管内加入0.38ml白细胞稀释液。 (2)采血、稀释用微量吸管采血20ul,拭去管外余血,释放于小试 管底部,用上部稀释液洗净吸管内余血,轻摇试管混匀,静置等其溶血。 (3)清洁计数板及盖片(动作轻柔),夹持盖片缘纵向前推轻放于两侧支持堤上。 (4)充计数池将小试管轻微振荡2min,立即以一次性微量吸管吸取混匀后的白细胞悬液,充入计数池内。静置2-3min,使细胞沉于计数池底面。 (5)调试显微镜 将计数板放置载物台上,选择(4 )低倍镜,调节聚光器使光线较暗,调节旋钮找到方格线,转至低倍镜(10),调节光亮 。 (6)计数 低倍镜下计数四角4个大方格内白细胞总数,压线细胞数上不数下,数左不数右,血细胞计数板的方格,计数板上下各一个计数池 计数区域分为9个大方格 四角的大方格各划分为16个中方格 中央大方格划分为25个中方格 四角的大方格为白细胞计数区 中央大方格四角和正中5个中方格为红细胞计数区,结果计算 白细胞总数 =4大格白细胞数(N) /410 20 106 = N 20 109/L 用. 109/L(小数点后一位)表示,注意事项,稀释液,小试管、计数板 采血 充池 计数原则 WBC过多 WBC过少 WBC校正 显微镜调试,5.注意事项,1).稀释液密封保存,防止污染,小试管、计数板、盖片均须清洁,以免杂质、微粒等被误认为细胞。 (2).采血时针刺深度必须适当,不能过度挤压,防止组织液渗入或采血时间太长引起血液凝固。 (3).稀释液和采血量要准确,充分混匀,充液适量,无不足、外溢和气泡,细胞分布均匀。 (4).白细胞总数在参考范围内,大方格间的细胞数不得相差10个以上,两次重复计数误差不得超过10。 (5).白细胞数量过高时,可加大稀释倍数,白细胞数量过低时,可计数8个大方格的白细胞数或取双倍血量,6).一些贫血患者血液中有核红细胞增多,会计数在白细胞总数内,应校正。 校正公式:白细胞校正数/L=M(100/100+N) M为未校正前白细胞数,N为在白细胞分类时,计数100个白细胞的同时计数到的有核红细胞数。 (7).调试显微镜 将血细胞计数板平放于载物台,低倍镜处所充计数池正中盖片略上方,向下微调载物台(防止压碎盖片)至看清计数区域内分隔线条为止,6.细胞计数原则,大方格四边压线细胞数左不数右,数上不数下, 弓形移动,7.正常参考值 成人 : ( 4.0-10.0)109/L 新生儿: (15.0-20.0)109/L,8.考核评价 a. 常规考核标准 (RCS) RCS= 100% 评价: 白细胞 4.0109/L者, RCS30% 白细胞在(4.1-14.9)109/L者 RCS20% 白细胞15.0 109/L者 RCS15% 超过上述标准者为不合格 b. 其他方法,四大格所见白细胞最大值最小值,四大格所见白细胞数平均值,9.思考题,1、某标本WBC为11.0 x109/L,分类100个WBC见到10个有核红细胞,试计算WBC的实际数目? 2、某同学在进行白细胞计数时,一次计得四大格白细胞数最多为46,最少值为32,试判断该同学考评结果如何
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