1大鼠鞘内注射方法的改进与验证【关键词】 注射，脊髓； 布比卡因； 疾病模型，动物大鼠鞘内给药是在脊髓水平研究药物作用的重要手段，因直接鞘内注射方法操作简单、干扰因素少，被越来越多的学者所使用。传统的鞘内注射方法为 Mestre 法，它是以穿刺时出现甩尾动作为穿刺成功的标志1,但笔者在进行动物实验过程中，发现该判断标志存在争议，为此，笔者对鞘内注射方法进行改进（即 New 法） ，以回抽有脑脊液或注射后出现甩尾动作为穿刺成功标志，并验证其可靠性。1 材料与方法1.1 一般资料 SD 大鼠 60 只，雌性， 911 周，体质量（32026.5）g（290340）g，由中国科学院上海实验动物中心提供，动物合格证号 SCXK(沪)2007005 ，随机均分为 2 组，分别按 New 法和 Mestre 法进行穿刺，鞘内注射 0.5布比卡因。盐酸布比卡因（上海复星朝辉药业公司） ；异氟烷（意大利雅培公司） ；25 L 微量进样器（上海高欣玻璃仪器厂）,针头剪短至 2.5 cm，针孔长径磨至3 cm。实验者左手探及髋结节，其水平位置即为大鼠的 L5-6棘突间隙。左手拇指和中指置于大鼠 L5-6 棘突间隙两侧，并向外绷紧皮肤。以食指定位，右手持微量注射器从间隙垂直缓慢进针，出现甩尾动作时助手按压大鼠一侧颈静脉部位，注射器回抽有脑脊液后注药 10 L，注药时常又出现甩尾动作。Mestre 法组具体操作按文献1进行。观察 2 组大鼠在注射布比卡因苏醒后双后肢的瘫痪情况：有无瘫痪、针刺反应及夹尾反射。1.3 统计学处理 数据应用统计学软件 SPSS 13.0 进行处理。2组计数资料比较应用 2 检验，P0.05 为差别有统计学意义。1.4 结果 用 New 法进行鞘内注射，30 只大鼠中有 4 只未出现穿刺成功的标志，即回抽无脑脊液或注药过程未出现甩尾动作。大鼠苏醒后，Mestre 法组大鼠活动自如 14 只，针刺反应及夹尾反射均出现躲避现象，瘫痪 16 只，瘫痪率（53.3%） 。而 New 法组大鼠均出现双后肢瘫痪，两后肢不能负重、拖地以及针剌小腿无回缩，瘫痪率 100%。2 组差别有统计学意义（2=14.770,P0.05） 。2 讨 论3在动物实验中，鞘内给药是研究药物在脊髓水平作用机制的重要给药途径，而越来越多的学者利用微量进样器采用 Mestre 来进行实验研究。Mestre 法以大鼠的尾巴出现颤动或突然的侧向甩动为鞘内穿刺成功的标志，认为是注射针头触及大鼠的终丝所致，从理论上表明针头正好位于蛛网膜下腔1。本研究发现，Mestre 法组中布比卡因注射结束后有 14 只大鼠活动自如，提示药物并未注入蛛网膜下腔，说明了这种标志方法并不可靠。笔者认为由于大鼠棘突间隙较小，微量进样器的针头碰到周围神经根时同样可出现甩尾或侧身动作，而且即使微量进样器针头进入蛛网膜下腔，也不能证实针孔是否全部位于腔内，从而未能使药物全部注入蛛网膜下腔。为此，笔者改进了注射方法，以回抽到脑脊液或注射后出现甩尾动作为穿刺成功的标志，观察注射布比卡因后大鼠的双后肢瘫痪情况。结果表明，采用新法的大鼠均出现瘫痪，瘫痪率高于 Mestre 法组（P9 周） ，穿刺成功率越高。4国内报道，在大鼠清醒情况下完成鞘内穿刺给药的操作，认为这样可避免麻醉药对研究可能产生的影响3。但是笔者发现，清醒穿刺时大鼠出现明显的挣扎扭动，穿刺极难成功，并且影响到对穿刺是否成功的判断，与文献报道类似4。采用在 1.5%异氟烷浅麻醉下进行鞘内穿刺给药的办法，停药后大鼠可在 1 min 内苏醒，对随后实验研究影响很小,值得推广与进一步研究。【参考文献】1 Mestre C，Pelissier T，Fialip J，et al. A method to perform direct transcutaneous intrathecal injection in ratsJ J Pharmacol Toxicol， 1994，32(4)：197200 2 Zucker J. Central cholinergic depression reduces MAC for isoflurane in ratsJ. Anesth Analg, 1991,72(6):790795.3 王怀泉，郑 方，李文志. 清醒大鼠鞘内注射模型的制备与验证J. 中国疼痛医学杂志 , 2003,9(4):235236.4 林献忠,李继勇,陈冀衡,等. 大鼠经皮穿刺鞘内给药方法在疼痛基础研究中的应用J.