细胞爬片的免疫组化（05-9-25）实验目的：1、通过免疫组化的方法观察 C6 细胞 GFAP 和 MAP2 的表达情况；2、进一步熟悉和完善免疫组化的方法；3、进一步检测现有一抗是否起作用。实验准备：1、接种两天、生长状态良好的细胞爬片；2、免疫组化/荧光公共实验平台；3、一抗，SP 试剂盒，DAB 显色剂等。主要过程：1、爬片弃废液，PBS 洗 3min3 遍；2、4PFA 室温固定 10min；3、PBS 洗 3min3 遍；4、加 SP 试剂盒中的 A（过氧化物酶阻断剂） ，室温作用 10min；5、PBS 洗 3min3 遍；6、加 B（正常非免疫动物血清封闭液） ，室温作用 10min；7、加一抗：mouse anti GFAP 1：50，MAP2 1：50 各 50l 对照加等量PBS， 4保湿 8h；8、PBS 洗 3min遍；9、加 C（生物素化二抗） ，室温作用 10min；10、 PBS 洗 3min3 遍；11、 加 D，室温作用 10min；12、 PBS 洗 3min3 遍；13、 新鲜配制的 DAB 显色，显微镜下观察，适时终止（5min 左右，PBS 洗掉） ；14、 PBS 洗 3min3 遍；15、 苏木素复染胞核 1min，自来水小心冲洗至玻片呈蓝色；16、 梯度酒精脱水（70、80、90、95、100）各 5min；17、 二甲苯/无水乙醇 1：1 10min；18、 二甲苯透明：15min2；中性树胶封片，观察、拍照。