1Survivin、VEGF 和 p53 在乳腺癌组织中的表达及相关性研究作者：翟怡黎莉王新美丁宇张凯【摘要 】 目的：研究凋亡抑制基因 Survivin、血管内皮生长因子(vascular endothelial groth factor, VEGF)、p53 蛋白在乳腺癌组织中的表达，并探讨其临床意义。方法：用免疫组织化学 SP 法，对 60 例乳腺癌组织(A 组)、22 例乳腺良性增生组织(B 组)及 10 例乳腺癌旁正常组织(C 组)中的 Survivin、VEGF 及 p53 蛋白进行检测。结果：Survivin 阳性表达率在 A 组和 B 组分别为 76.7%(46/60) 和 18.2%(4/22)，在 C 组不表达(P0.05);Survivin 表达与乳腺癌病理组织学分级、HER2 表达有关。VEGF 阳性表达率在 A 组和 B组分别为 73.3%(44/60)和 31.8%(7/22)，在 C 组为 10%(1/10)(P0.05);VEGF 表达与乳腺癌淋巴结转移、病理组织学分级、HER2 表达及临床分期有关。p53 阳性表达率在 A 组和 B 组分别为51.7%(31/60)和 13.6%(3/22),在 C 组不表达(P0.05);p53 表达与乳腺癌肿瘤大小、淋巴结转移、病理组织学分级、HER2 表达及临床分期均有关。在乳腺癌组织中 Survivin 的表达与 VEGF、p53的表达呈正相关。结论：Survivin、VEGF 及 p53 在 A 组的表达明显高于 B 组和 C 组，并与转移和病理分级等生物学特征有关，在乳腺癌发生、发展中可能起重要作用，Survivin 有望成为乳腺癌基因2治疗的新靶点。 【关键词】 乳腺肿瘤基因，Survivin血管内皮生长因子类基因，p53【ABSTRACT】 Objective：To study the expression of Survivin，VEGF,p53 and their correlation in breast cancer.Methods：The expression of Survivin，VEGF and p53 was evaluated in 60 cases of breast cancer, 22 cases of hyperplasia of mammary gland and 10 cases of paracainoma normal tissues by immunohistochemical technique(SP).Results: The positive rates of Survivin were 76.7%,18.2% and 0% in breast cancer, hyperplasia of mammary gland and paracacinoma normal tissues (P0.05).The expression of Survivin was significantly correlated with the histological grade of breast cancer and HER2 in breast cancer. The positive rates of VEGF were 73.3%,31.8%,10%in breast cancer, hyperplasia of mammary gland and paracacinoma normal tissues, respectively(P0.05).The expression of VEGF was significantly correlated with lymphonodes mestastasis, the histological grade of breast cancer, HER2 and clinical staging 3in breast cancer. The positive rates of P53 were 51.7%,13.6% and 0% in breast cancer, hyperplasia of mammary gland and paracacinoma normal tissues,respectively (P0.05).The expression of P53 was significantly correlated with tumor size, lymphonodes metastasis, the histological grade of breast cancer, HER2 and clinical staging in breast cancer. Conclusion: The expression of Survivin，VEGF,p53 in breast cancer is significantly higher than that in hyperplasia of mammary gland and paracacinoma normal tissues ,and correlated with metastasis, the histological grade of breast cancer.【KEY WORDS】 Breast neoplasmsGenes,SurvivinVascular endothelial growth factorsGenes, p53乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤之一，我国发病率有逐年增高、发病年龄年轻化的趋势，严重威胁广大女性的健康和生命。