1子宫内膜癌中 p15 及 MDM2 蛋白表达作者：刘冬满 何世东 张志勇 郑寰宇【摘要 】 目的 采用流式细胞术并结合免疫组化法检测 p15 蛋白和 MDM2 蛋白在正常子宫内膜、良、恶性子宫内膜肿物组织中表达，研究其与原发性妇科恶性肿瘤的关系及三者在原发性妇科恶性肿瘤表达的相关关系。方法 采用石蜡切片，提取各个实验组的单细胞悬液，利用流式细胞术并结合免疫组织化学链霉素抗生物素蛋白过氧化酶结合法，分别检测子宫系列病变组织 p15、MDM2 表达情况。结果 从子宫肌瘤到子宫内膜癌，p15 的表达量有明显进行性增高(P1.30)5 年生存率很低。两组生存率比较有显著性差异(P0.01)；MDM2 的表达在子宫内膜样癌为 48.28% 、非子宫内膜样癌为 41.5%，都明显低于功能性子宫出血诊断性刮宫标本的 60.2%(P1.0为阳性，Fl1.0 为阴性，FI1.30 为过度表达，FI1.30 为低表达。1.2.2 免疫组化法检测 MDM2MDM2 单克隆抗体及 EnVision 复合物为 Dako 公司产品。主要步骤:病理切片常规脱蜡至水, 在 pH 为 6.0 的 0.01 mol/L 枸橼酸溶液中进行抗原修复，加入 MDM2 单抗 (MDM2 为 150 稀释) ，湿盒中 4过夜,加 EnVision 复合物室温 30 min,DAB 显色,苏木精对比染色、脱水、透明、封固。结果判断标准：光镜下组织细胞核或胞质存在棕黄色颗粒为阳性。根据阳性细胞在组织中所占面积分为 4 个等级 :50%为() 。51.3 统计学分析采用 SPSS10.0 软件包，应用 2 检验、spearman 相关分析法对研究结果进行统计学分析。2 结 果2.1 子宫内膜癌病理组织学分类与 p15 表达关系本组正常子宫平滑肌组织 10 例中 p15 表达均为阴性。子宫肌瘤 14 例中 9 例为阳性表达，只有 1 例过度表达(7%);子宫交界性癌 7 例中 5 例阳性，其中 4 例出现过度表达(57%);而子宫内膜癌 29例全部都为阳性，其中 23 例过度表达(79%)，三组资料间差异有显著性(P0.05)。可见从子宫肌瘤到子宫内膜癌，p15 的表达量明显进行性增高(P1.30)，5 年生存率很低，小于 50%。经统计学处理，两组生存率比较有显著性差异6(P0.01)。2.3 MDM2 蛋白表达情况 MDM2 的表达在子宫内膜样癌为48.28%、非子宫内膜样癌为 41.5%，都明显低于功能性子宫出血诊断性刮宫标本的 60.2%(P0.01)。3 讨 论肿瘤的发生是一个多因素多步骤的慢性病理过程。近年来研究表明细胞周期的失控是导致肿瘤发生的重要原因。而细胞增殖的关键是 G1 期的启动。G1 期的启动除受周期素(Cyclin) 和周期素依赖性激酶(Cyclindependentknases,CDK) 的正向控制外,还受到一些细胞周期调控相关基因的制约。如果这种负向调控作用丧失,细胞就会生长失控、转化,导致肿瘤的发生2 。 p15 基因又称多肿瘤抑制基因 MTS2,定位于人染色体 9P21 区,所编码的 p15 蛋白为细胞周期蛋白 D/CDK 激酶的抑制因子,p15 蛋白与 CDK4 和 CDK6 结合,抑制CDK4cyclinD 和 CDK6cyclinD,抑制细胞增殖。 p15 基因纯合子缺失或过度甲基化导致该基因失活,使细胞无限制生长。p15 蛋白的表达和子宫内膜癌的关系比较密切，p16 和 p15 的表达具有一致性，且功能上有一定的互补作用3 ，4 。本文将子宫内膜癌的 p15 特征与其组织学各主要指标进行对比研究发现，随着细胞分裂相的增加及细胞异型性和细胞密度的增大，7p15 表达量明显增高。当分裂相增多或出现轻度异型性，p15 表达量明显增高，并绝大多数为过度表达。所以，子宫内膜癌诊断中，一旦发现细胞分裂相或轻度异型性就诊断为恶性。Combart 等研究发现 p15 基因的纯合子缺失出现在 p16 基因发生纯合子缺失时,而 p16 发生纯合子缺失时不一定出现 p15 的缺失,故认为 p15 可能补充 p16 的缺失。目前已公认 p16 缺失导致肿瘤的发生,但如果再有 p15 的缺失则更易导致肿瘤的发生。 Kudoh 等5对 p16 及 p15 基因与卵巢癌化疗敏感性的关系进行研究发现，铂类化疗 6 个月后，经二次手术证实，不敏感组的 p16 及 p15 基因缺失率较敏感组明显升高，而且 p16、p15 基因缺失者的预后也较基因表达者更差。总之，本组资料中，50 例原发性子宫内膜癌中MDM2 蛋白的表达阳性率为 48.28%，因而说明原发性子宫内膜癌中同时存在 p15、p16 基因的改变。原发性子宫内膜癌组织中 p16与 p15 蛋白表达的相关性研究为探讨妇科肿瘤的发病机制提供了重要依据,并为临床上对妇科恶性肿瘤的诊断和监控提供了辅助手段。本组观察到 p15 低表达的患者 5 年生存率为 100%，而过度表达者5 年生存率明显降低(50%)，可见 p15 过度表达时肿瘤分化差、恶性度高、预后差。所以 p15 表达可作为判断子宫内膜癌病人预后的一项客观指标。【参考文献】81 Kamb A，Gru NA，WeaverFeldhaus J，et al.A cell cycle regulator potentially involved in genesis of many tumor typesJ.Science， 1994；264:43640.2 Peter M，Herskowitz I.Joining the complex： cyclindependent Kinase inhibitory proteins and the cell cycleJ.Cell,1994;79:181.3 张丽志.p16 和 p15 基因在子宫内膜癌中的表达J.吉林大学学报(医学版 )，2005；31（1）：11820.4 夏瑾瑜.原发性子宫内膜癌组织 p15 基因及其蛋白的表达J.齐鲁医学杂志，2002；17（4）：2835.5 Kudoh K， Hikawa Y，Yoshida S,et al.Inactivation of P16/CDKN2 and PIS/MTS2 is associated with prognosis and response to chemotherapy in ovarian cancerJ.Int J Cancer，2002 ；99(4)：57982.