乳腺癌的发生发展与多种基因和分子水平的变化密切相关，随着免疫学和分子遗传学的不断发展，对乳腺癌组织细胞形态学、免疫表型、基因特征的了解也逐渐深入，研究其在乳腺癌发生发展中的作用、与乳腺癌生物学特性的关系及其相关性，有利于探讨乳腺癌的发生发展的分子生物学机制，为乳腺癌早期诊断和预后判断提供依据，并4为其靶向治疗提供理论基础和新靶点。Survivin 是新近发现的凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis protein, IAP)家族中的成员，其独特的组织分布特性和强大的细胞凋亡抑制功能使之成为近年来研究的热点。本研究通过检测乳腺癌组织中 Survivin、VEGF 和 p53表达，分析这些基因蛋白表达之间的相互关系及其与临床病理之间的关系，探讨 Survivin 在乳腺癌发生发展中的作用，为诊断和基因靶向治疗乳腺癌提供依据。1资料与方法1.1 一般资料 收集淄博市中心医院普外科 2004 年 4 月2006 年 12 月手术切除乳腺标本。乳腺癌组织标本 60 例(A 组)，均为女性，年龄 3168 岁; 乳腺良性增生组织 22 例(B 组)，均为女性，年龄 1846 岁，其中乳腺纤维腺瘤 6 例，乳腺囊性增生 12 例，导管内乳头状瘤 4 例;10 例正常对照组则取自 60 例乳腺癌根治术标本中远离原发灶的正常腺体组织(C 组)。所有患者术前均未经抗癌治疗，其组织分型和临床分期依照卫生部 1998 年乳腺癌诊治规范实施。1.2 主要试剂 兔抗人 Survivin 多克隆抗体、鼠抗人 p53单克隆抗体、鼠抗人 VEGF 单克隆抗体、SP 试剂盒和 DAB 试剂盒均购于北京中杉金桥生物技术有限公司。51.3 检测方法 所有标本经 10%中性甲醛固定，组织石蜡包埋。4 m厚连续切片 4 张，HE 染色，免疫组织化学采用 SP 法，步骤严格按说明书进行，柠檬酸缓冲液高温高压修复，DAB 显色，苏木精复染。以已知 Survivin、p53 和 VEGF 阳性切片为阳性对照，以 PBS 液代替一抗为阴性对照。1.4 结果判定 Survivin 及 VEGF 染色阳性信号位于细胞质和(或 )细胞核，呈棕黄色颗粒。p53 染色以细胞核染成棕黄色颗粒为阳性。每张切片检测 5 个视野(400) ，阳性细胞数50% 为(+)1 。后两种情况视为阳性。1.5 统计学处理 采用统计软件 SPSS16.0 进行数据分析，进行四格表 2检验和 Spearman 等级相关分析。P0.05 为差异有统计学意义。2结果2.1 Survivin、VEGF 及 p53 的表达A 组中Survivin、VEGF 及 p53 的阳性表达率均明显高于 B 组及 C 组，差异有统计学意义(P0.05,表 1)。A 组中 Survivin 阳性组VEGF、p53 阳性表达也明显升高，两者呈正相关(P0.05)，而与肿瘤组织分级、HER2 表达呈正相关(P0.05)，而与淋巴结转移、肿瘤组织分级、HER2 表达及临床分期呈正相关;p53的表达与患者年龄、ER、PR 及病理类型均无相关性(P0.05)，而与肿瘤大小、淋巴结转移、肿瘤组织分级、HER2 及临床分期呈正相关(P0.05,表 3)。3讨论3.1 Survivin 在乳腺癌组织中的表达及临床意义Survivin基因是 IAP 家族中的重要成员之一。人类 Survivin 基因定位于染色体 17q25，全长 14 796 bp，位于距端粒约 3%的位置，包含 3 个内含子和 4 个外显子，编码一个含 142 个氨基酸、相对分子质量16.5103 的蛋白质。Survivin 是分子结构最简单、独特，迄今发现作用最强的 IAP2。Survivin 的组织分布具有明显的细胞选择性。在正常成人组织中，除胎盘及胸腺微弱表达 Survivin 外，其他组织很难检测到3。通过免疫组织化学、原位杂交、RT-PCR 等方法证实，Survivin-mRNA 和蛋白几乎表达于所有肿瘤组织4，而且在7结肠息肉、乳腺腺瘤、鲍文病等几种癌前损伤组织中也有表达，提示 Survivin 在肿瘤的发生发展中可能表达失控3。它通过直接抑制凋亡终末效应蛋白酶 caspase-3、caspase-7 的活性抑制细胞凋亡，选择性地表达于 G2/M 期，参与三维毛细血管网的形成。Kennedy等5研究显示 Survivin 的表达与患者的年龄、肿瘤大小、淋巴结转移、组织学分级、ER、PR、临床分期等无明显相关性，并且通常在乳腺癌初期过度表达。Ryan 等6 研究结果表明 Survivin 与病理学分级、阴性激素受体有关，与 HER2 阳性、VEGF 过表达及UPA、PAI-1 高水平密切相关。本组正常乳腺组织中均无 Survivin阳性表达，良性乳腺增生组织中的阳性率仅为 18.2%，乳腺癌组织中阳性表达率高达 76.7%，三者比较差异有统计学意义 (P0.05)，与文献报道的基本一致7-8。Survivin 表达与肿瘤分化程度相关，46 例级分化的乳腺癌中有 39 例表达阳性，阳性率为84.8%，与级分化比较差异有统计学意义 (P0.05)，表明组织分化越差 Survivin 阳性表达率越高。在 HER2 阳性乳腺癌中，Survivin 表达明显升高，且随着 HER2 表达强度的增加而升高，20例 HER2 表达的乳腺癌中，19 例 Survivin 表达阳性，阳性率为95%，与 HER2 表达及者 差异有统计学意义(P0.05) 。Survivin 表达与患者年龄、肿瘤大小、淋巴结转移、ER、PR、临床分期及病理